微生物降解枸杞農(nóng)藥殘留的研究

1、微生物降解枸杞農(nóng)藥殘留的研究 寧夏大學(xué)碩士學(xué)位論文微生物降解枸杞農(nóng)藥殘留的研究姓名:賈瑋瑋申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):食品科學(xué)指導(dǎo)教師:劉敦華20100301摘要微生物降解農(nóng)藥殘留對無公害枸杞的生產(chǎn),降低環(huán)境及枸杞的農(nóng)藥殘留有重要意義。本研究采用富集培養(yǎng)的方法,對取自。夏長期種植枸杞.十壤中的十著菌進(jìn)行培養(yǎng)馴化,分離篩選出可降解擬除蟲菊酯,啶蟲脒,吡蟲啉農(nóng)藥的優(yōu)勢菌種,通過觀察菌體形態(tài)、生理生化實驗對菌株進(jìn)行初步鑒定,研究菌株對不同農(nóng)藥的最人耐受量,及對擬除蟲菊酯農(nóng)藥的降解率,確定高效降解菌株。經(jīng)實驗分離得到株降解菌,得出以下結(jié)論:.菌株為微球菌科微球菌屬 ,在普通液體培養(yǎng)基中生長良好,在小時后進(jìn)

2、入對數(shù)生艮期,小時后進(jìn)入穩(wěn)定期。在以啶蟲脒,吡蟲啉農(nóng)藥為唯一碳源的培養(yǎng)集中無法生長。菌株最人農(nóng)藥耐受濃度:溴氰菊酯、順式氯氰菊酯均為/。五天后,菌株對溴氰菊酯的降解率為.%,對氯氰菊酯的降解率為.%。.菌株為假單包菌科假單胞菌屬菌。在人約小時后進(jìn)入對數(shù)生長期,在小時后進(jìn)入穩(wěn)定期。菌株的最人農(nóng)藥耐受濃度:溴氰菊酯/、順式氯氰菊酯/、啶蟲脒、毗蟲啉。五天后,對溴氰菊酯的降解率為.%,對氯氰菊酯的降解率為.%。.菌株為假單包菌科假單胞菌屬菌。在普通液體培養(yǎng)基中生長,火約小時后進(jìn)入對數(shù)生期,人約小時后進(jìn)入穩(wěn)定期。菌株的最人農(nóng)藥耐受濃度:溴氰菊酯/、順式氯氰菊酯/、啶蟲脒/、吡蟲啉/。五天后,菌株對溴氰

3、菊酯的降解率為.%,對氯氰菊酯的降解率為.%。.菌株為假單包菌科假單胞菌屬菌。在普通液體培養(yǎng)基中生長小時后進(jìn)入對數(shù)生長期,小時后進(jìn)入穩(wěn)定期。菌株的最人農(nóng)約耐受濃度:溴氰菊酯幾、順式氯氰菊酯幾、啶蟲脒.。、吡蟲啉。五天后,菌株對溴氰菊酯的降解率能達(dá).%,對氯氰菊酯的降解率為.%。.菌株為假單包菌科假單胞菌屬菌。在普通液體培養(yǎng)基中生長小時后進(jìn)入對數(shù)生長期,小時后進(jìn)入穩(wěn)定期。菌株的最人農(nóng)約耐受濃度:溴氰菊酯/、順式氯氰菊酯/、啶蟲脒/、毗蟲啉.,。菌株對兩種農(nóng)藥的降解作用比其他菌株弱:五天后,對溴氰菊酯的降解率能達(dá).%,對氯氰菊酯的降解率為.%。.根據(jù)以上測定結(jié)果,為高效降解溴氰菊酯兇株,為商效降解

4、氯氰菊酯菌株。關(guān)鍵詞:降解菌,篩選,分離鑒定,降解率: . , ,., , , .: ,., ,.:/. , . %.%., .,: /,/,/, /. . .%.%. ., ,.:/./, /, /, .%.%,.,: /,/, /. , /.%.%.如 ., ,: /, /, , /. . .%.%,. , , .: , ,獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得寧夏大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我同工作的同志對本研究所做的任

5、何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:時間:矽年/烏多日炙書和關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解寧夏大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意寧夏大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議時問:夕咖年/久日隊,夕研究?:砩易時間:夕薛月三日剔醴較承欽竿寧夏人學(xué)碩學(xué)位論文 第一章緒論第一章緒論農(nóng)藥主要是指用以防治農(nóng)作物生長和農(nóng)產(chǎn)品貯存的病、蟲、鼠、草害的一類化合物。已廣。泛用于農(nóng)、林、牧業(yè)生產(chǎn)及果園、糧庫管理

6、。農(nóng)藥的使用無疑對防卜病蟲害侵袋、保護(hù)作物、提高糧食產(chǎn)量以及人類傳染病的預(yù)防控制等方面發(fā)揮了不可磨滅的作。據(jù)有關(guān)部 分析,停明農(nóng)藥將會使農(nóng)業(yè)至少減產(chǎn)%以上,這對丁人口負(fù)擔(dān)愈來愈重的世界來說是絕難接受的川。然而,農(nóng)藥的使朋不當(dāng)給人類造成了一系列的農(nóng)藥公害問題,如環(huán)境污染日趨嚴(yán)重、農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留大大超標(biāo)和各種疾病增多等,嚴(yán)重威脅著人類的健康,破壞農(nóng)業(yè)生態(tài)平衡【。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的不斷提高,人們對生活質(zhì)量提出了更高的要求。環(huán)境污染和食品安全問題日趨成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。無公害、無污染、安全、優(yōu)質(zhì)和營養(yǎng)的綠色食品越米越受劍人們的青睞。岡此,如何有效地避免農(nóng)藥殘留對環(huán)境及人類的損害己成為人

7、類叢待解決的重要問題。.農(nóng)藥的危害隨著世界人口的增加及耕地的減少,人口與糧食問題成為人類面臨的嚴(yán)重挑戰(zhàn)。農(nóng)藥成為提高單位面積產(chǎn)量,保證糧食穩(wěn)產(chǎn)、豐產(chǎn),緩解人口與糧食問題必不可少的具。據(jù)世界糧農(nóng)組織估計,若不使用化學(xué)農(nóng)藥,全世界糧食將減產(chǎn)%我國是農(nóng)業(yè)大國,每年平均病蟲害約億畝次,施用農(nóng)藥的防治面積約億畝次,據(jù)農(nóng)業(yè)部門統(tǒng)計,由丁使用農(nóng)藥,我國平均每年挽回糧食萬噸、。棉花擔(dān)、蔬菜萬噸,果品萬噸,減少直接經(jīng)濟(jì)損失億元【】。農(nóng)藥對農(nóng)田滅鼠、倉儲防蛀、衛(wèi)生防疫、園林綠化等方面也起著越來越重要的作用。目前世界上生產(chǎn)的農(nóng)藥品種主要有種,其中種殺蟲劑和殺蜻劑,種除草荊,種殺菌劑,其余是植物生長調(diào):裕劑和驅(qū)避劑。

8、經(jīng)常大量使川的有多種。國家質(zhì)檢總局公布的數(shù)據(jù)顯示,我國已經(jīng)成為世界第二人農(nóng)藥生產(chǎn)國,年中國農(nóng)藥產(chǎn)量高達(dá).萬噸,比上年增長,%。我國農(nóng)藥年使用量萬萬噸,居世界首位,常用農(nóng)藥有種。農(nóng)藥對環(huán)境的影響是多方面的,有有益的方面也有有害的方面。農(nóng)藥在防治農(nóng)作物病蟲害,挽同農(nóng)產(chǎn)品損失,保障人類基本生活條件等方面發(fā)揮著北常重要的作朋。但是食品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)和飲用水的農(nóng)藥污染,間接引起動物、人體的慢性中毒、畸形等現(xiàn)象不斷發(fā)生。岡農(nóng)約施.不當(dāng),破壞生態(tài)環(huán)境,危害人類健康的問題日益嚴(yán)重。.對大氣的影響大氣中的農(nóng)藥污染主要來白農(nóng)藥廠排出的廢氣、農(nóng)藥噴灑時的擴(kuò)散、殘留農(nóng)藥的揮發(fā)等,且以農(nóng)藥廠排出的廢氣為最嚴(yán)重。噴灑到

9、大氣中的化學(xué)農(nóng)藥微粒在氣流的作用下可漂移劍數(shù)里遠(yuǎn)的地方;噴灑到植物表面或十壤的化學(xué)農(nóng)藥,在氣流的作用下也可飛揚(yáng)劍空氣中,造成人氣污染。人們已從世界屋脊青藏高原的南迎巴瓦峰海拔概雪中檢測出有機(jī)磷農(nóng)列。約劑分子也可被大氣中漂浮的粒子所吸附。尤其是有機(jī)氯殺蟲劑如、狄氏劑、六六六等的吸附率達(dá)半第一幸緒論寧夏人學(xué)碩:學(xué)位論文數(shù)以上【。大氣中殘留農(nóng)藥的危害主要表現(xiàn)在兩方面一方面施藥人員吸入含藥的空氣造成中毒;另一方面隨風(fēng)飄移的農(nóng)藥對非靶標(biāo)區(qū)的作物造成藥害¨。.對水的影響農(nóng)藥對水體的污染主要分為對地表水和地下水的污染【】。造成農(nóng)藥對水質(zhì)污染的主要原岡:近水道農(nóng)藥的噴灑,下水道排水;米白使剛農(nóng)藥區(qū)域

10、的徑流;不規(guī)范的處理農(nóng)藥容器在田間滲水坑處理廢農(nóng)藥不當(dāng):清洗噴灑儲存農(nóng)藥的設(shè)備或農(nóng)藥污染的設(shè)備:農(nóng)藥泄漏;農(nóng)藥污染的十壤淋溶;人氣污染物的干濕沉降等【。農(nóng)藥對地表水資源的污染已引起人們高度的重視。黃河水資源保護(hù)研究所在連續(xù)二年對黃河三、峽劍花園口河段的農(nóng)藥污染現(xiàn)狀進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果表明八六入的檢出率為%;含量為.“/。由于農(nóng)藥的過鼙使用,太湖流域一帶的稻田中水生生物人量減少,稻田里魚、蝦幾乎消失瞵。農(nóng)藥對地下水資源的污染也十分嚴(yán)重。據(jù)國家環(huán)保局南京環(huán)科所的研究報道,涕滅威、峽喃丹、拉索等農(nóng)藥施后,在一些地下水位較高,沙性重的十壤地區(qū),農(nóng)藥極易進(jìn)入地卜.水中,農(nóng)藥一旦進(jìn)入地卜.水,極雉降解,降解半衰

11、期常在一年以上。由于地卜.水被污染后難以進(jìn)行處理,并進(jìn)入水井、河流等飲用水源,對人民的身心健康具有極人的威脅】。.對土壤的影響土壤中農(nóng)藥的主要來源有:農(nóng)藥生產(chǎn)、加上過程中的廢液排放;農(nóng)田農(nóng)藥使用;農(nóng)藥氣體沉降以及農(nóng)藥運(yùn)輸過程中的泄漏。土壤是農(nóng)藥在環(huán)境中的“貯藏庫”與“集散地”,由丁利川率低,施入十壤的農(nóng)藥人部分殘留于土壤中。研究還表明施農(nóng)約后,僅有%的約作剛丁.防治對象本體,有%附著在作物本體上,其他%的農(nóng)藥主要散落在農(nóng)作物的周邊環(huán)境,如農(nóng)田、十壤或漂浮于大氣,與塵埃吸附形成氣溶膠.構(gòu)成對環(huán)境的滿在危害【叫。農(nóng)藥使用中的低效率,不僅浪費(fèi)了人量農(nóng)藥,還造成大氣、土壤污染。.對人體的影響環(huán)境中的化

12、學(xué)農(nóng)藥可通過消化道、呼吸道和皮膚等途徑進(jìn)入人體,對身體健康產(chǎn)生各種危害。化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)人人體后,首先進(jìn)入血液,然后通過組織細(xì)胞膜和血腦屏障等組織,到達(dá)作剛部位,引起中毒反應(yīng)。短期內(nèi)攝人人量化學(xué)農(nóng)藥,尤其是有機(jī)磷農(nóng)約,會引起急性中毒,長期人量攝入則會在人體的脂肪中內(nèi)蓄積【”】。通過對有機(jī)磷農(nóng)藥的研究可知,化學(xué)農(nóng)藥還會對神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生作用。會引起患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常,出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)、震顫、思睡、精神錯亂、抑郁、記憶力減退和語言失常等。對機(jī)體的免疫功能的影響主要表現(xiàn)在兩個方面:一方面是某些化學(xué)農(nóng)藥可使機(jī)體發(fā)生致敏作用。這是由于某些有機(jī)磷化合物具有半抗原性,它們可與體內(nèi)蛋向質(zhì)等結(jié)合成為復(fù)合抗原,從而產(chǎn)生抗

13、體,使機(jī)體發(fā)生過敏反應(yīng)而損害機(jī)體健康。另一方面是某些化學(xué)農(nóng)藥本身具有免疫抑制作用。例如,敵百蟲可使受試動物的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能降,從而降低機(jī)體寧夏人學(xué)碩學(xué)位論丈 第一一章緒論? 皇曼舅曼曼皇?一的抵抗力。敵百蟲、敵敵畏和樂果對動物都有致突變作用;內(nèi)吸磷、倍硫磷和二嗦農(nóng)對動物都有致畸作用;在氨基甲酸醋類農(nóng)藥方面,西維因?qū)﹄嗍蠛凸范加兄禄饔谩?對食品的污染農(nóng)藥殘留對食品安全構(gòu)成的威脅就是殘藥超標(biāo)。食鼎中的農(nóng)藥殘留一般可來自三個方面【】:一是施約后對作物的直接污染,這一岡素不僅取決丁農(nóng)約的性質(zhì)、劑型,還與施藥方法和作物的品種特性有關(guān);二是作物從污染的環(huán)境中對農(nóng)藥的吸收;三是食物鏈與生物富集效應(yīng)

14、。從目前農(nóng)藥使用情況看,高毒農(nóng)藥使量人,使用次數(shù)頻繁是造成某些食品,特別是蔬菜、水果農(nóng)藥殘留超標(biāo)的主要原岡。對于毒性低的農(nóng)藥,若朋餐人或使用不當(dāng)也同樣可造成對某些食品的污染。在重點(diǎn)抽查的個大中城市的人型蔬菜批發(fā)市場的菜花、甭茄、甘藍(lán)、黃瓜、茄子、韭菜、油菜等多類種蔬菜中,有種蔬菜農(nóng)藥殘留量超過國家標(biāo)準(zhǔn)限量值,超標(biāo)值為.%。每年發(fā)生農(nóng)藥中毒事故幾萬起。全世界每年有萬人岡農(nóng)藥中毒而喪生崢】,蔬菜、水果、茶葉中農(nóng)藥殘留超標(biāo)的報告頻頻出現(xiàn),蔬菜中農(nóng)藥殘留超標(biāo)已成為近年威脅白.姓餐桌的突出問題。農(nóng)藥在我國果樹病蟲害防治中發(fā)揮著巨大作用,但許多果農(nóng)在果樹生產(chǎn)中使用農(nóng)藥不夠科學(xué)合理,帶有很人的隨意性和盲目性

15、,并且,國家禁止在果樹上使朋的農(nóng)藥,有些地方仍在果樹生產(chǎn)中姚遍、大量使用,形成了禁而不.卜的局面,致使果實農(nóng)藥殘留超標(biāo),環(huán)境受到污染,人音健康受劍危害,年劉炳?！镜葯z測發(fā)現(xiàn),農(nóng)約使次數(shù)多、用藥量人的蘋果同,果實中滴滴涕的檢出率和超標(biāo)率高達(dá).%和.%,甲基對硫磷和乙基對硫磷的檢出率分別為.%和.%,總超標(biāo)率為.%。年馮建國【等人對山東主產(chǎn)區(qū)的蘋果進(jìn)行了調(diào)查,在被檢測的種農(nóng)藥中,有種農(nóng)藥檢出率超過了%,其中,澳氰菊醋和辛硫磷的檢出率均為%,滴滴涕和對硫磷的超標(biāo)率分別為.%和.%,最高超標(biāo)倍數(shù)達(dá)劍標(biāo)準(zhǔn)的.倍和.倍。因此提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全,增強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品市場競爭能力,是我國農(nóng)業(yè)進(jìn)入新的發(fā)展階段后,農(nóng)村經(jīng)濟(jì)

16、:作的戰(zhàn)略任務(wù)。.農(nóng)藥殘留的微生物修復(fù)研究農(nóng)藥殘留的解決有多種途徑包括,禁用農(nóng)藥、傳統(tǒng)的化學(xué)處理方法和微生物降解。從目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的實際來看,農(nóng)藥在植物保護(hù)中的重要地位不可動搖,還不能采取以禁農(nóng)藥米解決農(nóng)藥處理或焚燒、掩殘留的有機(jī)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)模式;傳統(tǒng)的方法是采取化學(xué)法,以./埋,這些方法的副作用大,往往造成環(huán)境的二次污染,并且作很慢。物化方法對丁.規(guī)模較小的污染源或農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)殘降解在一定程度上還是可行的,但對人規(guī)模的面源污染則無能為力,而且物化方法處理不徹底,無法從根本解決農(nóng)藥殘留問題引。隨著農(nóng)藥殘留問題的日益突出和人們環(huán)保意識的提高,解決污染問題的手段與方法不斷地被提出和更新。其中,微生物降解在

17、農(nóng)藥殘留的降解方面起著卜常重要的作用。生物降解就是通過生物包括各種微生物、植物和動物的作用將犬分子分解成小分子化合物的過程。對農(nóng)藥的微生物降解,目前主要集中在對農(nóng)藥殘留污染的土壤和水體的生物修復(fù),采用降解菌和降解酶兩個寧夏人學(xué)碩學(xué)位論丈 第一章緒論.;曼曼皇曼皇曼曼鼉曼皇曼曼曼曼皇曼曼曼曼曼皇鼉曼蔓曼曼曼曼皇曼舅量曼曼曼皇曼曼曼曼舅曼曼曼曼量曼曼曼曼曼皇曼曼曼曼曼曼曼寰一一?方面。對降解農(nóng)藥的種類,在國外以,.,口特拉津等除草劑研究較多,在國內(nèi)對甲胺磷、樂果等有機(jī)磷殺蟲劑研究較多,有機(jī)氯、菊脂類和除草劑降解也有一些人做過研究。.可降解農(nóng)藥的微生物菌株的篩選迄今為止,各國研究人員已從十壤、污泥、

18、污水、天然水體垃圾場和廄肥中分離到降解不同農(nóng)藥的活性微生物,包括細(xì)菌、真菌,放線菌、藻類等,但主要是集中細(xì)菌上,并以細(xì)菌研究較,具有很強(qiáng)的降解廣譜性,所分為深入。在這些微生物中,往往一種微生物可以降解多種農(nóng)藥【離得到的這些農(nóng)藥降解菌株為解決我國農(nóng)藥殘留問題奠定了一定基礎(chǔ)。細(xì)菌:假單胞菌屬,芽胞桿菌屬,節(jié)細(xì)菌屬,黃桿兇屬;真菌:曲霉屬盼【】,青 屬,根霉屬,霉屬【,鐮刀菌屬,交鏈菌屬,頭孢菌屬,毛霉屬,膠霉屬,鏈孢霉屬朋憷等【;放線菌:主要分布在鏈霉菌屬缸.印髓中卅;藻類:主要分布在小球藻屬俐。這些微生物中,往往研究主要集中在降解菌的分離、篩選、鑒定及生理特性研究【、誘變育種【】、降解機(jī)理、降解

19、基因及構(gòu)建程菌的研究、治理.:藝的研究特別是州定化微生物處理化學(xué)上業(yè)廢水受到越米越多的關(guān)注、降解菌在十壤中對農(nóng)藥的降解性能與影響岡素研究、降解菌的生態(tài)效應(yīng)等方面。.降解酶的研究由于農(nóng)藥的微生物降解實質(zhì)上就是酶促降解,岡此,對降解酶的研究引起了人們的極大關(guān)注。目前對酶的研究主要有:從微生物體中提取酶并在室內(nèi)純培養(yǎng)條件下研究菌株適宜的產(chǎn)酶條件,酶的提取純化條件、粗酶液及純酶的溫度、穩(wěn)定性及保持其降解活性的最適條件。進(jìn)行十壤酶學(xué)研究,了解酶在土壤中降解農(nóng)藥的生化機(jī)制,并對采朋酶修復(fù)十壤農(nóng)藥污染進(jìn)行探討。研究酶的同定化技術(shù),將酶同定于特定的載體上,處理十壤和水體中的農(nóng)藥殘留污染。酶是一種蛋白質(zhì)分子,以

20、游離狀態(tài)存在的酶易受環(huán)境條件變化的影響而失活。司定化酶往對熱、等的極端環(huán)境下的穩(wěn)定性有人幅度提高,對抑制劑的敏感性降低,抗分解的能力增強(qiáng),而且同定化酶經(jīng)過簡單的過濾或離心可以同收,重復(fù)使用,有較高的利剛效率,有利丁.降低成本;同定化酶適合于連續(xù)化自動化作業(yè),催化過程容易控制。研究農(nóng)藥降解酶基因的克隆與表達(dá)。由于微生物對農(nóng)藥的降解往往只能征對某一種或某一類農(nóng)藥進(jìn)行降解,這就限制了它慮片范圍。而農(nóng)藥降解酶基因的克隆與表達(dá)可以構(gòu)建降解譜廣、降解徹底的工程菌,為微生物降解農(nóng)藥開辟新途徑。寧夏人學(xué)碩十學(xué)位論文 第一章緒論? . ? ;? ?一一.一鼉曼曼曼詈曼曼蔓量皇曼曼皇曼皇曼曼曼舅曼鼉曼.在農(nóng)產(chǎn)品生

21、產(chǎn)中應(yīng)用的研究相對于環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域中的農(nóng)藥殘留治理研究,農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留控制卻是一個新的課題。特別是用于微生物降解農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留研究的更少。國外有人用食纖維細(xì)菌和真菌處理噴有草甘麟和.的葉面,該菌荊能加速葉面農(nóng)藥的分解。國內(nèi)的研究主要有:丁海濤從江蘇省各地農(nóng)藥廠采集的活性污泥中分離得到一株牙抱桿菌,該菌株可有效去除殘留丁土壤表面的氰戊菊酷農(nóng)藥;王永杰等篩選到系列降解農(nóng)藥的優(yōu)良菌株,并通過生物原位修復(fù)技術(shù),應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,清除.十壤和作物中的農(nóng)藥殘留對人米和蔬菜中的農(nóng)藥殘留去除率達(dá)%以上;程國鋒等對蔬菜中甲胺磷和樂果殘留進(jìn)行微生物降解的研究,施降解菌對殘留農(nóng)藥有明顯的去除作用;印天壽用微生物

22、制劑“百株”對食品在食用前進(jìn)行定時間的浸泡洗滌后解毒降毒;福建省農(nóng)科院茶葉研究所曾成功地應(yīng)朋特種微生物,使產(chǎn)品的農(nóng)殘不超標(biāo);福建農(nóng)林人學(xué)方玲用能降解有機(jī)氯的復(fù)合菌劑對茶園士壤和茶葉中的有機(jī)氯玄除,該菌劑對有機(jī)氯農(nóng)藥有獨(dú)特的效果;竺錫武等對作物中使用農(nóng)藥殘留降解劑去農(nóng)藥殘留,具有良好的去除效果【枷】。.擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的微生物研究現(xiàn)狀.擬除蟲菊酯類農(nóng)藥簡介擬除蟲菊酯 是目前使量僅次丁有機(jī)磷的第二大類殺蟲劑,約.世界殺蟲劑市場的%,在我國的施用面積已占?xì)⑾x劑總施用面積的/以上。此類殺蟲劑以天然除蟲菊為基礎(chǔ)而發(fā)展起來,克服了天然菊酯持久性差、易光解等缺點(diǎn)【,沒有天然菊酯安全【,但毒性相對有機(jī)磷類較低

23、【舶】。等人根據(jù)電生理特征、中毒癥狀、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)把擬除蟲菊酯殺蟲劑劃分為兩個類型:類型包括天然除蟲菊酯、無苯氧基芐基醇的擬除蟲菊酯如丙烯菊酯、胺菊酯和無氰基的.苯氧卞基醇的擬除蟲菊酯如二氯苯醚菊酯、。類型即含有.氰基.苯氧芐基醇的擬除蟲菊酯如氰戊菊酯、氯氰菊酯。目前,較為常用的擬除蟲菊酯農(nóng)約主要有氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯。它們在結(jié)構(gòu)上相似,取代基不同,使得它們各自的半衰期不同,其生物轉(zhuǎn)化的難易程度和相應(yīng)毒性也有很大差異刀。研究發(fā)現(xiàn):常見擬除蟲菊酯毒性依次為三氟氯氰菊酯溴氰菊酯氯氰菊酯氰戊菊酯氯菊酯,即含.氰基比不含。.氰基毒性大,有鹵原子取代則毒性增加,且毒性隨鹵原子相對分子質(zhì)量的加

24、大而增加引。氯菊酯的毒性相對最弱,并且在環(huán)境中易下降解,主要應(yīng)用于家庭害蟲的防治,而氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯等毒性較高,但在環(huán)境中也不易降解,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用非常普遍。.氯氰菊酯的性質(zhì)氯氰菊酯由.等人于年合成,屬環(huán)丙烷羧酸類的鹵代菊酸系列,化學(xué)名稱.廣。一叫下怕/、/.溴氰菊酯的性質(zhì)【溴氰菊酯,化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖.所示,分子式為,相對分子量為.,化學(xué)名稱為弘氰基苯氧基芐基.,.二二溴乙烯基,二二基甲環(huán)丙烷羧酸酯。原藥為白色粉末,無味,用異丙醇重結(jié)晶為斜方形針狀晶體:溶點(diǎn);溶解度:水/,溶于多種有機(jī)溶劑;酸性溶液中穩(wěn)定,堿性溶液中不穩(wěn)定。溴氰菊酯為中等毒殺蟲劑。其殺蟲活性高,以觸殺和胃毒作為主,

25、對害蟲有一定的驅(qū)避與拒食作崩,但無內(nèi)吸及熏蒸作用。殺蟲譜廣,擊倒速度,但對螨類無效,適用丁棉花、葉菜、茶、蘋果、柑桔等作物。并可用于防治森林松毛蟲,倉儲害蟲及衛(wèi)生害蟲。日圖.溴氰菊酯化學(xué)結(jié)構(gòu)式一寧夏人學(xué)碩:學(xué)位論文 第一幸緒論曼曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼曼曼曼曼曼?.量曼寰曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼曼舅曼璺曼曼曼曼鼉.擬除蟲菊醋類農(nóng)藥微生物降解的研究進(jìn)展早在上世紀(jì)年代,部分科研工作者已經(jīng)開始著手研究擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)化和微生物降解。年, .等將十壤與擬除蟲菊酯混合培養(yǎng)一段時間,分別隔個月、個月、個月、個月取出一定量的土壤,檢測其中細(xì)菌、真菌、放線菌的含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn):細(xì)菌和放線菌與擬除蟲菊酯的降解有密切關(guān)

26、系,而真菌對之影響不人【。并且 .從土壤中分離得到了紅球菌 ,隨后 .渺】從十壤中篩選分離了蠟狀芽孢桿菌,熒光假單胞菌 并無色菌 .;近些和產(chǎn)年,我國陸續(xù)也有地農(nóng)芽孢桿菌嶺、陰溝腸桿菌堿菌屬 .【】的報道。目前,有關(guān)擬除蟲菊酯農(nóng)藥微生物降解:作土要集中在篩選菌株方面,已經(jīng)篩選的菌株不僅數(shù)量有限,對擬除蟲菊酯的降解效率也不是很高。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的微生物降解和其它殺蟲劑的微生物降解一樣,其實質(zhì)都是酶促降解,而且降解酶具有廣譜性、耐受環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)。因此,擬除蟲菊酯降解酶的研究成為蔬菜、瓜果、茶葉.等農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留降解的新的思路和方法。年,對微生物在純培養(yǎng)條件下對擬除蟲菊酯的降解途

27、徑做了深入研究,發(fā)現(xiàn)在氯菊酯微生物降解過程中,其代謝方式只有氧化和水解兩種。在它的代謝產(chǎn)物中,有羥化代謝物,羥化代謝后與葡萄糖結(jié)合的產(chǎn)物;水解代謝產(chǎn)物,即二氯苯醚菊酸及二氯苯醚菊醇;水解代謝后的軛合產(chǎn)物;研究證明:除蟲菊酯主要是氧化代謝,而除蟲菊酯氯菊酯、溴氰菊酯等氧化、水解同樣重要。擬除蟲菊酯是在酸的部分上兩個甲基被氧化,但是對于一級醇的酯類,氧化代謝可能不是這樣重要,因為酯解更容易發(fā)生。而且在好氧條件下,擬除蟲菊酯農(nóng)藥的微生物降解中,氯菊酯最容易被轉(zhuǎn)化,溴氰菊酯最難發(fā)生轉(zhuǎn)化。在許多新的除蟲菊酯類似物中,酯解比氧化更為重要,但氧化在酯解后仍然發(fā)生。目前,對酶在菊酯類農(nóng)藥生物修復(fù)中的作用研究,

28、主要集中在對外部環(huán)境條件的要求、酶的降解效能、酶的降解譜、酶的降解機(jī)理、酶的分離純化以及酶的同定化等。此外,菊酯降解酶基】從蠟狀芽因的克隆與表達(dá)正成為生物修復(fù)領(lǐng)域的一個新的研究方向與研究熱點(diǎn)。.等孢桿菌通過離子交換層析、凝膠過濾層析等方法分離純化了一種羧酸酯酶一氯菊酯酶,其相對分子繭為,其最適為.,最適溫度為。酶分子發(fā)揮活力時不需要輔酶或輔網(wǎng)子,酶分子在有機(jī)物焦磷酸四乙酯存在于/級濃度的條件下非常敏感,活性受到抑制,因此作者推測其活性中心有一個絲氨酸,外加二硫蘇糖醇能夠使得對一氯汞基苯甲酸鹽以及.乙基順烯二酰亞胺對酶活性的抑制作用減輕。.等】從黑曲霉中純化了菊酯水解酶,并對其性質(zhì)進(jìn)行了研究,實

29、驗表明此酶分子由一條肽鏈組成,分子量大小約為 ,等電點(diǎn)為.,酶分子發(fā)揮作削的最適為.,溫度,、對一氯汞基苯甲酸鹽是其強(qiáng)烈的抑制劑,、鄰二氮雜菲對酶活性稍微有抑制。林淦等對陰溝腸桿菌的羧酸酯酶進(jìn)行了純化實驗,蛋白染色為一條主帶,該降解酶的分子量約為 ,等電聚焦測得酶的等電點(diǎn)為.。虞云龍【嘶】等用海藻酸鈣凝膠將產(chǎn)堿菌屬髓.菌中提取的降解酶進(jìn)行司定化,測定了同定化酶對氰戊菊酯、殺滅菊酯的降解特性,并制成了同定化酶反應(yīng)器,為降解酶投第一審緒論寧夏人碩:學(xué)何論文入實際生物修復(fù)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。.啶蟲脒的微生物研究現(xiàn)狀.啶蟲脒類農(nóng)藥簡介啶蟲脒義名乙蟲脒、吡蟲清、莫比朗,通剛名:;商品名:代號:。其化學(xué)名稱為

30、:.【一氯.毗啶甲基】.氰基.甲基乙脒結(jié)構(gòu)式見圖.;分子量./,化學(xué)結(jié)構(gòu)式圖.。啶蟲瞇屬于氯化熘?；“奉愋滦透咝⑾x荊有觸殺、胃毒和內(nèi)吸殺蟲作。其殺蟲機(jī)理獨(dú)特,主要是作用丁:昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)突觸后膜的煙堿乙酰日堿受體。與目前使用的有機(jī)磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類殺蟲劑不存在交互抗性,岡而可有效地防治對上述殺蟲劑己產(chǎn)生抗性的害蟲。該藥荊 年由日本曹達(dá)株式會社研制開發(fā),年商品化,目前已.泛應(yīng)用于防治棉花、水稻、小麥、蔬菜及各種果樹上的刺吸式口器害蟲,其有效成分用量僅需/。對卜翅目如蚜蟲、蟬、粉虱等、鱗翅目如小菜蛾、許蛾、小食心蟲等、鞘翅目如天牛、猿。蟲等類害蟲均有防治作用,對人畜低毒,對害蟲大敵殺傷力

31、小,對魚毒性較低,對蜜蜂影響小。具有活性高、用量少、持效長和作用速效等優(yōu)點(diǎn)引。/圖.啶蟲脒的分子結(jié)構(gòu).微生物降解啶蟲脒農(nóng)藥的研究進(jìn)展國內(nèi)外對啶蟲脒的研究主要集中于藥效和環(huán)境毒理等方面【弭,而對其環(huán)境效應(yīng)及無害化降解研究僅有少量報道】。目前的研究結(jié)果表明,啶蟲脒在十壤中降解途徑有微生物降解、光解、水解等,其中,微生物降解是其代謝的主要途徑【】。庾琴四等研究了土壤、葉際原位和葉際可培養(yǎng)微生物對啶蟲脒的降解效果的差異,結(jié)果為原位。際微生物對啶蟲脒降解影響的程度較小,而十壤冪際分離培養(yǎng)微生物對啶蟲脒降解作用顯著。.吡蟲啉農(nóng)藥的微生物研究現(xiàn)狀.吡蟲啉類農(nóng)藥簡介寧夏人學(xué)碩。學(xué)位論文 第一一章緒論曼曼曼曼曼

32、曼曼曼曼曼蔓曼詈曼一 ; .; ?曼一一一?.一一一一吡蟲啉是世紀(jì)年代德國拜耳公司和日本特殊農(nóng)藥公司共同開發(fā)的種新型、高效、低毒殺蟲劑,其通用名為,化學(xué)名稱是“.氯.吡啶甲基.硝基咪唑.胺”,化學(xué)結(jié)構(gòu)式圖一,它具有高效、殺蟲廣譜、內(nèi)吸性強(qiáng)、持效期長、不易揮發(fā)等多種生物化學(xué)特征,能有效地防治蚜蟲、葉蟬、飛虱等刺吸式口器害蟲,可在枸杞、蔬菜、水稻、棉花等多種作物上使用,成為國內(nèi)外倍受歡迎的一種殺蟲劑。目前國內(nèi)對吡蟲啉在茶葉、蘋果、水稻、甘藍(lán)、煙草等中的殘留消解動態(tài)的研究報道頗多¨。圖吡蟲啉的分子結(jié)構(gòu).啶蟲脒及吡蟲啉農(nóng)藥的微生物降解研究現(xiàn)狀由于毗蟲啉的十壤滯留性,在使用年后,仍可在朱贏接施

33、藥的作物中檢出殘留物。因此,吡蟲啉在農(nóng)產(chǎn)品和士壤等環(huán)境中的殘留量及殘留動態(tài)是當(dāng)前農(nóng)藥殘留研究的熱點(diǎn)之一,同時找到一種有效的降解吡蟲啉的手段也是仁常重要的。目前吡蟲啉在環(huán)境中的降解機(jī)制主要有光解、水解和土壤降解。關(guān)于吡蟲啉的復(fù)合微生物降解特性方面的研究報道很少。項麗【】從長期馴化處理的活性污泥中,經(jīng)過搖瓶培養(yǎng)法,富集培養(yǎng)出降解吡蟲啉的混合菌并對其降解特性進(jìn)行研究。葛峰【】以吡蟲啉為唯一氮源分離得到一株嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌 。.課題的提出及意義擬除蟲菊酯,啶蟲脒,吡蟲啉等農(nóng)藥在殺蟲劑中據(jù)重要的地位,是農(nóng)作物生產(chǎn)中控制害蟲和病蟲媒昆蟲的重要手段。目前農(nóng)藥成為重要的化學(xué)環(huán)境污染物,直接或間接地危害人類的健

34、康。有些高毒的農(nóng)藥雖然屬丁.禁用或限用,但有些地方仍然在使用,如何消除農(nóng)約對環(huán)境和人類的危害,已成為事關(guān)人類健康和國【屯經(jīng)濟(jì)發(fā)展的問題。減少農(nóng)藥的使川是解決農(nóng)藥危害的根本出路,殘留農(nóng)藥的去除也是減小農(nóng)藥危害的有效途徑。因此,利用生物和生物產(chǎn)品來降解污染物的生物修復(fù)方法具有無毒、無殘留、無二次污染等優(yōu)點(diǎn),是高濃度的農(nóng)藥殘留消除、解毒的一種安全、有效、廉價的方法.微生物降解被認(rèn)為是生物修復(fù)法中最有效、快速的一種方法,龍其是細(xì)菌,由于細(xì)菌生化上多種適應(yīng)能力以及容易誘發(fā)突變,從而在降解農(nóng)藥的微生物中占有主要的地位。本課題主要針對枸杞生產(chǎn)中,農(nóng)藥防治病蟲害所引起的農(nóng)藥殘留問題,開發(fā)高效功能基因工寧夏人學(xué)

35、碩學(xué)化論史 第一審緒論量曼曼曼曼曼鼉曼曼皇曼曼曼曼曼曼曼鼉曼鼉曼鼉 皇曼皇曼曼曼曼量曼鼉曼曼皇曼鼉程菌,發(fā)展無公害枸杞,保障人民身體健康,并為降解菌及降解酶在生產(chǎn)上的應(yīng)用提供理論依據(jù),并為研究降解酶和分子結(jié)構(gòu)、作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。.課題的主要研究內(nèi)容降解菌的分離,篩選與鑒定臣巫怔墮寸匝巫受時圈降解菌最大耐受量的測定降解菌降解率的測定寧夏人學(xué)碩學(xué)位論史 第二:章降解枸杞農(nóng)藥殘留菌株的分離峪定第二章降解枸杞農(nóng)藥殘留菌株的分離鑒定隨著農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)的變化,寧夏栽培枸杞的主要病蟲害也不斷發(fā)生演變,化學(xué)防治所用農(nóng)藥和使用方法也隨之不斷更新,這對生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生了一定的不利影響。以生物修復(fù)為理論基礎(chǔ)的農(nóng)藥殘留降解

36、菌技術(shù)就成了降低枸杞和其生產(chǎn)環(huán)境中農(nóng)藥殘留的種重要手段。本研究采用富集培養(yǎng)的方法,對取自寧夏長期種植枸杞土壤中的土著菌進(jìn)行培養(yǎng)馴化,分離篩選出可降解擬除蟲菊酯,啶蟲脒,吡蟲啉農(nóng)藥的優(yōu)勢菌種。.實驗材料十樣米源:土樣取自寧夏南梁噴灑農(nóng)藥且長期種植枸杞的農(nóng)田。.實驗儀器電子分析天平:梅特勒.托利多儀器上海有限公司;不銹鋼手提式壓力消毒器:上海佳滕實驗設(shè)備有限公司實驗設(shè)備廠;.實驗室計:上海精密科學(xué)儀器有限公司;分光光度計:上海精密科學(xué)儀器有限公司;光學(xué)顯微鏡:麥克奧迪實業(yè)集團(tuán)有限公司。.實驗試劑與培養(yǎng)基.實驗試劑農(nóng)藥試劑:敵殺死:,溴氰菊酯乳油,拜耳作物科學(xué)中國有限公司;阿耳法特:/順式氯氰菊酯乳

37、油,新加坡利農(nóng)私有有限公司;閃劍:/啶蟲脒乳油,濟(jì)南綠霸化學(xué)品有限責(zé)任公司;撲虱蚜:吡蟲啉,%可濕性粉劑,山爾京蓬生物約業(yè)股份有限公司。牛肉膏、蛋白胨、酵母膏:生化試劑,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;瓊脂粉:生化試劑,天津市英博生化試劑有限公司;其他試劑均為分析純。.菌株分離用培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基:硫酸鎂.%,硫酸銨.%,檸檬酸鈉.%,磷酸二氫鉀.%,寧夏人學(xué)碩學(xué)位論文 第:帝降解枸杞農(nóng)藥殘留菌株的分離簽定磷酸氫二鉀.%,.富集培養(yǎng)基:蛋白陳.%,氯化鈉.%,磷酸二氫鉀.%,以農(nóng)藥為唯一碳源.普通培養(yǎng)基:牛肉膏.%,瓊脂.%,蛋白陳.%,氯化鈉.%,.普通液體培養(yǎng)基:為不加瓊脂的普通培養(yǎng)基。查氏

38、培養(yǎng)基:硝酸鈉.%,氯化鉀.%,硫酸亞鐵.%,磷酸氫二鉀.%,硫酸鎂?.%,蔗糖.%,瓊脂.%,自然馬丁氏培養(yǎng)基:葡萄糖.%,蛋白胨.%,磷酸二氫鉀.%,硫酸鎂?.%,瓊脂.%,孟加拉紅/.,自然,.滅菌,再加下列.%去氧膽酸鈉溶液.預(yù)先滅菌,臨用前加入,鏈霉素溶液萬單位鈿.矗用前加入。培養(yǎng)基:蛋白胨.酵母提取物.%,氯化鈉.瓊脂.%,.%葡萄糖,.以上培養(yǎng)基均經(jīng).滅菌后使用。.菌株鑒定用生理生化實驗培養(yǎng)基淀粉培養(yǎng)基:蛋白胨、 .、牛肉膏.、可溶性淀粉.、瓊脂.、蒸餾水、.。配制時,應(yīng)先把淀粉用少量蒸餾水調(diào)成糊狀,再加入到融化好的培養(yǎng)集中,.滅菌。油脂培養(yǎng)基: 蛋白胨.、 .、牛肉膏.、香油或

39、花生油.、中性紅.%水溶液約.、瓊脂.、蒸餾水、.,.滅菌。配制時注意事項:不能使用變質(zhì)油;油和瓊脂及水先加熱;調(diào)后,再加入中性紅使培養(yǎng)基成紅色為.卜;分裝培養(yǎng)基時,需不斷攪拌使油脂均勻分布于培養(yǎng)集中。明膠液化培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分與肉膏蛋白胨培養(yǎng)基相同,但凝【司劑改用明膠%,.滅菌。糖發(fā)酵培養(yǎng)基:蛋白胨、 .、葡萄糖.、蒸餾水、.,配制時將蛋白胨先加熱溶解,調(diào)劍之后,加入溴甲酚紫溶液.%水溶液,待早紫色,再加入葡萄糖,使其溶解,分裝試管,最后將杜氏小官倒置放入試管中,.滅菌。葡萄糖蛋東培養(yǎng)基.:試驗,.試驗用:葡萄糖.、蛋白胨.、.蒸餾水、.。配制時依次將藥品溶解,再調(diào),然后過濾分裝丁.小試管中

40、,.滅菌。作 .試驗剛的培養(yǎng)基應(yīng)注意蛋向胨的規(guī)格。檸檬酸鹽利用試驗培養(yǎng)基:檸檬酸鈉.、.、.、瓊脂.、蒸餾水、.%溴麝香草酚藍(lán)酒精液或.%苯酚紅,配制時除指示劑外,所有藥品混合后加熱溶解,調(diào).。過濾,加指示劑,分裝,.滅菌,制成斜面。寧夏人學(xué)碩:學(xué)位論文 第二章降解枸杞農(nóng)藥殘留菌株的分離喀定.實驗方法.菌株分離篩選取十樣.放入甲乙丙三個裝有富集培養(yǎng)基的三角瓶中,其中甲瓶中加溴氰菊酯與順式氯氰菊酯農(nóng)藥的:混合、乙瓶中加啶蟲脒和吡蟲啉農(nóng)藥的:混合、丙為四種農(nóng)藥等量混合,其濃度均為/,置,/搖床培養(yǎng),以后每周移種一次,以接種量%接人新鮮培養(yǎng)液中,并每次以/濃度逐漸提高各種農(nóng)藥濃度,至培養(yǎng)液中農(nóng)藥濃度

41、達(dá)劍,。以后用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,每隔一周移種一次,各瓶中農(nóng)藥濃度仍為/。如此馴化周以上,最后用平板劃線,細(xì)菌在普通培養(yǎng)基上生長,對長出的菌落進(jìn)行純種分離,得到純菌種,并轉(zhuǎn)入普通培養(yǎng)基斜面上。真菌在馬丁氏培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線培養(yǎng),單菌落移人查氏培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。.菌株的形態(tài)學(xué)觀察各菌株接種牛肉膏蛋白胨同體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng),培養(yǎng),對菌落特征進(jìn)行觀察,挑取單個菌落進(jìn)行革蘭氏染色、芽孢染色及英膜染色后,采用光學(xué)顯微鏡對菌株進(jìn)行形態(tài)觀察。.菌株對生物大分子及含氮化合物的分解利用試驗【】淀粉水解試驗:將淀粉培養(yǎng)基融化后倒成平板,接種后倒置適溫培養(yǎng),待形成明顯菌落后觀察,打開皿蓋,滴加少量碘液了平板上,輕輕旋轉(zhuǎn),使碘

42、液均勻鋪滿整個平板,觀察菌落周圍是否有透明圈出現(xiàn)。油脂水解試驗:將油脂培養(yǎng)基融化后充分震蕩,使油脂分布均勻,再倒制平板。接菌后倒置適溫培養(yǎng),觀察平板菌落處是否出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。明膠液化試驗:用穿刺法將菌株分別接種在明膠培養(yǎng)基試管中,適溫培養(yǎng),天。觀察結(jié)果時將試管從溫箱中取出,置于冰箱或冰浴中,后傾斜試管,觀察明膠液化情況。哚試驗:接種菌株于蛋白胨水培養(yǎng)基試管中,另取一直作為對照。觀察時,在培養(yǎng)液中加入乙醚約形成明顯昀乙醚層,充分振蕩,使引哚溶于乙醚中,靜置片刻,待乙醚層浮丁液面后,再沿管擎加入吲哚試劑滴,如吲哚存在,則乙醚層警現(xiàn)玫瑰紅色,為阡性反府加入眄哚試劑后不可再搖動,否則為陰性。.菌株對含碳

43、化合物的分解利用試驗取一支不接種作為對照,適溫培養(yǎng)。觀察培糖發(fā)酵試驗:分別接菌株與糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管中,養(yǎng)基是否變黃,杜氏小管中有無氣泡, 天各記錄一次。寧夏人學(xué)眵學(xué)位論文 第一二章降解櫛杞農(nóng)藥殘留菌株的分離簽定甲基紅.試驗:分別接菌株于葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基試管中,取一支不接菌種的作為對照,適溫培養(yǎng),沿管壁加入.試劑滴,觀察顏色變化。試驗:分別接菌株于葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基試管中,取一支不接菌種的作為對照,適溫培養(yǎng),在培養(yǎng)液中加入%的溶液滴,再加入等量的%的.萘酚溶液,拔去棉塞,用力震蕩,再放入的溫箱中保溫或在沸水中加熱,觀察顏色變化。檸檬酸鹽利用試驗:分別接菌株丁檸檬酸鈉培養(yǎng)基斜面上,取一支不接菌種

44、的作為對照,適溫培養(yǎng),觀察顏色變化。過氧化氫酶試驗:取一干凈載玻片,在上面滴一滴%的溶液,挑取一環(huán)剛經(jīng)過?斜面培養(yǎng)的實驗菌,在溶液中涂抹,觀察是否產(chǎn)生氣泡。.菌株耐鹽性試驗取幼齡菌株接種于普通液體培養(yǎng)基,依鑒定需要加入不同濃度%、%、%、%,培養(yǎng)基要十分澄清,培養(yǎng)和天,與未接種的對照管對比,目測生長情況。.菌株鑒定根據(jù)生理生化試驗結(jié)果查詢伯杰細(xì)菌鑒定手冊第八版明及常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊【進(jìn)行菌株鑒定。.實驗結(jié)果與分析.降解菌株的分離與形態(tài)特征富集培養(yǎng)馴化結(jié)束之后,通過稀釋平板、劃線分離的方法,分離得到以下細(xì)菌,無真菌。對菌株進(jìn)行標(biāo)記觀裂,菌株均為單個排列,其形態(tài)特征見表。寧夏人學(xué)碩學(xué)位論文 第二

45、幸降解枸杞農(nóng)藥殘留菌株的分離舉定表.分離出各降解菌的形態(tài)特征歷 注:、,.、為降解擬除蟲菊酯農(nóng)藥菌株:、為降解啶蟲脒,毗蟲啉類農(nóng)藥菌株:、為降懈復(fù)合農(nóng)藥菌株。.菌株對生物大分子及含氮化合物的分解利用表.菌株對生物大分子及含氮化合物的分解利用 注:?！闭鸩?擎陽性反應(yīng): 。一”表示.鍵陰性反應(yīng)?:;:從表.中可知,只有菌株的淀粉水解試驗為阿性,其他菌株均為陰性。岡為可以產(chǎn)生淀粉酶胞外酶,使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖,再被菌株吸收利用。各菌株均不能水解油脂,說明菌株不能分泌脂肪酶胞外酶,不能將脂肪水解為甘油和脂肪酸。只有菌株可產(chǎn)生蛋白酶胞外酶,將明膠水解為小分子物質(zhì),在低于時,使凝同狀態(tài)明膠變?yōu)橐后w

46、狀態(tài)。菌株、能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚,與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合產(chǎn)生紅玫瑰色,使吲哚實驗為陽性,其他菌株則不能分解色氨酸。.菌株對含碳化合物的分解利用寧夏人學(xué)碩:學(xué)位論文第二章降解枸杞農(nóng)藥殘留菌株的分離簽定 . ?.皇表.菌株對含碳化合物的分解利用? 注:?！北聿痪栃苑磻?yīng)。一”表不呈陰性反應(yīng)?一:;:實驗結(jié)果見表.。菌株、均能分解葡萄糖,產(chǎn)生有機(jī)酸,但不產(chǎn)生氣體,其他菌株不能分解葡萄糖。以上菌株的.試驗為剛性而.試驗為陰性,進(jìn)一步說明菌株分解葡萄糖為丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步再被分解甲酸、乙酸、乳酸等,而不是經(jīng)縮合和脫羧生成乙酰甲基甲醇。各菌株的接觸酶試驗均為剛性,說明所有菌株在有氧條件下,其呼吸鏈以氧

47、作為最終氫受體生成過氧化氫,由于其細(xì)胞內(nèi)具有過氧化氫酶,可將有毒的過氧化氫分解成無毒的水和氧氣。只有菌株不能分解利用檸檬酸鹽,其他菌株均能分解檸檬酸鹽形成碳酸鹽。.菌株的耐鹽性表.菌株的耐鹽性注:“”農(nóng)豕。侮性反應(yīng):“一”襲示望陰性反應(yīng)。一:;:實驗結(jié)果如表所示。兒菌株具有高耐鹽性%濃度仍能生艮,、在濃度大于%時不能生長,其他菌株在濃度大于%時不能生長。.菌株的鑒定第二章降解柯杞農(nóng)藥殘留茁株的分離鑒定中夏大學(xué)碩士學(xué)位論文根據(jù)以上各菌株的生理生化特性,初步鑒定菌株¨為微球菌科微球菌屬刪的一種,菌株、為同種菌,菌株、,為同種菌.菌株、為同種菌,菌株、同種苗,且均為假單包菌科假單胞茁屬螂叫

48、.。各菌株接種于牛肉青蛋白胨周體培養(yǎng)基上劃線,培養(yǎng),對菌落特征進(jìn)行觀察:菌株菌落不透明,黃色,圓形.扁平,邊緣整齊.易執(zhí)取。菌落半透明,乳白色,圓形,隆起.邊緣整齊。菌落不透明.乳黃色,圓形,凸起,邊緣不整齊。苗落不透明,孚白色,圓形,扁平.邊緣整齊。菌落半透明,乳白色,圓形,凸起,邊緣不整齊。圖 以為拂取單個茁蒂進(jìn)行革蘭氏染色后進(jìn)行顯搬鏡拍照。.,.一吧、.:、田 的曹體形毒鼎片 圈的件影密照片。一 、,.一、.丫:、一田 的蕾體形棼照片 圈川的蕾體形巷照片。砷“ 口前體影奄月呻鮒砷。啪田 種菌株劃線蚺井月片刪;材嘣”口.本章小結(jié)本章采用富囊培葬的方法,對取自寧夏長期種植摘杞土壤中的土蓍蒔進(jìn)

49、行培養(yǎng)駙化,分離飾寧夏大學(xué)碩學(xué)位論文 第二章降解枸杞農(nóng)藥殘留菌株的分離簽定選出可降解擬除蟲菊酯,啶蟲脒,吡蟲啉農(nóng)藥的優(yōu)勢菌種,通過生理生化試驗對菌株進(jìn)行鑒定。結(jié)果如下:菌株在牛肉膏蛋白胨同體培養(yǎng)基上菌落不透明,黃色,圓形,扁平,邊緣整齊,易挑取。經(jīng)鏡檢菌體為球狀,革蘭氏陽性菌,無芽孢及莢膜?？梢援a(chǎn)生淀粉酶胞外酶,使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖,再被菌株吸收利用;可產(chǎn)生蛋白酶胞外酶,將明膠水解為小分子物質(zhì);不能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚;不能分解葡萄糖;其細(xì)胞內(nèi)具有過氧化氫酶;不能分解利用檸檬酸鹽;贏耐鹽性,%仍能生長。初步鑒定菌株為微球菌科微球菌屬的一種。菌株牛肉膏蛋白胨同體培養(yǎng)基上菌落半透明,乳白色,圓

50、形,隆起,邊緣整齊,易挑取。經(jīng)鏡檢菌體為短桿,革蘭氏陰性菌,無芽孢及莢膜。不分泌淀粉酶胞外酶,無法水解淀粉;不分泌脂肪酶胞外酶,不能將脂肪水解為甘油和脂肪酸;不分泌蛋白酶胞外酶,不能水解明膠;能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚;能分解葡萄糖,為丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步再被分解甲酸、乙酸、乳酸等,但不產(chǎn)生氣體;細(xì)胞內(nèi)具有過氧化氫酶,可將有毒的過氧化氫分解成無毒的水和氧氣。能分解檸檬酸鹽形成碳酸鹽,大于%不能生長。初步鑒定菌株為假單包菌科假單胞菌屬的一種。菌株牛肉膏蛋白胨同體培養(yǎng)基上菌落不透明,乳黃色,圓形,凸起,邊緣不整齊,易挑取。經(jīng)鏡檢菌體為短桿,革蘭氏陰性菌,無芽孢,有英膜。不產(chǎn)生淀粉酶胞外酶,使淀粉水解為麥

51、芽糖和葡萄糖;各不能分泌脂肪酶胞外酶,不能將脂肪水解為甘油和脂肪酸;不產(chǎn)生蛋白酶胞外酶,不能水解明膠為小分子物質(zhì);能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚;能分解葡萄糖為丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步再被分解甲酸、乙酸、乳酸等,但不產(chǎn)生氣體;有過氧化氫酶,可將有毒的過氧化氫分解成無毒的水和氧氣;能分解檸檬酸鹽形成碳酸鹽;大于%不能生長。初步鑒定菌株為假單包菌科假單胞菌屬的一種。菌株牛肉膏蛋白胨同體培養(yǎng)基上菌落不透明,乳白色,圓形,扁平,邊緣整齊。經(jīng)鏡檢菌體為短桿,革蘭氏陰性菌,無芽孢及莢膜。不分泌淀粉酶胞外酶,無法水解淀粉;不分泌脂肪酶胞外酶,不能將脂肪水解為甘油和脂肪酸;不分泌蛋白酶胞外酶,不能水解明膠;不能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚;不能分解葡萄糖;能分泌過氧化氫酶,可將有毒的過氧化氫分解成無毒的水和氧氣;能分解檸檬酸鹽形成碳酸鹽;濃