分析方法驗(yàn)證培訓(xùn)

1、 2.0驗(yàn)證前需要考慮的事情驗(yàn)證前需要考慮的事情概念 分析方法形成過(guò)程 驗(yàn)證需要考慮的因素 驗(yàn)證基本假設(shè)（前提） 現(xiàn)有驗(yàn)證指南缺陷 分析方法驗(yàn)證方案內(nèi)容 儀器的確認(rèn) 2 . 1概念 1 ：分析方法ICHQ2定義： 分析方法是指進(jìn)行分析的方式，應(yīng)詳細(xì)描述每一個(gè)分析試驗(yàn)所必需的步驟 它包括，但不局限于：樣品，參照對(duì)照品，試劑的配制，儀器的使用，標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，計(jì)算公式的運(yùn)用等2 . 1概念2 分析方法驗(yàn)證 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則定義： 為使測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，必須對(duì)所采用的分析方法的科學(xué)性，準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn)證，以充分表明分析方法符合測(cè)試項(xiàng)目的目的和要求，這就是通常所說(shuō)的對(duì)方法

2、進(jìn)行驗(yàn)證2 . 2分析方法形成過(guò)程2 . 3什么情況分析方法需要驗(yàn)證？ 剛開(kāi)發(fā)的分析方法 修正或建立分析方法用于新的問(wèn)題 分析方法變更 分析方法在不同實(shí)驗(yàn)室，分析人員使用 不同儀器 證明兩個(gè)分析方法的等效性2.4驗(yàn)證需要考慮的因素 確認(rèn)并校驗(yàn)的儀器 文件化的方法 可靠地參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)品 合格的分析人員 樣品完整性2.5驗(yàn)證基本假設(shè) 前提） 專屬性得到證明 方法己經(jīng)是最佳條件 用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理數(shù)據(jù)2.6 現(xiàn)有驗(yàn)證指南缺陷 僅僅提出了要求驗(yàn)證的項(xiàng)目 沒(méi)有給出具體的驗(yàn)證方法 沒(méi)有給出判斷標(biāo)準(zhǔn) 一些驗(yàn)證中的實(shí)際問(wèn)題沒(méi)有指導(dǎo)原則2.7 分析方法驗(yàn)證方案內(nèi)容 闡明目的和范圍 責(zé)任 書(shū)面的分析方法 使用的物料與儀

3、器目錄 每一參數(shù)的實(shí)驗(yàn)程序 統(tǒng)計(jì)方法 每一參數(shù)的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)2 . 8 儀器的確認(rèn) 構(gòu)造，型號(hào)和制造商手冊(cè) 改造 安裝確認(rèn)和運(yùn)行確認(rèn) 校準(zhǔn)程序 維護(hù)保養(yǎng)養(yǎng)計(jì)劃3 . 0 不同驗(yàn)證具體要求 驗(yàn)證的范圍 新方法驗(yàn)證步驟 方法轉(zhuǎn)移驗(yàn)證 方法重新驗(yàn)證3 . 1 驗(yàn)證的范圍 新方法要求進(jìn)行完整的驗(yàn)證 藥典的方法要求部分進(jìn)行驗(yàn)證（確證） 重大要的變化需要進(jìn)行部分再驗(yàn)證3 . 2 新方法驗(yàn)證步驟 開(kāi)發(fā)新方法或從相關(guān)實(shí)驗(yàn)室獲得新方法 制定驗(yàn)證方案，驗(yàn)證規(guī)程或驗(yàn)證主計(jì)劃 確定方法（驗(yàn)證）適用的目標(biāo)，范圍 確定實(shí)驗(yàn)參數(shù)及可接受的標(biāo)準(zhǔn) 確定驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)過(guò)程 確認(rèn)驗(yàn)證使用的儀器相關(guān)性能3.2-新方法驗(yàn)證步驟（續(xù)1） 確認(rèn)驗(yàn)證

4、所需的人員，試劑及標(biāo)準(zhǔn) 運(yùn)行預(yù)驗(yàn)證試驗(yàn) 如果需要調(diào)整方法或接受標(biāo)準(zhǔn) 運(yùn)行完整的驗(yàn)證試驗(yàn) 建立該方法的SOP用于日常分析工作 確定需要重新驗(yàn)證方法的標(biāo)準(zhǔn)3.2-新方法驗(yàn)證步驟（續(xù)2） 確定日常工作中系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試及/或分析質(zhì)量控制檢查的類型及頻率 將驗(yàn)證過(guò)程，結(jié)果及結(jié)論總結(jié)形成完整的驗(yàn)證報(bào)告3.2.1概念3：替代分析方法FDA定義： 目的在于替代法規(guī)分析方法的分析方法3 . 2 . 2基本內(nèi)容 專屬性 檢測(cè)限 定量限 精密度 線性與范圍 準(zhǔn)確度 耐用性3 . 2 . 3分析方法按特性分類 第一類主成分定量 第二類雜質(zhì)或降解產(chǎn)物測(cè)定 第三類性能特點(diǎn)測(cè)定 第四類鑒別試驗(yàn)USPICHWHO選擇性選擇性

5、選擇性線性度及范圍 線性度線性度及范圍范圍準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度精密度精密度重復(fù)性精密度 中間精密度重現(xiàn)性檢測(cè)限檢測(cè)限檢測(cè)限定量限定量限定量限耐用性耐用性耐受性3 . 2 . 4ICH,USP及WHO驗(yàn)證要求3.2.4.1FDA要求驗(yàn)證項(xiàng)目鑒別雜質(zhì)限度雜志定量含量及溶出度 特性準(zhǔn)確度-+ +重復(fù)性-+中間精密度-+專屬性+檢測(cè)限-+- - -定量限-+- -線性-+ -范圍-+ -耐用性-+3.2.4.2ICH要求驗(yàn)證項(xiàng)目鑒別雜質(zhì)限度雜志定量含量及溶出度準(zhǔn)確度-+ +重復(fù)性-+中間精密度-+專屬性+檢測(cè)限-+- -定量限-+-線性-+范圍-+耐用性3.2.4.3WHO要求驗(yàn)證項(xiàng)目鑒別雜質(zhì)定量雜質(zhì)限

6、度含量特性準(zhǔn)確度-+ -+ + 精密度-+ -+ + 耐用性+ + + + + 線性和范圍-+ -+ + 專屬性+ + + + + 檢測(cè)限-+ -定量限-+ -3 . 3方法轉(zhuǎn)移驗(yàn)證 證明經(jīng)過(guò)其它實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)證，并可以正式運(yùn)行的分析測(cè)試過(guò)程，是否可以在本實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行，并適應(yīng)實(shí)際的使用情況： 滿足相應(yīng)的測(cè)試要求 真實(shí)反映被測(cè)物相應(yīng)的特性， 濃度，質(zhì)量，純度及效價(jià)情況3 . 3 . 1概念 4 ：法規(guī)分析方法FOA 定義： 是用于評(píng)佑原料藥或制劑某一個(gè)規(guī)定特性的分析方法3.3.2概念5 :交叉驗(yàn)證FDA定義： 在同一個(gè)研究或不同交叉研究中，用兩種或多種分析方法進(jìn)行分析，對(duì)驗(yàn)證參數(shù)進(jìn)行比較3 . 3 .

7、 3轉(zhuǎn)移驗(yàn)證方法來(lái)源 官方認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn) USP/NF EP BP ChP JP AOAC 客戶提供的，經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后的方法 相關(guān)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)證后正在使用的方法3 . 3 . 4轉(zhuǎn)移驗(yàn)證的要求 系統(tǒng)適應(yīng)性及方法專屬性必須驗(yàn)證 方法耐用性可以不驗(yàn)證 雜質(zhì)測(cè)試方法檢測(cè)限與定量限必須驗(yàn)證 其它驗(yàn)證項(xiàng)目根據(jù)實(shí)際情況決定，對(duì)于項(xiàng)目的選擇與取舍應(yīng)有詳細(xì)的討論3 . 3 . 5分析方法轉(zhuǎn)移驗(yàn)證 分析方法轉(zhuǎn)移方案及程序 精密度 準(zhǔn)確度 耐用性 編寫(xiě)并批準(zhǔn)的具體測(cè)試方法 熟練程度核實(shí) 新實(shí)驗(yàn)室正式驗(yàn)收3 . 4方法再驗(yàn)證 概念 需運(yùn)行方法再驗(yàn)證的變更情況 方法再驗(yàn)證要求3 . 4 . 1概念 6 ：方法再驗(yàn)證 化學(xué)藥物質(zhì)

8、量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則定義： 在某些情況下，如原料藥合成工藝改變，制劑處方改變，分析方法發(fā)生改變等，均有必要對(duì)分析方法再次進(jìn)行全面或部分指標(biāo)的驗(yàn)證，以保證分析方法可靠，這一過(guò)程稱為方法再驗(yàn)證3 . 4 . 2需運(yùn)行方法再驗(yàn)證的變更情況 改變藥物合成工藝 改變制劑組成 改變分析過(guò)程 操作過(guò)程的更改 改變儀器，色譜柱等硬件 測(cè)試條件持續(xù)改變以適應(yīng)系統(tǒng)適應(yīng)性要求，且改變程度超出藥典規(guī)定的方法耐用性驗(yàn)證范圍3 . 4 . 3方法再驗(yàn)證要求 證實(shí)相應(yīng)的變更發(fā)生后，原使用的分析測(cè)試過(guò)程： 能夠繼續(xù)保持其特有的性質(zhì)（如專屬性） 能夠繼續(xù)真正反映被測(cè)物的相應(yīng)特性（檢測(cè)限與定量限） 依靠變更情況確定重新

9、驗(yàn)證的內(nèi)容與程度4 . 0其它 概念 參考文獻(xiàn)4 . 1概念 7 ：系統(tǒng)適應(yīng)性 在一個(gè)系統(tǒng)（主要是色譜分離系統(tǒng)）被使用前，檢查其系統(tǒng)性能指標(biāo)是否滿足分析要求的過(guò)程 它是確保色譜系統(tǒng)質(zhì)量性能的要素4 . 1概念8：接受標(biāo)準(zhǔn)FDA定義： 用于驗(yàn)收分析結(jié)果的數(shù)字限度，范圍，或其他適當(dāng)?shù)挠?jì)量4 . 2 一參考文獻(xiàn)ICH 一 QZA Text on Validatlon of Analytical Procedure : ( 1994 ) ICH 一 QZB Validation on AnaIytical Procedures : Methodology： ( 1995 ) CDER Reviewer

10、 Guidance : Validation of ChromatographicMethod ( 1994 ) CDER Submitting Samples and Analytical Data for MethodValidations （1987 ) CDER Draft Analytical Procedures and Method Validation ( 2000 )CDER Bioanalytical Method Validation for Human Studles ( 1999 ) USP Vaildation of Compendial Methods ( cur

11、rent revlsion ) 中國(guó)藥典：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證Validation of Analytical Procedure分析方法驗(yàn)證 第一部分：基本要求Validation of Analytical Procedure分析方法驗(yàn)證 第二部分：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作1.0講座目的 掌握驗(yàn)證試驗(yàn)設(shè)計(jì) 掌握驗(yàn)證試驗(yàn)操作 了解確定接受標(biāo)準(zhǔn)原則第一部分:基本要求Validation of Analytical Procedure 分析方法驗(yàn)證第二部分:實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作1.0講座目的 掌握驗(yàn)證試驗(yàn)設(shè)計(jì) 掌握驗(yàn)證試驗(yàn)操作 了解確定接受標(biāo)準(zhǔn)原則2 . 0 一精密度概念容易混淆的精密度中術(shù)語(yǔ)重復(fù)性中間精密

12、度推薦重復(fù)性接受標(biāo)準(zhǔn) AOAC 濃度與精密度關(guān)系重現(xiàn)性2 . 1 一概念 1 ：精密度lCH-Q2 定義：分析方法的精密度指在規(guī)定條件下，對(duì)均質(zhì)樣品，多次取樣進(jìn)行一系列檢測(cè)結(jié)果的接近程度（離散程度）2 . 2 一容易混淆的精密度中術(shù)語(yǔ)儀器重復(fù)性 相同人員，儀器，日期，標(biāo)準(zhǔn)液方法重復(fù)性 相同人員，儀器，日期，重新配制標(biāo)準(zhǔn)液中間精密度 不同日期，不同分析人員，不同儀器2 . 3 一重復(fù)性概念推薦重復(fù)性測(cè)定方法2 . 3 . 1 一概念 2 ：重復(fù)性ICH -Q2 定義：重復(fù)性是指在同樣的操作條件下，較短時(shí)間間隔的精密度2 . 3 . 2 一推薦重復(fù)性測(cè)定方法在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)重復(fù)測(cè)定 如 3

13、個(gè)濃度，每個(gè)濃度 3 次或 100 的測(cè)試濃度，測(cè)定六次 記錄每次測(cè)定各組分響應(yīng)計(jì)算各響應(yīng)值與平均值之間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.3.2.1-概念3：系統(tǒng)重復(fù)性相同條件下，同一分析人員對(duì)同一樣品溶液多次測(cè)試結(jié)果的接近程度2 . 3 . 2 . 2 系統(tǒng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一均勻標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液連續(xù)重復(fù)測(cè)定六次記錄每次測(cè)定各組分響應(yīng)計(jì)算各響應(yīng)值與平均值之間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.3.2.3-概念4：方法重復(fù)性相同條件下，同一個(gè)分析人員對(duì)同一個(gè)均勻樣品，多次取樣測(cè)定所得結(jié)果的接近程度2 . 3 . 2 . 4 一方法重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)均勻樣品 按照分析方法規(guī)定至少稱量出六份 按含量測(cè)定方法測(cè)定每一份樣品含量 計(jì)算每一次

14、測(cè)定的含量與平均含量之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.4-中間精密度 概念 推薦中間精密度測(cè)定方法2 . 4 . 1 一概念 5 ：中間精密度ICH-Q2 定義 中間精密度指的是試驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如：不同日，不同分析者，不同儀器等情況下的精密度2 . 4 . 2 推薦中間精密度測(cè)定方法 應(yīng)確定隨機(jī)事件對(duì)分析方法精密度的影響，如不同日期，不同分析人員，不同儀器等等 沒(méi)有必要一一考察 用均勻設(shè)計(jì)，或正交設(shè)計(jì)方法2 . 5 一推薦重復(fù)性接受標(biāo)準(zhǔn) 系統(tǒng)重復(fù)性 S/N1000,RSD S/N100,RSD2% S/N10,RSD4% S/N10,RSD8% 方法重復(fù)性 測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差 儀器分析小于2% 容量分

15、析小于0.3%2 . 6 AOAC 濃度與精密度關(guān)系濃度（%）比率單位RSD（%）1001100%1.31010-110%2.7110-21%2.80.110-30.1%3.70.0110-4100ppm5.30.00110-510ppm7.30.000110-61ppm110.0000110-7100ppb150.00000110-810ppb210.000000110-91ppb302.7-重現(xiàn)性 概念 什么時(shí)候需要作重現(xiàn)性2 . 7 . 1 一概念 6 ：重現(xiàn)性ICH Q2定義： 重現(xiàn)性指不同試驗(yàn)室之間的精密度2.7.2-什么時(shí)候需要作重現(xiàn)性？ 是比較實(shí)驗(yàn)室間的差異 當(dāng)一個(gè)方法要升級(jí)到法

16、規(guī)方法時(shí)，需要做這個(gè)工作3 . 0 準(zhǔn)確度 概念 原料藥準(zhǔn)確度測(cè)定 制劑產(chǎn)品準(zhǔn)確度測(cè)定 雜質(zhì)準(zhǔn)確度測(cè)定 推薦準(zhǔn)確度測(cè)定方法 推薦準(zhǔn)確度測(cè)定接受標(biāo)準(zhǔn) AOAC 濃度與回收率關(guān)系3 . 1 概念 7 ：準(zhǔn)確度ICHQ2 定義 分析方法的準(zhǔn)確性指的是真實(shí)值或認(rèn)可的參考值與測(cè)量值之間相近程度3 . 2 原料藥準(zhǔn)確度測(cè)定 用該方法分析已知純度的分析物 該方法的分析結(jié)果與成熟的分析方法相比較，該成熟方法準(zhǔn)確度是已知的 在精密度，線性，專屬性建立后，進(jìn)行推論3 . 3 制劑準(zhǔn)確度測(cè)定 用該方法去測(cè)按處方量制成的混合物（加入已知量被測(cè)物） 在制劑中加入已知量主藥或與另一成熟方法比較 在精密度，線性和專屬性建立

17、后得出3 . 4 雜質(zhì)準(zhǔn)確度測(cè)定 在樣品（原料浩擠）中加入已知量的雜質(zhì) 無(wú)法得到雜質(zhì)降解物的，與采用其他方法測(cè)得的結(jié)果比較，可以使用原料的響應(yīng)值3 . 5 推薦準(zhǔn)確度測(cè)定方法 在六個(gè)空白樣品中，分別加入已知濃度的樣品（濃度范圍為含量測(cè)定濃度的 80120 % ) 計(jì)算該方法的百分回收率3.6推薦準(zhǔn)確度測(cè)定接受標(biāo)準(zhǔn) 測(cè)定得到的主品的百分回收率與理論回收率100%間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得大于方法重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的4倍3.7AOAC濃度與回收率關(guān)系濃度（%）比率單位平均回收率（%）1001100%98-1021010-110%98-102110-21%97-1030.110-30.1%95-1050.

18、0110-4100ppm90-1070.00110-510ppm80-1100.000110-61ppm80-1100.0000110-7100ppb80-1100.00000110-810ppb60-1150.000000110-91ppb40-1204 . 0 檢測(cè)限 概念 直觀法 信噪比法 標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率法 推薦檢測(cè)限測(cè)定方法4 . 1概念 8 ：檢測(cè)限ICH Q2 定義 檢測(cè)限度指的是樣品中的被分析物質(zhì)能夠被檢測(cè)到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量4 . 2 直觀法 直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法 檢測(cè)限的測(cè)定是通過(guò)對(duì)一系列已知濃度被分析物的樣品進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確（或

19、被可靠）地檢測(cè)被測(cè)物的最小量或最低濃度來(lái)建立4 . 3 信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較算出能被可靠地測(cè)出的最低濃度或量 一般以信噪比為3：1或2：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限4 . 4 標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率法 根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率 檢測(cè)限度（DL）=3 . 3 / s ：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（通過(guò)空白樣品測(cè)背景響應(yīng)值或Y軸截距） s ：校正曲線的斜率（通過(guò)被測(cè)物的校正曲線求得）4 . 5 推薦檢測(cè)限測(cè)定方法 在最靈敏的儀器狀態(tài)下 測(cè)定至少四個(gè)空白樣品 洗脫時(shí)間需要覆蓋整個(gè)樣品中所有組分的樣品溶液 每個(gè)樣品進(jìn)樣三次 計(jì)算該組分的

20、最小檢測(cè)限5.0定量限 概念 推薦定量限測(cè)定方法5 . 1 概念 9 ：定量限ICH Q2 定義： 某種分析方法的定量限度是指具有合適準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠定量測(cè)定分析組分的最低限量。它是樣品中含量低的化合物定量分析的參數(shù)，特別適用于雜質(zhì)和（或）降解產(chǎn)物的測(cè)定5 . 2 推薦定量限測(cè)定方法 按檢測(cè)限方法測(cè)定儀器的平均噪聲 然后按信噪比等于10.00.5配置樣品溶液 連續(xù)進(jìn)樣三次 計(jì)算組分的最小定量限6 . 0 耐用性 概念 變動(dòng)因素 色譜分析中耐用性項(xiàng)目6 . 1 概念概念10:耐用性耐用性ICHQ2 定義 分析方法的耐用性是指試驗(yàn)參數(shù)適當(dāng)?shù)匕l(fā)生細(xì)小改變時(shí)，測(cè)量能力保持不受影響，可用于說(shuō)

21、明正常使用時(shí)的可靠性6 . 2 變動(dòng)因素 流動(dòng)相的組成 pH值 不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱 柱溫 流速等6 . 2 變動(dòng)因素 典型氣相色譜法變動(dòng)因素 載氣 流速 不同廠牌或批號(hào)的色譜柱 固定相 擔(dān)體 柱溫 進(jìn)樣口 檢測(cè)器溫度6.3色譜分析中耐用性項(xiàng)目分析方法變量所有分析樣品制備操作提取時(shí)間HPLC濃度項(xiàng)組成不同的柱溫度濃度GC不同的柱溫度流量7 . 0 線性度 概念 線性范圍 推薦線性度測(cè)定方法 推薦線性度測(cè)定接受標(biāo)準(zhǔn)7 . 1 概念11 ：線性度ICHQ2 定義 分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測(cè)結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（含量）成比例關(guān)系的能力7 . 3 推薦線性度測(cè)定方法 在含量

22、測(cè)定濃度的70%-130%或50%-150%均勻選擇至少六個(gè)不同的濃度點(diǎn) 每一個(gè)嘗試至少需要測(cè)定四次 記錄各對(duì)應(yīng)濃度下的響應(yīng)值7 . 2 推薦線性度測(cè)定接受標(biāo)準(zhǔn) 相關(guān)系數(shù)應(yīng)當(dāng)在0 . 999與1 . 000 之間 經(jīng)線性回歸處理 其截距不應(yīng)明顯地偏離零點(diǎn)8 . 0 專屬性 概念 推薦專屬性測(cè)定方法 降解研究?jī)?nèi)容8.1概念13：專屬性ICH-Q2定義 專屬性是指在一些可能存在的組分，如雜質(zhì)，降解物，基質(zhì)等存在時(shí)，對(duì)被分析物準(zhǔn)確可靠測(cè)定的能力8.1推薦專屬性測(cè)定方法 按照規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)或參考文獻(xiàn)的色譜分析方法 分別將原料藥，中間體，可得到雜質(zhì)，原料，中間體，前體及降解產(chǎn)物的樣品分別進(jìn)樣 記錄各物質(zhì)的相

23、對(duì)保留時(shí)間 確保各樣品之間的峰可以分開(kāi) 至少確保其他物質(zhì)的峰與主峰分開(kāi)8 . 2 概念 14 ：穩(wěn)定性指示性分析方法FDA定義 穩(wěn)定性指示性分析方法是一種驗(yàn)證了的定量分析方法，其能夠測(cè)定原料藥或藥品在有關(guān)性質(zhì)的變化 一個(gè)穩(wěn)定性指示性分析能在沒(méi)有降解產(chǎn)物，工藝雜質(zhì)，輔助材料或其他的雜質(zhì)干擾下，準(zhǔn)確地對(duì)活性成分進(jìn)行測(cè)量8 . 3 降解研究目的 降解途徑 影響因素 確定包裝 分析方法專屬性8 . 4 降解研究?jī)?nèi)容 光 酸 堿 氧化 還原 高熱 高濕Validation of Analytical Procedure分析方法驗(yàn)證 第二部分：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作Validation of Analytical

24、 Procedure分析方法驗(yàn)證 第三部分：鹽酸氟西汀驗(yàn)證實(shí)例1 . 1 目的 掌握色譜方法驗(yàn)證所需要的項(xiàng)目 掌握色譜驗(yàn)證基本實(shí)驗(yàn)方法 了解穩(wěn)定性指示性方法驗(yàn)證的要求 了解析因分析在驗(yàn)證中應(yīng)用1 . 2 簡(jiǎn)介 美國(guó)某公司生產(chǎn)10mg和20mg鹽酸氟西汀兩種相膠囊 其重量與配方相同僅鹽酸氟西汀與輔料比例不同 所驗(yàn)證方法時(shí)公司內(nèi)部對(duì)美國(guó)和歐盟市場(chǎng)產(chǎn)品放行和穩(wěn)定性研究中使用的含量和雜質(zhì)分析的方法 該分析方法已經(jīng)建立1 . 3 驗(yàn)證項(xiàng)目清單 1 精密度 2 線性 3 范圍 4 準(zhǔn)確性 5 低濃度鹽酸氟西汀驗(yàn)證 6 m -鹽酸氟西汀驗(yàn)證 7 選擇性 8 耐用性2 . 0 精密度 項(xiàng)目： 系統(tǒng)重復(fù)性方法重

25、復(fù)性中間精密度2 . 1 系統(tǒng)重復(fù)性 方法 按照分析方法要求，配制鹽酸氟西汀標(biāo)準(zhǔn)溶液 重復(fù)進(jìn)樣 5 次 計(jì)算 峰面積平均值與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2 . 2 方法重復(fù)性 方法 按照分析方法要求，分別配制 20mg 鹽酸氟西汀樣品溶液 6 個(gè)分別進(jìn)樣 計(jì)算 含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2 . 3 中間精密度 方法 由另外一個(gè)分析員，在不同日期，另外的儀器上，按照分析方法 分別配制 20 mg 鹽酸氟西汀樣品溶液 6 個(gè) 計(jì)算 含量及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3 . 0 線性 方法 正常含量分析用標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的 50到 200% 范圍內(nèi) 均勻選擇 5個(gè)點(diǎn) 并配制相應(yīng)濃度的鹽酸氟西汀含量標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別進(jìn)樣 計(jì)算 線性回歸分析 相關(guān)系數(shù)

26、，斜率，Y軸截距4 . 0 范圍 方法 正常20mg樣品含量分析濃度50到200范圍內(nèi) 均勻選5個(gè)點(diǎn) 配制鹽酸氟西汀樣品溶液 分別進(jìn)樣 計(jì)算 線性回歸分析 相關(guān)系數(shù)，斜率，Y軸截距5 . 0 準(zhǔn)確性 項(xiàng)目 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確性 樣品準(zhǔn)確性5 . 1 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確性 方法 按照分析方法要求，配制鹽酸氟西汀標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣 5 次 計(jì)算 準(zhǔn)確性 測(cè)定濃度值用峰面積按照回歸方程進(jìn)行計(jì)算5 . 2 樣品準(zhǔn)確性 方法 按照產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)量，在70到180正常標(biāo)示量選均勻選擇 4 個(gè)點(diǎn)，混合輔料與及鹽酸氟西汀 每點(diǎn)3個(gè)樣品，分別進(jìn)樣 計(jì)算 回收率測(cè)定濃度值用峰面積按照回歸方程進(jìn)行計(jì)算6 . 0低濃度鹽酸氟西汀驗(yàn)證 項(xiàng)目：

27、 線性 準(zhǔn)確性 系統(tǒng)重復(fù)性 定量限度 檢測(cè)限度6 . 1 線性 方法 按照分析方法要求，均勻選擇 6個(gè)點(diǎn)配制標(biāo)示量的 0 . 02到 1 . 0 含量標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別進(jìn)樣 計(jì)算 線性回歸分析 相關(guān)系數(shù)，斜率，Y袖截距6 . 2 準(zhǔn)確性 方法 配制雜質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 進(jìn)樣6次 計(jì)算 按峰面積用回歸線性方程來(lái)計(jì)算測(cè)量濃度 平均值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差6 . 3 系統(tǒng)重復(fù)性 方法 配制工作濃度的 0 . 02和 0 . 05標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別進(jìn)樣6次 計(jì)算 峰面積的平均值與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差6 . 4 定量限度 用系統(tǒng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)偏和線性回歸 方程中的斜率差計(jì)算6 . 5 檢測(cè)限度 用系統(tǒng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)偏和線

28、性回歸 方程中的斜率差計(jì)算7 . 0 m -鹽酸氟西汀驗(yàn)證 項(xiàng)目： 線性 檢測(cè)限度 定量限度 準(zhǔn)確性 精密度方法重復(fù)性中間精密度 7 . 1 m-鹽酸氟西汀簡(jiǎn)介 M -鹽酸氟西汀是產(chǎn)品中的一個(gè)雜質(zhì) m -鹽酸氟西汀在0 . 05- 1 . 0區(qū)間呈線性 相對(duì)響應(yīng)因子（對(duì)鹽酸氟西汀） F = 132 . 73952/74859534 = 1 . 87 . 2定量限度 根據(jù) 鹽酸氟西汀定量限相對(duì)響應(yīng)值 計(jì)算鹽酸 m -氟西汀定量限度7 . 3 檢測(cè)限度 根據(jù) 鹽酸氟西汀檢測(cè)限度 相對(duì)響應(yīng)值 計(jì)算鹽酸 m -氟西汀檢測(cè)限度7 . 4回收 方法 分別6個(gè)標(biāo)空白中加0 . 05的 m -鹽酸氟西汀 進(jìn)樣

29、 計(jì)算 回收率實(shí)際檢測(cè)值用峰面積按照回歸線性方程計(jì)算7 . 5準(zhǔn)確性 方法 在已知 m -鹽酸氟西汀含量的樣品中分別在0 . 4 % , 0 . 5和 0 . 6 % 3 個(gè)水平加入 m -鹽酸氟西汀標(biāo)準(zhǔn)品 每組3個(gè)樣品中 計(jì)算 回收率 實(shí)際檢測(cè)值用峰面積按照回歸線性方程計(jì)算7 . 6 重復(fù)性 項(xiàng)目 方法重復(fù)性 中間精密度7. 61方法重復(fù)性 方法 按照要求配制溶液 反復(fù)進(jìn)樣6次 計(jì)算 平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差7 . 62 中間精密度 方法 另外一個(gè)分析員，在不同日期，另外的儀器上按照方法重復(fù)性方法 配制溶液6次 分別進(jìn)樣 計(jì)算 含量及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差8 . 0 選擇性1.降解 2.系統(tǒng)適用

30、性 1）原樣 3.空白 2）酸降解 4）氧化降解 5）日光降解 6）溶液加熱降解 7）粉末加熱降解8 . 1 簡(jiǎn)介 降解產(chǎn)物的選擇性試驗(yàn)是分析方法穩(wěn)定性指示性驗(yàn)證的一個(gè)重要部分 主要目的是通過(guò)試驗(yàn)證明各種降解的產(chǎn)物與所要分析的物質(zhì)庫(kù)完全分開(kāi) 本試驗(yàn)中的主要設(shè)備是二極管矩陣檢測(cè)器并通過(guò)計(jì)算：純度角，匹配角，純度閾值匹配閾值，含量來(lái)證明峰的純度8.2原樣品 方法 20mg膠囊按照規(guī)定的方法進(jìn)行分析 標(biāo)準(zhǔn)品按照規(guī)定的方法進(jìn)樣分析8 . 3 酸降解 方法： 樣品：稱量大約等量20mg的樣品，轉(zhuǎn)移到 50ml 容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml的濃鹽酸。放置18小時(shí)。用 10

31、N 氫氧化鈉中和到 pH 5 . 5。稀釋到刻度。過(guò)濾。 標(biāo)準(zhǔn)品：稱量大約22mg 的標(biāo)準(zhǔn)品，轉(zhuǎn)移到 50ml 容量瓶中，加入 20ml稀釋劑，加2ml 的鹽酸。放置18小時(shí)。用10N氫氧化鈉中和到 pH5 . 5。稀釋到刻度。8 . 4堿降解 方法： 樣品：稱量大約等量20mg的樣品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml 的5N氫氧化鈉。放置18小時(shí)。用5N鹽酸中和到 pH 5 . 5。稀釋到刻度。過(guò)濾。 標(biāo)準(zhǔn)品：稱量大約22mg的標(biāo)準(zhǔn)品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，加2 ml的5N氫氧化鈉。放置18小時(shí)。用5N鹽酸中和到 p H5 . 5。稀釋到刻度。8 . 5氧化降解 樣品：稱量大