2020新冠病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作流程

1、2021新冠病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作流程在當(dāng)前新型冠狀病毒肺炎疫情期間,需要開展核酸檢測的醫(yī)療機(jī) 構(gòu),在有限的硬件條件下,如何科學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)、有效地做好生物平安防 護(hù)及開展核酸檢測工作.各實(shí)驗(yàn)室可結(jié)合白身?xiàng)l件和流程,制定適宜 的生物平安防護(hù)和核酸檢測方案.核酸檢測流程一核酸檢測前的生物平安防護(hù)工作人員個(gè)人三級防護(hù)的穿戴穿戴流程：在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的清潔區(qū)更衣區(qū)或者普通實(shí)驗(yàn)室的潔凈區(qū), 工作人員按順序依次穿戴好一次性帽子、醫(yī)用N95 口罩、一次性防護(hù)服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防護(hù)目鏡和雙層乳膠手套,進(jìn)入 樣本處理工作區(qū)域或?qū)嶒?yàn)室.【要點(diǎn)提示】具備標(biāo)準(zhǔn)基因擴(kuò)增布局條件的實(shí)驗(yàn)室, 應(yīng)在清潔更衣區(qū)做好個(gè)人

2、 三級防護(hù),條件有限的實(shí)驗(yàn)室亦可選擇在一潔凈的實(shí)驗(yàn)室中按流程穿 戴好個(gè)人三級防護(hù).需佩戴醫(yī)用N95 口罩,假設(shè)無醫(yī)用N95 口罩,可以考慮用普通 N95/KN95口罩外加一次性外科口罩的組合方式,但不要佩戴有呼吸 閥的N95口罩.佩戴N95 口罩時(shí)需檢查密閉性,通過雙手按壓、深呼吸、左右轉(zhuǎn) 頭等動作嚴(yán)格檢查口罩是否佩戴正確.一次性防護(hù)服已具備新型冠狀病毒核酸檢測的防護(hù)需求,有條件 時(shí)可以考慮加穿一次性反穿隔離衣,穿衣時(shí)需由他人協(xié)助.穿戴整潔的工作人員,應(yīng)按要求盡快進(jìn)入樣本處理的實(shí)驗(yàn)區(qū)域開 展工作,嚴(yán)禁穿戴三級防護(hù)后再進(jìn)入普通實(shí)驗(yàn)區(qū)域或辦公區(qū)域.二樣本的滅活處理操作流程：兩名完成三級防護(hù)的工作人

3、員,進(jìn)入樣本處理區(qū)或樣本處理專用 實(shí)驗(yàn)室,將接收到的樣本二級包裝在平安柜內(nèi)翻開, 檢查樣本主容器 是否為嚴(yán)格密閉；對密封袋外表進(jìn)行消毒后,對送檢樣本進(jìn)行56 C下30分鐘的滅活,滅活后的樣本管需在生物平安柜內(nèi)翻開最內(nèi)層的 容器,將拭子保存液混勻后進(jìn)行分裝和用于核酸提取.【要點(diǎn)提示】涉及高致病性病原微生物的實(shí)驗(yàn)室活動,需由兩名工作人員完 成,其中一人負(fù)責(zé)主要實(shí)驗(yàn)操作,一人提供必要的協(xié)助.主操作者應(yīng) 預(yù)防反復(fù)屢次進(jìn)出平安柜.滅活形式：可以采用水浴或空氣加熱形式完成滅活, 采用空氣加 熱時(shí)可適當(dāng)延長滅活時(shí)間.有條件時(shí)可以采用小型化設(shè)備在平安柜內(nèi) 操作,減少樣本進(jìn)出平安柜的次數(shù).滅活前的樣本嚴(yán)禁在生物

4、平安柜 外翻開和操作.應(yīng)特別檢查采樣管是否擰緊、有無樣本溢漏等情況.樣本管每次進(jìn)出平安柜均需對外外表進(jìn)行消毒.應(yīng)就近配備適量的消毒處理物品,以預(yù)防實(shí)驗(yàn)操作過程中可能發(fā) 生的意外溢灑事故,有條件時(shí)建議在平安柜內(nèi)配備一次性吸水臺布.三樣本的核酸提取1、手工核酸提取操作流程以凱杰的 52906柱提法核酸提取試 劑盒為例1裂解液配制：在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的試劑配制區(qū)或單獨(dú)的普通試劑配制實(shí)驗(yàn)室中,準(zhǔn)備核酸提取所需的洗液1 AW1、洗液2AW2和carrier RNA.根據(jù)要求,分別向洗液1和洗液2中參加 分子生物學(xué)級別的130ml和160ml的無水乙醇并及時(shí)做好標(biāo)記；取 310 M洗脫液AV日溶解310 V g/支的Carrier RNA.配置好后, 通過傳遞窗進(jìn)入核酸提取區(qū)或由工作人員送入核酸提取專用實(shí)驗(yàn)室.2樣本裂解：取560 V l AVL裂解液到1.5ml無菌EP管中, 參加5.6訴l配制好的Carrier RNA,再參加已經(jīng)滅活的140 l樣本例如咽拭子、血漿等,混勻振蕩15秒,室溫靜置10分鐘,充分 裂解樣本中的核酸.將EP管瞬時(shí)離心后參加560 V l無水乙醇,充分 混勻15秒,再次瞬時(shí)離心后備用.吸取630 V l裂解產(chǎn)物,小心參加 至離心柱中,8000rpm 或6000g離心1分鐘,轉(zhuǎn)移離心柱至新收 集管,將