臨床免疫組化實用大全

1、免疫組化定義：免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理一一抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry或免疫細胞化學(xué)技術(shù)（immunocytochemistry）臨床常用免疫組化指標的意義臨床病理工作中，我們常用到“月中瘤細胞免疫組化耐藥預(yù)后標記”，但是許多單位只寫陽性結(jié)果，不寫臨床意義，其結(jié)果對臨床幫助不大，因為許多醫(yī)生不懂得這些結(jié)果的意義，因此建議大家在出此類報告時，把“月中瘤細胞免疫組化耐藥預(yù)后標記”的

2、意義打印在報告中，以增加病理報告的使用價值。1、惡性月中瘤免疫組化耐藥預(yù)后標記，全套4項：P-gP,GSTtt,TOPOH,Ki-67。2、乳癌免疫組化耐藥預(yù)后標記，全套7項：P-gp,GSTtt,TOPOH,Ki-67,ER,PR,C-erbB-2。3、意義：標記物-作用-陽性部位-臨床意義多藥耐藥基因蛋白（P-Gp）-藥泵作用-胞膜/胞漿-陽性率越高，對下列藥物精選文檔耐藥性越強：阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、米托慈釀、長春花堿、長春新堿、紫彬醇、泰素帝。谷光甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GST冗）-解毒作用-胞漿-陽性率越高，對下列藥物耐藥性越強：阿霉素、順柏、氮芥、環(huán)磷酰胺、瘤可寧。拓撲異構(gòu)酶H（TOP

3、OH）-靶點作用-胞核-陽性率越高，對下列藥物越有效：意環(huán)類抗生素和鬼臼毒素類，如VP16、替尼泊甘、玫瑰樹堿、新霉素、柔紅霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。陽性率高者對VP16尤其有效。雌激素受體（ER）-性激素作用-胞核-陽性率越高，月中瘤對內(nèi)分泌治療越有效，預(yù)后越好。孕激素受體（PR）-牲激素作用-胞核-陽性率越高，月中瘤對內(nèi)分泌治療越有效，預(yù)后越好。C-erbB-2-加基因產(chǎn)物-胞漿-陽性率越高，月中瘤惡性程度越高。ER、PR陽性而C-erbB-2也陽性者，用三苯氧胺治療效果不好。Ki-67-細胞增殖標志-胞核-陽性率越高，月中瘤增殖越快，惡性程度越高。Ki-67為細胞增值的一種標記，

4、在細胞周期G1、S、G2、M期均有表達，G0期缺如，其和許多月中瘤分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。PCNA（增埴細胞核精選文檔抗原）CEA多數(shù)腺癌表達CEARb（retinoblastoma）!網(wǎng)膜母細胞瘤）基因是月中瘤抑制基因，調(diào)節(jié)細胞周期。P53在免疫組化中均為突變型，陽性率越高，預(yù)后約差。野生型半衰期很短Nm23是轉(zhuǎn)移抑制基因，其陽性表達和月中瘤轉(zhuǎn)移呈負相關(guān)。目前已被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、非小細胞肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、喉癌等多種惡性月中瘤的檢測。幾乎所有的研究都表明，nm23蛋白高表達患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率相對較低，存活期相對較長。E-Ca,E鈣粘附蛋白，介導(dǎo)細胞間粘連作用的跨膜糖蛋白，其

5、功能喪失引起細胞之間連接的破壞，主要用于月中瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面的研究。PS2（雌激素調(diào)節(jié)蛋白），其表達和ER表達有關(guān)，可作為內(nèi)分泌治療和預(yù)后判斷的指標之一。CK18,低分子量角蛋白，主要標記各種單層上皮包括腺上皮，而復(fù)層鱗狀上皮常陰性，主要用于腺癌診斷。精選文檔CK19,分布于單層上皮和間皮，常用于腺癌診斷，肝細胞不表達，而膽管為陽性反應(yīng)Heppar1,肝細胞抗原，正常肝細胞和高分化肝細胞癌陽性，低分化肝細胞癌多弱陽性或陰性。CK20,用于胃腸道腺癌、卵巢黏液性月中瘤、皮膚Merkel細胞癌診斷。鱗癌、乳腺癌、肺癌、子宮內(nèi)膜和卵巢非黏液性月中瘤常陰性。CK7卵巢、肺和乳腺上皮常陽性，結(jié)腸、前列腺

6、、胃腸道上皮陰性。Villin絨毛蛋白，正常組織中，villin通常只表達于有刷狀緣的細胞上，如胃腸道上皮細胞、胰腺和膽管上皮細胞以及腎實質(zhì)的上皮細胞中（特別是近曲小管）。Villin在胃腸道癌、胰腺癌、膽囊癌和膽管癌組織中有很高的表達率，具有明顯腺樣結(jié)構(gòu)的月中瘤上沒有villin表達，則這個月中瘤為胃腸道、胰腺、膽囊或膽管來源的可能性極低。乳腺癌也經(jīng)常成為女性患者未知原發(fā)部位轉(zhuǎn)移癌要鑒別排除的一種疾病。因為在轉(zhuǎn)移癌組織上觀察到明顯的villin免疫組化陽性染色，則這個月中瘤就極不可能為乳腺來源。其他villin免疫組化染色通常為陰性表達的月中瘤還有：如卵巢漿液性癌、尿道移行細胞癌和前列腺癌。

7、問皮瘤也經(jīng)常為villin陰性表達，因此在一些情況下Villin還可以作為鑒別問皮瘤和腺癌使用抗體的一種。精選文檔但是也有一些非胃腸道來源的月中瘤可表達villin,如子宮內(nèi)膜樣腺癌、卵巢粘液性癌、腎細胞癌和小部分肺癌。也有一些專家報道Villin在部分宮頸內(nèi)膜腺癌病例中表達。肝癌的診斷Villin免疫組化染色可以顯示出毛細膽管結(jié)構(gòu)，因此它也可能在表達部分肝癌的管狀結(jié)構(gòu)上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一種試劑，而且CD10(CALLA)在表達肝癌的該結(jié)構(gòu)上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10(CALLA)在肝癌病例上的表達，相互之間并沒有任何的沖突，因此如果懷疑肝癌的可能性，

8、建議將這三種抗體共同使用以協(xié)助疑難病例的診斷。Villin在神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤上的應(yīng)用Villin在神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤的研究上也很有幫助。眾所周知，類癌和胰腺的胰島細胞月中瘤具有相相似的形態(tài)學(xué)特征，僅在形態(tài)學(xué)上區(qū)分這兩種月中瘤幾乎是不可能的。Villin在這種情況下特別有用，因為據(jù)文獻報道在85%的胃腸道類癌病例中有villin的表達，但在胰島細胞月中瘤上未見陽性表達報道。Villin在類癌上的表達通常為胞膜陽性。另外，有一些證據(jù)表明villin在胃和下消化道的小細胞癌上的表達率比在其他部位的小細胞癌上要高。如：肺、食道、膀胱或前列腺等。據(jù)文獻報道，大約有40%的肺類癌病例villin陽性，在其他

9、一些神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤上，精選文檔如甲狀腺髓樣癌和少數(shù)的美克爾細胞瘤上也有villin的表達。MRP1多藥耐藥相關(guān)蛋白1,影響化療敏感性，和預(yù)后相關(guān)。MDR多藥耐藥基因TS胸昔合成酶，是5-FU重要作用靶點，如果其高表達，陽性反映+以上，提示月中瘤細胞對5FU耐藥。Syn突觸素神經(jīng)組織標志S-100神經(jīng)組織標志，存在于神經(jīng)組織，垂體、頸動脈體，腎上腺髓質(zhì)、唾液腺、少數(shù)間葉組織，常用于神經(jīng)鞘瘤、惡黑、脂肪肉瘤、軟骨月中瘤診斷。NSE主要用于神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤診斷Chr,嗜銘素，腎上腺髓質(zhì)含量很高，鑒別腎上腺髓質(zhì)和皮質(zhì)，用于神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤診斷。CKH高分子角蛋白，主要標記鱗狀細胞月中瘤CKL低分之角

10、蛋白，主要標記單層上皮、腺上皮EMA上皮膜抗原，糖蛋白，廣泛分布各種上皮及其月中瘤Vim波形蛋白，問葉組織標志P504甲?；o酶A消旋酶檢測診斷前列腺癌的敏感性為97%,特異性為100%。AMACR的優(yōu)點在于它是癌癥特異性，只存在于癌癥組織。Rubin稱，AMACR亦可用作其他癌癥的診斷標志物。對各種癌癥細胞進行檢查后發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都過度表達AMACR,以結(jié)腸直腸癌和前列腺癌表達最高。CD117胃腸間質(zhì)瘤CD10作為共同急性淋巴母細胞型白血病抗原，主要表達于未成熟淋巴細胞，在精選文檔Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系統(tǒng)疾病的診斷中具有應(yīng)

11、用價值。近幾年來發(fā)現(xiàn)該抗原在造血系統(tǒng)外的某些月中瘤中有表達，如子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、惡性黑色素瘤等。抗體在對腎細胞癌進行診斷和鑒別時有一定的參考價值。CD15是一種細胞粘附分子，因其對霍奇金淋巴瘤（HD）中的R-S細胞具有良好的標記作用，被認為是HD的重要標志物。除HD的鑒別診斷外，對胃癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、乳腺癌等月中瘤CD15的表達研究發(fā)現(xiàn)，CD15表達隨癌細胞分化程度下降、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期增高而明顯增高。認為CD15的表達是判斷月中瘤的發(fā)展、預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的良好指標。免疫電鏡觀察顯示，CD15抗原主要分布于大腸癌細胞漿的界膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體及近細胞核膜處，CD15可能是通過對所

12、結(jié)合的鋪基構(gòu)型改變影響和參與月中瘤的形成和轉(zhuǎn)移過程。SMA平滑肌肌動蛋白，標記平滑肌CD56為神經(jīng)細胞黏附分子，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細胞，常用于星型細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤診斷，也是NK細胞瘤的重要標志，也標記小細胞肺癌Des,結(jié)蛋白，廣泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌細胞和肌上皮細胞，高分化高表達、低分化低表達。MSA肌特異性肌動蛋白，廣泛分布于幾乎所有肌型細胞中CD68存在于骨髓和各神經(jīng)組織的巨噬細胞用于粒細胞白血病、各種單核細胞來源月中瘤、包括惡性纖維組織細胞瘤診斷（首選）。CD34表達于早期淋巴造血干細胞、祖細胞、內(nèi)皮細胞、胚胎纖維母細胞和某些神經(jīng)組織細胞，多用于標

13、記血管內(nèi)皮細胞，血管源性月中瘤的診斷，GIST80-90%.CD31也標記血管內(nèi)皮。精選文檔CD44是一種分布廣泛的跨膜糖蛋白分子，分CD44s和CD44V兩大類。CD44s主要作為透明質(zhì)酸受體，結(jié)合透明質(zhì)酸后影響月中瘤的生長和轉(zhuǎn)移。而CD44V則主要表達于轉(zhuǎn)移的月中瘤細胞。李道明等用免疫組化LSAB法檢測了42例食管鱗癌CD44V4/5的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達率為76.19%(16/21),而非轉(zhuǎn)移組的陽性率為42.86%(9/12),兩組間有顯著性差異。癌巢周邊的癌細胞、肌間浸潤的癌細胞、有核分裂的癌細胞和癌栓中的癌細胞及浸潤脈管壁的癌細胞均呈強陽性表達。張成武等檢測了20

14、例正常胃粘膜上皮、43例異型增生和85例胃癌組織CD44V6的表達，結(jié)果正常胃粘膜無表達，而異型增生和胃癌組織陽性率分別為30.2%和74.1%,其表達強度與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、月中瘤生長方式、靜脈和淋巴管侵襲及遠處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以上結(jié)果均表明，CD44V的高表達構(gòu)成了月中瘤細胞的侵襲性與易轉(zhuǎn)移性。NESTIN,神經(jīng)干細胞中極為豐富Ost成骨素，為骨化細胞分泌。AAT抗胰蛋白酶纖維組織細胞來源月中瘤ACT抗糜蛋白酶GFAP膠質(zhì)纖維酸性蛋白神經(jīng)組織標志，多用于星形膠質(zhì)瘤診斷Tg甲狀腺球蛋白，甲狀腺癌TG陽性。CT降鈣素甲狀腺髓樣癌陽性。PH甲狀旁腺素甲狀旁腺月中瘤陽性N-myc表達增強的小

15、細胞肺癌和神經(jīng)母細胞瘤對化療缺乏反應(yīng)并進展快速；bcl-2:耐藥機理為抗凋亡作用，高表達者對多數(shù)抗癌藥物/放射治療耐受。月中瘤相關(guān)抗原72(TGA72)多種惡性上皮性月中瘤表達TGA72,尤其是乳腺癌、卵精選文檔TGA72陰性。巢癌和結(jié)腸癌。正常上皮細胞、肉瘤、淋巴造血系統(tǒng)月中瘤通常TGA72抗體用于乳腺癌的研究較多，其高表達通常與月中瘤體積大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤細胞分化差及高增殖活性有關(guān)。月中瘤相關(guān)抗原(GA733)編碼上皮糖蛋白40,是一種上皮細胞黏附分子(EP-CAM),對上皮細胞的生長與分化起著重要作用。多種月中瘤可有GA733表達，尤其是乳腺癌、結(jié)腸癌及肺癌等。Kubuschok等采用GA

16、733對非小細胞肺癌手術(shù)切除淋巴結(jié)中隱匿性微轉(zhuǎn)移灶進行檢測，發(fā)現(xiàn)隱匿灶的檢出是判斷總生存率的獨立預(yù)后因子。結(jié)腸癌GA733表達形式與腫瘤預(yù)后有關(guān)，細胞膜及細胞漿的表達預(yù)后較基膜側(cè)的表達為差。TTF-1甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1,TTF-1表達于甲狀腺腺上皮和肺的上皮細胞中。在肺月中瘤研究中發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)肺的小細胞癌、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腺癌、少部分大細胞未分化肺癌、大多數(shù)非典型神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤免疫組化結(jié)果顯示TTF-1陽性，而肺鱗癌及絕大多數(shù)典型類癌TTF-1陰性。在甲狀腺乳頭狀腺癌中TTF-1亦陽性，而TTF在其它組織表達陰性。據(jù)此認為TTF-1可用來鑒別肺腺癌與鱗癌，并有助于與肺轉(zhuǎn)移性腺癌的鑒別。TTF-

17、1在甲狀腺及其月中瘤中的表達TTF-1主要表達在甲狀腺濾泡細胞中和甲狀旁腺的主細胞中，TTF-1為甲狀腺分化和甲狀腺球蛋白分泌調(diào)節(jié)的基礎(chǔ)物質(zhì)，可促進甲狀腺過氧化物酶、碘/鈉的轉(zhuǎn)運，?TTF-1與血清TSH的活性有關(guān)，活性的TSH-R可增強TTF-1的表達。TTF-1在良惡性甲狀腺組織中表達不同，正常甲狀腺和良性腺瘤表達多，甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌中表達少，未分化癌中不表達，TTF-1在惡性甲狀腺病變中的精選文檔表達強度隨年齡增加而增強，而且病變存瘤期長，復(fù)發(fā)機率高TTF-1在肺癌中的表達75%的肺非小細胞癌（NSCLCs陽性表達，腺癌（ACs）明顯高于鱗癌（SCC）,90%以上的原發(fā)性小細胞肺癌

18、（SCLC欣達陽性，TTF-1在非小細胞肺癌（NSCLCs）陽性表達強度與病人的預(yù)后成呈負相關(guān)，可作為一項獨立的預(yù)后指標，肺的典型性類癌（TCS解為陰性，表明小細胞肺癌和非小細胞肺癌可能有一個不同于TCS的共同起源的理論。臨床常見的免疫組化指標在乳腺癌診治中的應(yīng)用近年來，由于免疫組化實驗方法在各醫(yī)院病理科的迅速普及，許多患者的術(shù)后標本可以進行免疫組化檢查。這對于患者的診斷、分型以及術(shù)后的綜合治療有著重要的意義。本文就臨床上常見的一些指標及其意義進行綜訴。一、激素受體（ER）和孕激素受體（PR）人類最先發(fā)現(xiàn)乳腺癌細胞和激素的關(guān)系始于1896年。Bentson觀察到乳腺癌患者切除卵巢后可使乳腺癌細

19、胞的生長受到抑制。1967年Jensen發(fā)現(xiàn)人類乳腺癌中含有ER0從此開始了真正意義上的乳腺癌內(nèi)分泌治療的研究。女性正常乳腺的細胞上存在ER和PR,雌激素和孕激素通過ER和PR對細胞功能進行調(diào)節(jié)。當(dāng)細胞惡變時，月中瘤細胞可以部分地或全部保留正常的受體系統(tǒng)，其功能與正常細胞相似。這種月中瘤細胞的生長仍然依賴原來的激素環(huán)境調(diào)節(jié)，稱為激素依賴性月中瘤，臨床上稱為ER陽性乳腺癌。有些細胞在癌變過程中，其受體系統(tǒng)保留很少或完全喪失，不能再作為激素的靶細胞，其生長不再受激素的控制與調(diào)節(jié)，臨床上表現(xiàn)為ER陰性乳腺癌。Jensen®現(xiàn)ERB,很快又發(fā)現(xiàn)PR,并證明PR的精選文檔合成與雌激素和ER復(fù)合

20、物在核內(nèi)發(fā)生的變化過程有關(guān)，PR的形成直接受ER的控制和調(diào)節(jié)，故PR陽性的乳腺癌，ER大多為陽性。臨床上可以通過對雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）的檢測，得出月中瘤細胞內(nèi)激素受體含量的水平，從而提示乳腺癌的預(yù)后信息和指導(dǎo)內(nèi)分泌治療。據(jù)報道乳腺癌ER、PR檢測的陽性率分別為40%60%、30%左右。許多文獻均已證實，ER、PR變化與乳腺癌病人預(yù)后密切相關(guān)，亦與其他公認的預(yù)后因素，如月中瘤分級、倍體性及分期有關(guān)。高分化月中瘤或臨床分期較低的月中瘤ER、PR更可能陽性,受體陽性腫瘤細胞的明顯減少與細胞增殖分級增高、c-erbB-2癌基因擴增增加及EGFR表達增加有關(guān)。免疫組化抗受體檢測可預(yù)測乳

21、腺癌對激素治療的反應(yīng)性。無ER或PR表達的月中瘤對激素治療通常反應(yīng)性差，而ER及PR陽性月中瘤則對激素治療反應(yīng)性高。1974年美國Bethesde國際會議，綜合世界各國400多例各種方式的內(nèi)分泌治療報道，表明事先未經(jīng)激素受體測定的乳腺癌患者，應(yīng)用內(nèi)分泌治療有效率只有30%;而經(jīng)ER測定陽性者有效率達55%60%,受體陰性者有效率5%8%。TAM治療無效的原因與ER的異常結(jié)構(gòu)有關(guān)。其后多年病例不斷積累，報道的有效率基本在這一水平。1998年美國臨床月中瘤年會（ASCO）國際權(quán)威協(xié)作臨床研究報道37000例乳腺癌患者的結(jié)果表明：乳腺癌術(shù)后輔助三苯氧胺（TAM）治療可以明顯降低復(fù)發(fā)率、死亡率；TAM

22、對絕經(jīng)后患者有效，絕經(jīng)前患者也有一定療效；ER陽性患者用TAM效果最好，ER不明的患者也有效；輔助化療后加用TAM,能進一步提高療效；延長服藥時間能提高療效；服用TAM明顯降低對測乳腺癌發(fā)生率；長期服用TAM會增加患子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險。二、PS2基因精選文檔PS2蛋白是Masialowski于1982年從激素依賴性乳腺癌MCF-7細胞株中提取出來的雌激素誘導(dǎo)蛋白之一，在乳腺癌中表達陽性率約為43%58%。PS2基因受雌激素調(diào)節(jié)和控制，在雌激素誘發(fā)和控制下才能轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生PS2蛋白。換言之PS2依賴于ER的存在。可以認為，PS2基因的存在與ER、PB存在著密切正相關(guān)關(guān)系。Gion研究446例原發(fā)性乳

23、腺癌，觀察PS2與ER、PR關(guān)系。結(jié)果68.5%PS2陽性病例，具ER、PB均陽性；而PS2陽性其ER、PR均陰性者不足3%。Gillesby等報道ER(+)者中有59%,PR(+)者中有60%PS2呈陽性。大量研究表明，PS2蛋白可以顯示功制性雌激素調(diào)節(jié)系統(tǒng)，能更好的指導(dǎo)臨床抗雌激素治療。目前認為PS2對判斷預(yù)后及指導(dǎo)內(nèi)分泌治療均有價值，陽性者預(yù)后好，復(fù)發(fā)率及死亡率均較低，且內(nèi)分泌治療有效。作為內(nèi)分泌治療效果預(yù)測的指標，PS2可以補充ER、PR的不足，甚至有學(xué)者認為PS2更優(yōu)于ER、PR。如果將三者結(jié)合使用，可達到相當(dāng)滿意的效果。當(dāng)三項均陰性時，內(nèi)分泌治療很少有效，預(yù)后甚差。三、c-erbB

24、-2癌基因c-erbB-2癌基因是乳腺組織細胞中較常見而易激活的原癌基因。在多種腺癌細胞中此癌基因均有高水平表達，報道最多的是乳腺癌。c-erbB-2癌基因的異常表達擴增見于25-30%勺原發(fā)性乳腺癌病例，并且僅限于癌細胞，而不出現(xiàn)于正常乳腺上皮。c-erbB-2擴增與雌、孕激素受體表達呈負相關(guān)，與月中瘤級別較高有關(guān)。c-erbB-2基因表達陽性者可使ER陽性病人對內(nèi)分泌治療的反應(yīng)率降至20%;ER陰性病人內(nèi)分泌治療幾乎無效。c-erbB-2癌基因的擴增或過度表達還與乳腺癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及生存期明顯相關(guān)。過度表達者其術(shù)后早期復(fù)發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率增加，生存期縮短，淋巴結(jié)陽性的乳腺癌c-erbB-2的

25、過表達是預(yù)后不良的重要因素。另有研究表明，孚L腺癌c-erbB-2表達陽性病例其瘤月中往往大于2cm,因此推測其蛋精選文檔白產(chǎn)物p185過量表達可能與月中瘤的生長速度有關(guān)。因而c-erbB-2的強陽性表達可作為識別早期乳腺癌的有效指標。近年來有人提出“四聯(lián)”檢測，包括ER、PR、PS2以及c-erbB-2。ER、PR、PS2陽性表達的乳腺癌激素治療的敏感性高，無c-erbB-2基因過度擴增的乳腺癌同樣治療敏感性增加。相反，前三者陰性而后者陽性的乳腺癌，通常其復(fù)發(fā)率、死亡率均高，預(yù)后差。四、p53抑癌基因p53是一種抑癌基因，是人類研究最多的基因，分野生型（Wtp53）和突變型（Mtp53）。W

26、tp53在正常組織內(nèi)含量低，半衰期短，僅3060分鐘，而免疫組化的敏感性無法檢測如此微量的抗原成分。當(dāng)p53突變后，能和進入組織內(nèi)的各種病毒蛋白、Wtp53蛋白、正常等位基因蛋白和熱休克蛋白等結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物，在組織內(nèi)的半衰期長，含量逐漸積累，為免疫組化的檢測提供了條件。其陽性表達率約25%35%。Wtp53在正常組織中能參與細胞從G0期進入G1期的負調(diào)節(jié)。從而控制細胞的增生，同時誘導(dǎo)細胞的程序性死亡。當(dāng)p53突變后則喪失了啟動細胞凋亡的能力，結(jié)果使月中瘤細胞數(shù)目增加，從而使細胞呈現(xiàn)無休止生長而凋亡受到抑制。在乳腺癌增生過程中有Mtp53基因表達，并隨著非典型增生程度的增加而增加。p53表

27、達水平與細胞的高度增生及月中瘤細胞的分化程度有關(guān)，分化越低惡性程度越高的月中瘤，p53基因水平越高。p53基因蛋白陽性和ER陰性的乳腺癌患者預(yù)后不良，生存期短。五、nm23nm23又稱為抗轉(zhuǎn)移癌基因，是一種抑癌基因，產(chǎn)物是由152個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，與二磷酸核甘激酶（NDPK）的氨基酸序列具有高度同源性。人類nm23精選文檔基因有2個亞型：nm23H1和nm23H2,兩者有88%同源性，nm23H1與乳腺癌的預(yù)后關(guān)系更密切。nm23蛋白具有NDPK功能，通過影響微管聚合而調(diào)節(jié)細胞運動，并通過影響G蛋白的信號傳遞而發(fā)揮負向調(diào)節(jié)作用，從而抑制月中瘤轉(zhuǎn)移。但其作用并不依耐于NDPK的活性。有實驗結(jié)

28、果表明，與轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)的是nm23/NDPK的表達水平而不是NDPK的活性。nm23是獨立預(yù)后指標，其表達與年齡、月中瘤大小、ER、PR和C-erbB-2無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、組織學(xué)分型、分級及臨床分期均有顯著關(guān)系，nm23高表達者的預(yù)后明顯好于低表達者。nm23表達降低的乳腺癌分化較低，ER表達水平低，并常常出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良。在乳腺癌進展過程中，nm23的表達水平降低。通過檢測nm23可以把腋淋巴結(jié)陽性病人中可能發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移和腋淋巴結(jié)陰性病人中有潛在高轉(zhuǎn)移傾向的病例篩選出來，進行相應(yīng)的預(yù)防性治療，從而提高治療效果。六、多耐藥（MDR）基因月中瘤細胞耐藥是化療失敗的主要原因，引起耐藥

29、的重要原因之一是多藥耐藥性，即月中瘤細胞接觸一種抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性后，對多種結(jié)構(gòu)和作用機制不同的其它抗癌藥也產(chǎn)生耐藥性。多藥耐藥（MDR）基因的產(chǎn)物P糖蛋白（P-gp）是一種跨膜蛋白，作為“藥泵”功能引起癌細胞產(chǎn)生耐藥，它具有膜轉(zhuǎn)運蛋白的許多結(jié)構(gòu)特征，一旦與抗癌藥物結(jié)合，在ATP供能下，將藥物由胞內(nèi)泵出胞外，因而胞內(nèi)藥物濃度不斷下降，以致無法發(fā)揮細胞毒作用，出現(xiàn)耐藥性。陽性表達的細胞對化療劑尤其是慈環(huán)類和長春花堿類及阿霉素等化療劑，具有固有和獲得性耐藥。P-gp表達可見于高度固有耐藥的月中瘤，在這些月中瘤，P-gp的高水平表達亦見于產(chǎn)生這些月中瘤的正常組織。對化療敏感的月中瘤通常P-gp表達率

30、低，那些對系統(tǒng)化療最敏感的實體瘤（精原細胞瘤和胚胎性癌）很少出現(xiàn)P-gp表達，曾接精選文檔受過化療患者發(fā)生的月中瘤常有P-gp表達增強。檢測P-gp表達有助于確定可能對常規(guī)化療耐藥的月中瘤，從而提供適合于這些病人合理的替代治療方法，對月中瘤病人選擇化療方案和預(yù)后的判斷具有重要的臨床意義。七、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)血管形成在月中瘤生長、浸潤、轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，它受到一系列促進和抑制因子的調(diào)節(jié)，其中最重要的促進因子之一是腫瘤細胞在生長過程中分泌的VEGF,它的編碼基因位于6P21.3由8個外顯子構(gòu)成，由于mRNA不同的剪切形式，形成5種不同的VEGF,分別含有12114516518920

31、6個氨基酸，其中以VEGF165最重要，在各種細胞中表達占優(yōu)勢，VEGF121和VEGF189在大部分表達VEGF的組織和細胞中均能檢測到，VEGF145和VEGF206非常少見，其中VEGF206只在人胎肝cDNA庫中可以檢測到。VEGF通過二硫鍵結(jié)合形成二聚體后才有活性，它的受體為酪氨酸蛋白激酶型膜受體，具有高度特異性。當(dāng)VEGF與受體結(jié)合后，可以刺激血管內(nèi)皮細胞增殖，促進血管形成，并增加血管通透性，這樣月中瘤細胞一方面可以獲得充分的營養(yǎng)而迅速增殖，另一方面也容易通過血管內(nèi)皮細胞進入血流從而發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。VEGF主要由月中瘤細胞產(chǎn)生，小部分來自細胞間質(zhì)，它是獨立預(yù)后指標，與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)無

32、關(guān)，與ER、PR呈負相關(guān)，高表達者易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，預(yù)后不良，且內(nèi)分泌治療和化療的效果差，建議對VEGF高表達者聯(lián)合應(yīng)用抗血管生成治療，如利用VEGF單抗阻斷與受體結(jié)合，重組VEGF與VEGF競爭受體，將VEGF與小分子毒性物質(zhì)結(jié)合，利用反義核酸技術(shù)抑制VEGF表達等等。七、月中瘤細胞增生標志物目前被廣泛采用的兩種增殖相關(guān)標志物是Ki-67及PCNA(增埴細胞核抗原)。精選文檔PCNA（增殖細胞核抗原）：是一種僅在增殖細胞中合成或表達的核內(nèi)多肽，其表達與細胞周期有關(guān)。主要表達于增殖細胞的S期、G1期和G2初期。Ki-67與PCNA一樣，為細胞增殖的一種標記，在細胞凋亡中S、G2、M期均有表達，G0期缺如。Ki-67增殖指數(shù)高低與許多月中瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)。Ki-67與PCNA免疫反應(yīng)性與細胞增生的形態(tài)學(xué)特征關(guān)系密切，特別是與有絲分裂數(shù)及月中瘤分級相關(guān)。在乳腺月中瘤中，其表達還與其他分化及預(yù)后指標相關(guān)，如與雌孕激素受體表達呈負相關(guān)，而與P53基因異常呈正相關(guān)。在乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、胃癌和一些淋巴瘤及肉瘤，采用Ki-67與PCNA免疫組化分析，均顯示有增殖證據(jù)，提示這些月中瘤