實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測定

1、.實(shí)驗(yàn)須知.實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄是在進(jìn)行科學(xué)研究過程中積累資料、經(jīng)驗(yàn)的一項(xiàng)重要工作，實(shí)驗(yàn)記錄是在進(jìn)行科學(xué)研究過程中積累資料、經(jīng)驗(yàn)的一項(xiàng)重要工作，每一次實(shí)驗(yàn)過程中都應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成良好的習(xí)慣，及時(shí)做好記錄和總結(jié)。每一次實(shí)驗(yàn)過程中都應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成良好的習(xí)慣，及時(shí)做好記錄和總結(jié)。要求：要求： 真實(shí)性真實(shí)性 原始性原始性 完整性完整性 條理性條理性實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。完整的實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)題目、實(shí)驗(yàn)日期、實(shí)驗(yàn)?zāi)康尿?yàn)報(bào)告應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)題目、實(shí)驗(yàn)日期、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)儀

2、器和試劑、操作步驟、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)論等項(xiàng)目。儀器和試劑、操作步驟、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)論等項(xiàng)目。.實(shí)驗(yàn)室規(guī)則實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 上實(shí)驗(yàn)課時(shí)不遲到，不早退，自覺遵守課堂紀(jì)律，上課時(shí)應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)上實(shí)驗(yàn)課時(shí)不遲到，不早退，自覺遵守課堂紀(jì)律，上課時(shí)應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室安靜，不得大聲說笑。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿實(shí)驗(yàn)工作服。室安靜，不得大聲說笑。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿實(shí)驗(yàn)工作服。 實(shí)驗(yàn)課前認(rèn)真預(yù)習(xí)有關(guān)課程，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、要求和注意事?xiàng)，熟悉實(shí)驗(yàn)課前認(rèn)真預(yù)習(xí)有關(guān)課程，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、要求和注意事?xiàng)，熟悉實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法步驟。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法步驟。 實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，按教師要求，認(rèn)真操作。要細(xì)心觀察實(shí)實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，

3、按教師要求，認(rèn)真操作。要細(xì)心觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，認(rèn)真記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，作出結(jié)論，最后寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。驗(yàn)現(xiàn)象，認(rèn)真記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，作出結(jié)論，最后寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。要愛護(hù)公物，小心使用儀器和實(shí)驗(yàn)設(shè)備，注意節(jié)約用水、電、藥品和要愛護(hù)公物，小心使用儀器和實(shí)驗(yàn)設(shè)備，注意節(jié)約用水、電、藥品和器材。器材。. 所有固體廢棄物如：廢紙、固體廢棄物、沉淀物等必須棄于垃圾桶所有固體廢棄物如：廢紙、固體廢棄物、沉淀物等必須棄于垃圾桶中。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿必須倒入玻璃器皿中，用水稀釋后倒入水槽。中。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿必須倒入玻璃器皿中，用水稀釋后倒入水槽。 實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺應(yīng)保持整潔。公用試劑用畢，立即蓋嚴(yán)并還原。實(shí)實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺應(yīng)保持整潔。公用試劑用畢

4、，立即蓋嚴(yán)并還原。實(shí)驗(yàn)完畢，儀器洗凈放好。驗(yàn)完畢，儀器洗凈放好。 在實(shí)驗(yàn)過程中必須遵守操作規(guī)程，不得隨意亂動亂用。如不會使用，在實(shí)驗(yàn)過程中必須遵守操作規(guī)程，不得隨意亂動亂用。如不會使用，應(yīng)請教指導(dǎo)教師。凡因亂動亂用違反操作規(guī)程而損壞儀器設(shè)備，造應(yīng)請教指導(dǎo)教師。凡因亂動亂用違反操作規(guī)程而損壞儀器設(shè)備，造成事故者，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠償和處理。成事故者，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠償和處理。 嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃飯、吸煙、扔廢物和隨地吐痰，實(shí)驗(yàn)結(jié)束離開實(shí)嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃飯、吸煙、扔廢物和隨地吐痰，實(shí)驗(yàn)結(jié)束離開實(shí)驗(yàn)室之前，關(guān)好窗戶，切斷電源，水源，確保安全。驗(yàn)室之前，關(guān)好窗戶，切斷電源，水源，確保安全。.5 5實(shí)驗(yàn)室安

5、全實(shí)驗(yàn)室安全n使用玻璃、金屬器材時(shí)注意防止割傷及機(jī)械創(chuàng)傷。如發(fā)生意外，找實(shí)使用玻璃、金屬器材時(shí)注意防止割傷及機(jī)械創(chuàng)傷。如發(fā)生意外，找實(shí)驗(yàn)室工作人員驗(yàn)室工作人員( (少量急用藥物備用少量急用藥物備用) )。n濃酸、濃堿腐蝕性很強(qiáng)，必須極為小心地操作。用吸量管量取這些試濃酸、濃堿腐蝕性很強(qiáng)，必須極為小心地操作。用吸量管量取這些試劑劑( (包括有毒物包括有毒物) )時(shí)，必須使用橡皮球，絕對不能用口吸取。時(shí)，必須使用橡皮球，絕對不能用口吸取。n微生物、動物的組織、細(xì)胞培養(yǎng)物、血液和分泌物微生物、動物的組織、細(xì)胞培養(yǎng)物、血液和分泌物 都可能存在細(xì)菌都可能存在細(xì)菌和病毒感染的潛在危害，處理生物材料必需小心

6、謹(jǐn)慎，做完實(shí)驗(yàn)必須和病毒感染的潛在危害，處理生物材料必需小心謹(jǐn)慎，做完實(shí)驗(yàn)必須用肥皂、洗滌劑或消毒液洗手。用肥皂、洗滌劑或消毒液洗手。n被污染的物品，必須進(jìn)行高壓消毒或燒成灰燼。被污染的物品，必須進(jìn)行高壓消毒或燒成灰燼。n被污染的玻璃用具應(yīng)在清洗和高壓消毒前立即浸泡在適當(dāng)?shù)南疽褐?。被污染的玻璃用具?yīng)在清洗和高壓消毒前立即浸泡在適當(dāng)?shù)南疽褐小?試劑使用規(guī)則試劑使用規(guī)則使用試劑前應(yīng)該仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，看清名稱及濃度，是否為本實(shí)驗(yàn)所需。使用試劑前應(yīng)該仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，看清名稱及濃度，是否為本實(shí)驗(yàn)所需。取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用完的試劑決不可倒回原取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用

7、完的試劑決不可倒回原瓶。瓶。取標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入干凈燒杯中，再用干凈吸管吸取標(biāo)取標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入干凈燒杯中，再用干凈吸管吸取標(biāo)準(zhǔn)液，以免污染瓶中的標(biāo)準(zhǔn)液體。準(zhǔn)液，以免污染瓶中的標(biāo)準(zhǔn)液體。使用滴管時(shí)，滴管尖端朝下，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用滴管時(shí)，滴管尖端朝下，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用有毒試劑及強(qiáng)酸強(qiáng)堿時(shí)，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球使用有毒試劑及強(qiáng)酸強(qiáng)堿時(shí)，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。.吸量管的使用吸量管的使用正確拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指頂住吸量管頂端。正確拿法：中指和拇指拿住

8、吸管上端，食指頂住吸量管頂端。取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸量管上端。指頂住吸量管上端。調(diào)刻度：吸量管與地面保持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；調(diào)刻度：吸量管與地面保持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；用食指控制液體下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一用食指控制液體下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一水平面上。水平面上。放液：吸量管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，放液：吸量管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放開

9、食指，使液體自動流出。吸量并成一角度，吸量管仍保持垂直。放開食指，使液體自動流出。吸量管應(yīng)最后靠壁管應(yīng)最后靠壁1515秒。秒。.吸量管上端標(biāo)有吸量管上端標(biāo)有“吹吹”字。將所量液體全部放出后，還需要吹出字。將所量液體全部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶液。此類吸量管為殘留于管尖的溶液。此類吸量管為“吹出式吹出式”，未標(biāo)，未標(biāo)“吹吹”字的字的吸量管，則不必吹出管尖的殘留液體。吸量管，則不必吹出管尖的殘留液體。(0.5ml(0.5ml以下的都要吹）以下的都要吹）吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，以免污染吸量管及試劑。以免污

10、染吸量管及試劑。吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)及時(shí)用自來水沖洗干凈。如果吸取一般試劑的吸量管可不必馬上及時(shí)用自來水沖洗干凈。如果吸取一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，待實(shí)驗(yàn)完畢后，用自來水沖洗干凈，晾干備用。沖洗，待實(shí)驗(yàn)完畢后，用自來水沖洗干凈，晾干備用。 吸量管的使用注意事項(xiàng)吸量管的使用注意事項(xiàng).玻璃器皿的一般清洗方法玻璃器皿的一般清洗方法一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來水洗刷后，一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自來水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗用洗衣粉刷洗，

11、再用自來水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗2 23 3次。次。干燥備用。干燥備用。容量分析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來水沖洗，容量分析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來水沖洗，待晾干后，再用鉻酸洗液浸泡數(shù)小時(shí)，然后用自來水充分沖洗，待晾干后，再用鉻酸洗液浸泡數(shù)小時(shí)，然后用自來水充分沖洗，最后用蒸餾水淋洗最后用蒸餾水淋洗2 23 3次，干燥備用。次，干燥備用。比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗。洗不凈時(shí)，用鹽酸或適當(dāng)比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗。洗不凈時(shí)，用鹽酸或適當(dāng)溶劑沖洗，再用自來水沖洗。避免用堿液或強(qiáng)氧化劑清洗，切忌溶劑沖洗，再用自來水沖洗。避免用堿液或強(qiáng)氧化劑清洗，切忌用試

12、管刷或粗糙布用試管刷或粗糙布( (紙紙) )擦拭。擦拭。上述所有玻璃器材洗凈上述所有玻璃器材洗凈( (以倒置后器壁不掛水珠為干凈的標(biāo)準(zhǔn)以倒置后器壁不掛水珠為干凈的標(biāo)準(zhǔn)) )后，后，根據(jù)需要晾干或烘干。根據(jù)需要晾干或烘干。 .實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)和等電點(diǎn)測定和等電點(diǎn)測定.一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康? 1、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)2 2、學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的一種方法、學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的一種方法( (沉淀法沉淀法) ).二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理n蛋白質(zhì)是蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：列平衡：n

13、蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液的酸溶液的酸堿度堿度影響。影響。.n常用方法：利用常用方法：利用溴甲酚綠指示劑溴甲酚綠指示劑的變色來的變色來觀察蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)。觀察蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)。3.85.6.n當(dāng)溶液的當(dāng)溶液的pHpH為一定值時(shí)，蛋白質(zhì)極性基團(tuán)解離的為一定值時(shí)，蛋白質(zhì)極性基團(tuán)解離的正負(fù)離子數(shù)相等，凈電荷為正負(fù)離子數(shù)相等，凈電荷為0 0，此溶液的，此溶液的pHpH值為值為該該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。n不同蛋白質(zhì)具有各自特定的等電點(diǎn)，與該蛋白質(zhì)不同蛋白質(zhì)具有各自特定的等電點(diǎn)，與該蛋白質(zhì)的組成結(jié)構(gòu)有關(guān)。的組成結(jié)構(gòu)有關(guān)。n在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有

14、變化，可利在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化，可利用性質(zhì)的變化測定各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。用性質(zhì)的變化測定各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。n常用方法常用方法：觀察蛋白溶液在不同：觀察蛋白溶液在不同pHpH值下的溶解度。值下的溶解度。問題：蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測定還有哪些方法問題：蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測定還有哪些方法?.n本實(shí)驗(yàn)通過本實(shí)驗(yàn)通過觀察不同觀察不同pHpH溶液中酪蛋白的溶解溶液中酪蛋白的溶解度來測定其等電點(diǎn)度來測定其等電點(diǎn)。n用醋酸與醋酸鈉（醋酸鈉混合在酪蛋白溶液用醋酸與醋酸鈉（醋酸鈉混合在酪蛋白溶液中）配制各種不同中）配制各種不同pHpH值的緩沖液。向各緩沖值的緩沖液。向各緩沖溶液中加入酪蛋白后，溶液中加入酪

15、蛋白后，沉淀出現(xiàn)最多的緩沖沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液的液的pHpH值即為酪蛋白的等電點(diǎn)值即為酪蛋白的等電點(diǎn)。.三、試劑儀器和試劑三、試劑儀器和試劑1 1、儀器設(shè)備、儀器設(shè)備 n試管及試管架試管及試管架n滴管滴管n吸量管吸量管n容量瓶容量瓶 .n0.5% 0.5% 酪蛋白溶液酪蛋白溶液n0.01%0.01%溴甲基溴甲基酚綠指示劑酚綠指示劑n0.10 mol/L 0.10 mol/L 鹽酸溶液鹽酸溶液n0.10 0.10 mol/L mol/L 氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液n1.00 mol/L 1.00 mol/L 醋酸溶液醋酸溶液n0.10 mol/L 0.10 mol/L 醋酸溶液醋酸溶液n0.01 mol/L 0.01 mol/L 醋酸溶液醋酸溶液2 2、試劑、試劑.四、實(shí)驗(yàn)步驟與結(jié)果四、實(shí)驗(yàn)步驟與結(jié)果1 1、觀察蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)、觀察蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng).（2 2）觀察其混濁度。靜置）觀察其混濁度。靜置1515分鐘后，再觀察其混分鐘后，再觀察其混濁度。結(jié)果可用濁度。結(jié)果可用“+ +、+、+”表示渾濁度，表示渾濁度，最混最混濁的一管濁的一管pHpH即接近酪蛋白的等電點(diǎn)即接近酪蛋白的等電點(diǎn)。（1）取5支試管，按書中表格分別加入各試劑，混勻。2 2、測定酪蛋白等電點(diǎn)、測定酪蛋白等電點(diǎn).n實(shí)驗(yàn)結(jié)果：