呼吸道感染IgM九項聯(lián)檢試劑使用說明終稿

1、呼吸道感染IgM 九項聯(lián)檢試劑盒（間接免疫熒光法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：呼吸道感染IgM九項聯(lián)檢試劑盒（間接免疫熒光法）英文名稱：PNEUMOSLIDEIgM商品名稱：PNEUMOSLIDEIgM【包裝規(guī)格】10 人份 /盒【預(yù)期用途】采用間接免疫熒光法（ IFA ），同時檢測人血清中呼吸道感染主要病原體的 IgM抗體，可檢的病原體包括：嗜肺軍團菌血清1 型、肺炎支原體、 Q 熱立克次體、肺炎衣原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒 1、2 和 3 型。已報道的非典型性肺炎的病原體有很多，其中最常見的有：嗜肺軍團菌人最易感染的是嗜肺軍團菌血清1 型，非典型性

2、肺炎常伴隨有全身癥狀。 10%的肺炎是由嗜肺軍團菌血清1 型引起的。在血清學(xué)診斷中， 間接免疫熒光法（ IFA ） 是唯一的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。肺炎支原體肺炎支原體引起的肺炎在兒童和青少年中最為常見， 由于很難將其固定在載玻片上，因此先將肺炎支原體抗原固定在細(xì)胞中。Q 熱立克次體Q 熱是由 Q 熱立克次體引起的全身疾病，會造成發(fā)熱、非典型性肺炎、肝炎或心內(nèi)膜炎。血清學(xué)診斷中， IFA 檢測是最靈敏和最具指示性的血清學(xué)診斷方法。肺炎衣原體肺炎衣原體極易造成呼吸系統(tǒng)感染，特別是支氣管炎和肺炎。在老年人中發(fā)病率較高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。微量免疫熒光法（MIF）是最靈敏和最特異的診斷方法。腺病

3、毒腺病毒是一種重要的呼吸道病原體，能引起上呼吸道疾病，伴隨有急驟發(fā)熱和 輕度呼吸道感染。呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是兩歲以下幼兒呼吸道感染的主要病原體，在冬季爆發(fā) 流行。流感病毒它是流感的病原體，在具有潛在病理學(xué)的患者中會產(chǎn)生嚴(yán)重的并發(fā)癥。由于它 易于與其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期臨床診斷很困難。因此，實驗室診斷就 顯得非常重要。副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4歲兒童中能引起喉氣管支氣管炎 （哮吼）。3型具 有流行性，1和2型具有地域性?！緳z測原理】間接免疫熒光法（IFA）是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生 的反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗

4、原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌 步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)。用 免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果?！局饕M成成份】除PBS外，所有試劑均可直接使用。為了易于識別，所有試劑均有一個給定的 編號。在操作驟中，寫明了每一步所使用試劑的編號。1 載玻片：10片（10孔/片），含有下列抗原：1. 嗜肺軍團菌血清1型（懸浮于0.5%正常雞卵黃囊中以增強抗原吸附性和避免細(xì) 菌聚集）2. McCoy細(xì)胞中的肺炎支原體3. Q熱立克次體II期（懸浮于0.5%正常雞卵黃囊中以增強抗原吸附性和避免細(xì)菌 聚集）4. 肺炎衣原體（原生小體）5. HEp-2細(xì)胞中的腺病毒6. HEp-2細(xì)胞中

5、的呼吸道合胞病毒7. LLC-MK2細(xì)胞中的甲型流感病毒8. LLC-MK2細(xì)胞中的乙型流感病毒9. LLC-MK2細(xì)胞中副流感病毒1、2和3型10. 質(zhì)控孔。除了嗜肺軍團菌，載玻片中的所有抗原都是從細(xì)胞培養(yǎng)物中獲得。每一個病毒孔里都含有1%15%用甲醛滅活的感染細(xì)胞，無感染的細(xì)胞用丙酮固定。2 PBS: 1瓶，pH 7.2PBS粉末，用1L蒸儲水溶解。3陽性質(zhì)控：500 L陽性質(zhì)控血清，含疊氮鈉。4陰性質(zhì)控：500 L陰性質(zhì)控血清，含疊氮鈉。5M FITC標(biāo)記的抗人IgM結(jié)合物：2 x 1.1mL,熒光素標(biāo)記的抗人IgM磷酸緩沖液, 含有伊文斯藍(lán)、疊氮鈉和蛋白穩(wěn)定劑。6封閉介質(zhì)：3mL,甘油

6、緩沖液，含疊氮鈉。7抗人IgG球蛋白（吸附劑）：1 x 1.5mL （羊抗人IgG,含疊氮鈉）。需要但未提供的材料：1 .精確的微量移液器2 .恒溫培養(yǎng)箱3 .蒸儲水4 . 24x60 mm蓋玻片5 .濕盒6 .熒光顯微鏡以及制造商推薦的濾光片【儲存要求及有效期】28c儲存。不要使用超出標(biāo)簽上有效期的試劑。未拆封的試劑盒28c儲存可穩(wěn)定至標(biāo)示有效期的月末。拆封后試劑的儲存試齊穩(wěn)定性和儲存溶解后的PBS2-8OC 4個月，在啟效期內(nèi)使用其它組分參照包裝標(biāo)簽的啟效期（2-8OC儲存）試劑的穩(wěn)定性及操作在無菌條件下操作試劑以防微生物污染。僅使用試驗所需量的吸附劑、PBS、質(zhì)控血清和結(jié)合物溶液，剩余的

7、試劑不要倒回瓶中。PBS溶解后儲存在28 0C,如出現(xiàn) 渾濁請勿使用。對于試劑盒內(nèi)試劑的不正確操作， VIRCELL, S.L.將不對其試驗結(jié)果負(fù)責(zé)。【適用儀器】熒光顯微鏡【注意事項】1 .僅用于體外診斷。僅限專業(yè)人員使用。2 .僅使用試劑盒內(nèi)的組分，不要混用不同試劑盒或不同廠家的試劑組分。只有PBS、吸附劑、封閉介質(zhì)和載玻片可與其他批次 VIRCELL IFA試劑盒通用，其它組分同批 次可以混用。3 .每步操作必須使用干凈吸頭，僅使用干凈的耗材，最好是一次性使用的耗材。4 .包裝如有損壞請勿使用。5 .切勿用嘴吸移液管加樣。6 .本試劑盒中的吸附劑、結(jié)合物和質(zhì)控血清含有動物源性物質(zhì)，質(zhì)控血清

8、還含有人源性物質(zhì)。盡管本試劑盒中的人血清質(zhì)控品已經(jīng)測試為 HBsAg、HCV抗體和HIV抗體陰性，質(zhì)控血清和病人樣本仍應(yīng)作為潛在感染性物質(zhì)進行處理?？變?nèi)包被的經(jīng)滅活*實驗前準(zhǔn)備只有PBS需要預(yù)先配制。將試劑2中的成分加入1L蒸儲水中，搖勻直止完全 溶解。配好后儲存在2-80C。的嗜肺軍團菌血清1型、肺炎支原體、Q熱立克次體、肺炎衣原體、腺病毒、呼吸道 合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型，也仍應(yīng)視為具有潛在感染性并小心處置。目前沒有方法可以確保這些或其他感染性物質(zhì)不存在，因此所有的材料應(yīng)視為具有潛在感染性進行處置，應(yīng)遵守當(dāng)?shù)仃P(guān)于臨床廢棄物處理的法規(guī)。7 .結(jié)合物、吸附劑

9、、封閉介質(zhì)和質(zhì)控品含有疊氮鈉（濃度0.1%）,避免接觸酸和重金屬。8 .封閉介質(zhì)含有甘油，請勿接觸酸和暴露在高溫下。9 .伊文斯藍(lán)（濃度 0.1%）是一種致癌物。請勿接觸皮膚和眼睛。萬一接觸到該溶 液，用水徹底沖洗并到醫(yī)院檢查。10 .僅按本說明書進行操作，不遵守規(guī)定的溫育時間和溫度會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。11 .載玻片上病人樣本交叉污染會導(dǎo)致錯誤結(jié)果，要小心操作防止發(fā)生。12 .顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)、光源條件和類型會影響熒光質(zhì)量。13 .不要將試劑不必要地放置在室溫下過長的時間。14 .每個載玻片只能使用一次。不要分割，也不要再使用沒有用過的孔。15 .試劑盒里的玻璃組分破碎時可能傷及身體，小心處理。1

10、6 .吸附劑加入樣本后要注意觀察是否有明顯的沉淀出現(xiàn)。【樣本要求】需由專業(yè)人員無菌靜脈穿刺采集血液。使用消毒或無菌技術(shù)能保持樣本的完整性。血清樣本采集后28 0C冷藏，如7天內(nèi)不檢測，則應(yīng)冷凍（-20OC）保存。不要 反復(fù)凍融以防止免疫球蛋白滴度降低，特別是 IgM。不要使用高血脂或污染的血清。 若樣本中含有微粒要離心使之澄清。【檢測方法】*實驗步驟1 .使用前，將所有試劑平衡至室溫。載玻片平衡至室溫后再打開。2 .按1:1比例稀釋血清標(biāo)本，即25人血清加入25人PBS2中。質(zhì)控血清3 4不需 要稀釋。3 .用抗人IgG吸附劑7處理稀釋后的血清：將30 pL稀釋后的血清加入150也吸附 劑中，

11、徹底混勻。質(zhì)控血清3和4不需吸附劑處理。處理后的血清要離心除去沉淀， 以防干擾檢測。4 .在載玻片1的每孔中加15小吸附劑處理過的血清。在一個載玻片的每孔中加入 15也不稀釋的陽性質(zhì)控3,在另一個載玻片的每孔中加入15人不稀釋的陰性質(zhì)控 比 5.將載玻片放入濕盒中，37c溫育90分鐘。6 .用PBS 2的緩慢水流簡單沖洗載玻片1 （避免PBS直接沖入孔內(nèi)）后，浸泡在PBS 中并放置在振蕩器上輕輕搖動10分鐘。將載玻片在蒸儲水中簡單蘸洗。7 .載玻片1自然風(fēng)干。8 .每孔加入15人抗人IgM FITC結(jié)合物溶液15M （不需稀釋）。9 .將載玻片放入濕盒，37 c溫育30分鐘。10 .重復(fù)6和7

12、的洗滌步驟。11 .每孔加1小滴封閉介質(zhì)甘，小心蓋上蓋玻片。12 .盡快用熒光顯微鏡在400倍放大率下觀察結(jié)果。如果不能立即觀察， 可將其避光 放置于2-80C不超過24小時?！緝?nèi)部質(zhì)量控制】每一批產(chǎn)品在放行前都要經(jīng)過更加嚴(yán)格的內(nèi)部質(zhì)量控制（ Q.C.）的檢驗。質(zhì)控材 料可溯源到經(jīng)過內(nèi)部確認(rèn)的參考血清盤?！居行耘袛唷棵恳淮卧囼灦紤?yīng)設(shè)立陽性和陰性質(zhì)控，以確認(rèn)試驗和試劑盒的有效性。觀察到的熒光模式應(yīng)為：陽性質(zhì)控：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性質(zhì)控的 1-15% 細(xì)胞出現(xiàn)蘋果綠細(xì)胞核和胞漿或胞膜熒光 （在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時 觀察到著色的合胞）；軍團菌、衣原體或立

13、克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠熒光； 支原體對陽性質(zhì)控在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。陰性質(zhì)控：軍團菌、肺炎衣原體和立克次體沒有熒光，支原體、腺病毒、甲型和 乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色?！緳z測結(jié)果的解釋】陽性結(jié)果： 可以觀察到腺病毒、 流感病毒、 呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性血清的1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核和胞漿出現(xiàn)蘋果綠色熒光 (在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時觀察到著色的合胞) ； 軍團菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光；支原體對陽性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。陰性結(jié)果：可觀察到軍團菌、 肺炎衣原體和立克次體沒有熒光， 支原體、 腺病毒、甲型

14、和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。如果所有細(xì)胞或第 10 孔出現(xiàn)熒光表明存在抗核或抗細(xì)胞抗體，不能判為陽性，應(yīng)用其他方法進行檢測。當(dāng)質(zhì)控孔中無熒光時一定要查明原因。由于非軍團菌感染的病人中經(jīng)常出現(xiàn)交叉抗體，陽性結(jié)果需結(jié)合臨床癥狀綜合評價。建議做較高稀釋度的檢測來提高陽性預(yù)測值。呼吸道感染IgG 聯(lián)檢試劑( PNEUMOSLIDE IgG )更適合于篩查試驗。對于廣泛流行的疾病，可能會在一個標(biāo)本中出現(xiàn)幾個陽性結(jié)果。呼吸道感染IgM 聯(lián)檢試劑( PNEUMOSLIDE IgM )由于其高度特異性，是一種非常適用的技術(shù)，因為 IgM 陽性不會超過3 個月，但對重復(fù)感染靈敏度較

15、低。近期感染診斷的理想方法是同時使用呼吸道感染IgG 聯(lián)檢試劑和呼吸道感染IgM 聯(lián)檢試劑： IgM 聯(lián)檢試劑適用于檢測成人的第一個標(biāo)本和兒童的第一、 第二個標(biāo)本， IgG 聯(lián)檢試劑適用于檢測成人的第二個標(biāo)本。與說明書中所列結(jié)果不同不能判為陽性。在初次感染和再次感染的過程中， IgG 和 IgM 抗體有不同的表現(xiàn)方式： 初次感染時，幾乎在所有的情況下 IgM 和 IgG 均出現(xiàn) ( IgM 早于 IgG 出現(xiàn)) ；而再次感染時，在所有的情況下均不出現(xiàn)IgM ，因此 IgG 的檢測是唯一有用的診斷方法。在許多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG,而IgM 一般情況下僅在感染后23個月 存在于

16、血清中，因此是近期感染的一個有效標(biāo)志物?！緳z驗方法的局限性】1 . 本試劑盒用于檢測人血清。2 . 建議用戶仔細(xì)閱讀和理解說明書，嚴(yán)格按照程序進行操作才能獲得可靠的檢測結(jié)果。 特別是樣本和試劑的正確吸取以及仔細(xì)的洗板、 溫育的時間控制對獲得準(zhǔn)確結(jié)果都是很重要的。3 .樣本的檢測結(jié)果應(yīng)與臨床評價以及其他診斷方法結(jié)合使用。4 .本檢測不能指出感染部位，不能單獨使用。5 .抗體水平無顯著上升時不能排除感染的可能性。6 .在感染早期采集的樣本可能是檢測不到IgG的，在這種情況下建議采用IgM檢測, 或者在14-21天后采集第二個血清樣本，并與原標(biāo)本同時檢測來確定是否發(fā)生血清轉(zhuǎn) 換。7 .嬰兒的IgG檢

17、測結(jié)果要作謹(jǐn)慎解釋，因為出生前母體的IgG被動的傳遞給了胎兒。 對6個月以下的嬰兒IgM檢測是更為有用感染標(biāo)志物。8 .單一樣本抗體檢測結(jié)果不能幫助作出近期感染的診斷。應(yīng)采集成對樣本（急性期 和康復(fù)期）同時檢測來觀察血清轉(zhuǎn)化或抗體水平的明顯升高。9 .對患有自身免疫性疾病病人的血清， 用IFA檢測時，支原體、腺病毒、流感病毒、 呼吸道合胞病毒和副流感病毒，會在細(xì)胞上發(fā)生非特異性反應(yīng)，這些血清不能用本方 法評價。質(zhì)控孔用于檢測這種現(xiàn)象。在嗜肺軍團菌和 Q熱立克次體中，有時血清會 含有與卵抗原反應(yīng)的抗體，所以使用卵黃囊固定抗原會出現(xiàn)非特異性熒光。 當(dāng)出現(xiàn)這 種情況時，該血清就不能用IFA進行分析了

18、。10 .未對本檢測在療效隨訪方面的性能做過評估。11 .除了肺炎外，未對本技術(shù)在肺炎衣原體引起的其他疾病方面的性能作過評估。 【產(chǎn)品性能指標(biāo)】1 .靈敏度和特異性嗜肺軍團菌血清1型與另一個商品化的IFA試劑盒對照檢測82份血清樣本，結(jié)果如下：樣本數(shù)靈敏度特異性IgM8294.4%98.4%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。肺炎支原體與一種ELISA試劑盒對照檢測62份血清樣本，結(jié)果如下:樣本數(shù)靈敏度特異性IgM6296.8%100.0%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。Q熱立克次體與另一個商品化的IFA試劑盒對照檢測74份血清樣本，結(jié)果如下:樣本數(shù)靈敏度特異性IgM74100.0

19、%97.6%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。肺炎衣原體與另一個商品化的IFA試劑盒對照檢測61份血清樣本，結(jié)果如下:靈敏度特異性IgM61100.0%98. 0%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。腺病毒與一種ELISA試劑盒對照檢測74份血清樣本，結(jié)果如下:樣本數(shù)靈敏度特異性IgM7485.7%97.0%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。呼吸道合胞病毒與一種ELISA試劑盒對照檢測97份血清樣本，結(jié)果如下:樣本數(shù)靈敏度特異性IgM9793.8%100.0%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。甲型流感病毒與一種ELISA試劑盒對照檢測46份血清樣本，結(jié)果如下:樣本數(shù)靈敏度

20、特異性IgM4694.1%96.4%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。乙型流感病毒與一種ELISA試劑盒對照檢測40份血清樣本，結(jié)果如下:樣本數(shù)靈敏度特異性IgM40100.0%96.4%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。副流感病毒1、2和3型與一種ELISA試劑盒對照檢測36份血清樣本。結(jié)果如下:樣本數(shù)靈敏度特異性IgM36100.0%96.3%有非特異性反應(yīng)的的血清從最終計算中刪除。2 .精密度分析內(nèi)精密度：在相同實驗條件下由同一個操作人員在同一次試驗中對3份血清（2份陽性和1份陰性）分別進行5組加樣檢測。結(jié)果：滴度變化不超過一個稀釋度。分析間精密度：在5種不同條件下（不同操作

21、人員或不同試驗日期）對3份血清（2份陽性和1份陰性）進行檢測。結(jié)果：滴度變化不超過一個稀釋度。3 .交叉反應(yīng)和干擾嗜肺軍團菌血清1型檢測 20 份細(xì)菌綜合病癥組（肺炎支原體、肺炎衣原體和 Q 熱立克次體）、革蘭氏陰性細(xì)菌（布魯氏菌，沙門氏菌）和抗核抗體陽性血清樣本。肺炎支原體檢測 12 份細(xì)菌綜合病癥組（嗜肺軍團菌、肺炎衣原體和 Q 熱立克次體）陽性血清樣本。Q 熱立克次體檢測 20 份細(xì)菌綜合病癥組（肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團菌）、同種屬的細(xì)菌（發(fā)疹傷寒等的病原體）和抗核抗體陽性血清樣本。肺炎衣原體檢測 20 份細(xì)菌綜合病癥組（嗜肺軍團菌、 Q 熱立克次體和肺炎支原體），同種屬的細(xì)菌（

22、發(fā)疹傷寒等的病原體）和抗核抗體陽性血清樣本。腺病毒檢測8份病毒綜合病癥組（RSV、甲型和乙型流感病毒和副流感病毒）陽性血清樣本。呼吸道合胞病毒檢測 10 份病毒綜合病癥組（腺病毒、甲型和乙型流感病毒和副流感病毒）或根據(jù)病毒分類（麻疹）陽性血清樣本。甲型流感病毒檢測 8 份病毒綜合病癥組（ RSV 、乙型流感病毒、腺病毒和副流感病毒）陽性的血清樣本。乙型流感病毒檢測 8 份病毒綜合病癥組（ RSV 、甲型流感病毒、腺病毒和副流感病毒）陽性血清樣本。副流感病毒血清1、 2 和 3 型檢測 8 份病毒綜合病癥組 （ RSV、 甲型和乙型流感病毒和腺病毒） 陽性血清樣本。結(jié)論檢測結(jié)果表明本試劑盒與上述

23、參考品無交叉反應(yīng)或干擾， 從而證實了該試劑盒的特異性反應(yīng)。其它干擾研究對25份類風(fēng)濕因子陽性血清進行了 2種病毒和2種細(xì)菌抗原IgG和IgM抗體 的檢測。對另外兩份血清進行了每種抗原IgG和IgM抗體的檢測。在IgM檢測中，用抗IgG抗體對血清進行了吸附處理。結(jié)果顯示，吸附劑可以有效避免類風(fēng)濕因子的 干擾。經(jīng)驗證，吸附劑也可以有效地避免IgG抗體過量造成的假陰性。 【標(biāo)簽符號】IVD體外診斷用醫(yī)療器械使用肩效期80C20C /儲存條件2-80C可用于檢測的次數(shù)（規(guī)格）應(yīng)批號畫目S3使用說明書wuJ aJ每個載玻片上反應(yīng)孔的數(shù)量【簡明操作程序】【參考文獻(xiàn)】1. Berdal, B. P.; Fi

24、elds, P. I., and Melbye, H. Chlamydia pneumoniae respiratory tract infection: the interpretation of high titres in the complement fixation test. Scand J Infect Dis. 1991; 23(3):305-7.2. Buchner, Y. I.; Heath, R. B.; Collins, J. V., and Pattison, J. R. Serum IgM antibody and influenza A infection. J

25、Clin Pathol. 1977 Aug; 30(8):723-7.3. Champsaur, H.; Fattal-German, M., and Arranhado, R. Sensitivity and specificity of viral immunoglobulin M determination by indirect enzyme-linked immunosorbent assay. J Clin Microbiol. 1988 Feb; 26(2):328-32.4. De Ory, F.; Echevarria, J. M.; Pelaz, C.; Tellez, A

26、.; Mateo, M. A., and Lopez, J. Detection of specific IgM antibody in the investigation of an outbreak of pneumonia due to Legionella pneumophila serogroup 1. Clin Microbiol Infect. 2000 Feb; 6(2):64-9.5. Dupuis, G.; Peter, O.; Peacock, M.; Burgdorfer, W., and Haller, E. Immunoglobulin responses in a

27、cute Q fever. J Clin Microbiol. 1985 Oct; 22(4):484-7.6. Echevarria, J. M.; Leon, P.; Balfagon, P.; Lopez, J. A., and Fernandez, M. V. Diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection by microparticle agglutination and antibody-capture enzyme-immunoassay. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1990 Mar; 9(3):

28、217-20.7. Edelstein. Detection of antibodies to Legionella. En Rose, N.R., Conway de Macario, E., Fahey, J.L., Friedman, H., Penn, G.M. (eds). Manual of Clinical Laboratory Immunology (4a Ed) American Society for Microbiology. Washington. 1992. pp:459-466.8. Field, P. R.; Hunt, J. G., and Murphy, A.

29、 M. Detection and persistence of specific IgM antibody to Coxiella burnetii by enzyme-linked immunosorbent assay: a comparison with immunofluorescence and complement fixation tests. J Infect Dis. 1983 Sep; 148(3):477-87.9. Grdanoska T; Petrovska M; Cvetkovic D; Kotevska V; Dokic-Trajkovska E; Kondov

30、aI, and Panovski N. Pneumo-slide: serological investigation of human respiratory infections.2nd Balkan Conference of Microbiology. Thessaloniki. 2001.10. Hunt, J. G.; Field, P. R., and Murphy, A. M. Immunoglobulin responses to Coxiella burnetii (Q fever): single-serum diagnosis of acute infection, u

31、sing an immunofluorescence technique. Infect Immun. 1983 Feb; 39(2):977-81.11. Julkunen, I.; Lehtomaki, K., and Hovi, T. Immunoglobulin class-specific serological responsesto adenovirus in respiratory infections of young adult men. J Clin Microbiol. 1986 Jul; 24(1):112-5.12. Korppi, M.; Halonen, P.;

32、 Kleemola, M., and Launiala, K. The role of parainfluenza viruses in inspiratory difficulties in children. Acta Paediatr Scand. 1988 Jan; 77(1):105-11.13. Lee, S. H.; Charoenying, S.; Brennan, T.; Markowski, M., and Mayo, D. R. Comparative studies of three serologic methods for the measurement of My

33、coplasma pneumoniaeantibodies. Am J Clin Pathol. 1989 Sep; 92(3):342-7.14. Peter, O.; Dupuis, G.; Peacock, M. G., and Burgdorfer, W. Comparison of enzyme-linked immunosorbent assay and complement fixation and indirect fluorescent-antibody tests for detection of Coxiella burnetii antibody. J Clin Microbiol. 1987 Jun; 25(6):1063-7.15. Toms, G. L.; Webb, M. S.; Milner, P. D.; Milner, A. D.; Routledge, E. G.; Scott, R.; Stokes, G. M.; Swarbrick, A., and Taylor, C. E. IgG and IgM antibodies to viral glycoproteins in respiratory syncytial virus infections of graded severity. Arch Dis Child. 1989