人不對(duì)稱二甲基精氨酸ADMAELISAKit

1、人不對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)ELISAKit人不對(duì)稱二甲基精氨酸（ADMA）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒使用說明書產(chǎn)品編號(hào)：E1301hUSCNLIFE TM www.usc nlife.c n本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷！預(yù)期應(yīng)用ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿或其它相關(guān) 生物液體中ADMA含量。實(shí)驗(yàn)原理用純化的ADMA抗體包被微孔板，制成固相 載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、 生物素 化的ADM航體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底 洗滌后用底物 仃MB）顯色。TMB在過氧化物酶的 催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的ADMA呈正相關(guān)。 用酶標(biāo)

2、儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（O.D.值）， 計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1、A 2、3、4、5、6、酶標(biāo)板：一塊（96孔）標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，請(qǐng)臨用前15分 鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml , 蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛 倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為20 nmol/ml ， 然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中 進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成20 nmol/ml ，10 nmol/ml，5 nmol/ml，2.5 nmol/ml，1.25 nmol/ml， 0.625 nmol/ml， 0.312 nmol/ml， 樣品稀釋液直接作為空白孔 0 nmol/ml

3、。如 配制10 nmol/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要 少于0.3ml ）20 nmol/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加 入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管 中，混勻即可，其余濃度以此類推 樣品稀釋液：1 X 20ml。 檢測(cè)稀釋液A： 1X 10ml。 檢測(cè)稀釋液B： 1X 10ml。檢測(cè)溶液 A: 1X 120叩瓶（1:100 ）。臨用 前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋（如：10川檢 測(cè)溶液A / 993檢測(cè)稀釋液A），充分混勻， 稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的 總量配制（1001/孔），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。7、89、檢測(cè)溶液B: 1 X 120 M瓶（1:1

4、00 ）。臨用 前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同 檢測(cè)溶液A。底物溶液：1X 10ml/瓶。濃洗滌液：1X 30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾 水稀釋25倍。10、 終止液：1X 10ml/ 瓶（2 mol/L H 2SQ）。11、覆膜：5張12、使用說明書：1份1、自備物品酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱）3、2、微量加液器及吸頭，EP管蒸餾水或去離子水，濾紙 標(biāo)本的采集及保存1、血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4過 夜后于1OO0<g離心20分鐘，取上清即可檢 測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20弋或-80七保存，但應(yīng)避 免反復(fù)凍融。2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本 采集后30

5、分鐘內(nèi)于lOOOxg離心15分鐘， 取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?2Os或-80七 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3、其它生物標(biāo)本：請(qǐng)lOOOcg離心20分鐘，取 上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20七或-80fc保 存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。A注：以標(biāo)本均應(yīng)密封保存，4七保存應(yīng)小于1周，-20咒 不應(yīng)超過1個(gè)月，-8Oc不應(yīng)超過2個(gè)月；標(biāo) 本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本 不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。操作步驟實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑 不能直接在37弋溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需 充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè) 樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀 釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒

6、的檢測(cè)范圍， 計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。1、空白孔加樣品稀釋液100叫余孔分別加標(biāo) 準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100.,注意不要有氣泡，加 樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及 孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜， 37乜溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效 性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2、3、4、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶 液A工作液100皿（臨用前配制），酶標(biāo)板加 上覆膜，37c溫育1小時(shí)。棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸 泡1-2分鐘，大約4001/每孔，甩干（也可 輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。每孔加檢測(cè)溶液 B工作液（臨用前配制）100閔，

7、加上覆膜，37c溫育1小時(shí)。5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步 驟3。6、每孔加底物溶液901，酶標(biāo)板加上覆膜37；避 光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo) 準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔梯度不明顯時(shí)，即可終止）。每孔加終止溶液501，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色 立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物7、液的加入順序相同。8立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密 度（OD值）。A注：1、試劑準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫， 使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。實(shí) 驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污 染。2、加樣：加樣或加試劑時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)

8、間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。 一次加 樣時(shí)間（包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品）最好控制在 10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3、溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)將加上蓋或 覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸 發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯 都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；同時(shí)應(yīng) 嚴(yán)格遵 守給定的溫育時(shí)間和溫度。4、洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孑 吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指 印,避免影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。5、6、7、制，液，時(shí)，稀試劑配制：Detection A 及 Detection B

9、在 使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管 壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè) 溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所 需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配 不能混淆。請(qǐng)精確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作 盡量不要微量配制（如吸取檢測(cè)溶液 A 一次不要小于10-），以避免由于不準(zhǔn)確 釋而造成濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶 液B工作液。反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反 應(yīng)孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如 顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避 免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。洗板方法手工洗板方法：將推薦

10、的洗滌緩沖液至少 0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，吸去（不 可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍 幾次；根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。2、中。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使 用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程 特異性本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人 ADM， 且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本QD.值扣除空白孔O.D.值后作 圖（七點(diǎn)圖），如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì) 算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），o.M直 為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo) 準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析， 如curve expert 1.3，根據(jù)樣

11、品o.d.值，由標(biāo)準(zhǔn)OB.曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn) 物的濃度與O.D值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程 式，將樣品的O.D.值代入方程式，計(jì)算出樣品濃 度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。檢測(cè)范圍：0.312 nmol/ml - 20 nmol/ml ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線請(qǐng)取用以下濃度值:20 n mol/ml109、n mol/ml5 nmol/ml2.5 n mol/ml1.25nmol/ml，0.625 nmol/ml0.312 n mol/ml最低檢測(cè)限：0.078 nmol/ml說明1、析,由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分 本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng)務(wù) 準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。只有全部使用 USCNLIFETM試劑才能保證檢測(cè)效果，因?yàn)樗性噭┒际怯嘘P(guān)聯(lián)的，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守USCNLIFh試劑的實(shí)驗(yàn)說明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。在儲(chǔ)存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的 污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致岀現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。試劑盒保存：請(qǐng)收到試劑盒后盡快