喹噁啉類藥物殘留分析技術(shù)——凈化方法（一）

1、喹噁啉類藥物殘留分析技術(shù)凈化方法（一） (2)凈化辦法 喹噁啉類藥物殘留分析主要采納的凈化辦法有液液分配(llp) 和固相萃取(spe) 辦法。llp 所需時光較長，而喹噁啉類藥物不穩(wěn)定，凈化過程不易太長，所以目前最常用的辦法是spe技術(shù)。 1)液液分配(liquid liquid partition，llp) 本類藥物原形及其脫氧代謝物，挺直用有機溶劑提取后，利用藥物極性，采納溶劑對llp凈化。huang等測定雞血液、肌肉、肝臟、腎臟和脂肪中cyx及其代謝物bdcyx，提取液蒸干后，用-llp脫脂，乙腈層再凈化后用hplc測定。cyx和bdcyx的loq為0.025g/g(血漿和組織)，辦法

2、回收率在73%87%之間，日間rsd小于9.86%。zhang等提取羊組織中cyx及其代謝物bdcyx。肌肉、肝臟、腎臟用提取，脂肪組織用乙腈提取，提取上清液蒸干，用乙腈-正已烷llp凈化，取乙腈層蒸干用甲醇復(fù)溶后hplc測定，cyx回收率為65%79%，日間cv為6.7%11.1%；bdcyx回收率為70%92%，日間cv為4.7%15.9%；lod為15g/kg，loq為25g/kg。qca和mqca與組織結(jié)合，需要解離后提取，而解離辦法打算了后續(xù)的凈化步驟；另外，qca和mqca呈酸性，在酸性溶液中以分子狀態(tài)存在，在堿性溶液中以離子態(tài)存在，這成為開發(fā)llp辦法的基礎(chǔ)。 堿性水解后的凈化過

3、程往往涉及多次llp， 較為復(fù)雜。hutchinson等分析豬肝中的qca，堿性水解液用濃鹽酸中和后，用乙酸乙酯提取，提取液用0.1mol/l(ph8.0)llp反萃取，經(jīng)scx spe柱凈化后，吹去-甲醇洗脫液中的甲醇，用鹽酸中和，再與乙酸乙酯llp凈化，乙酸乙酯層吹干復(fù)溶后，用lc-ms/ms測定。辦法回收率為89%111%，cv為0.15%10%，cca 和cc分離為0.16 g/kg和0.27 g/kg。huang等測定雞組織中cyx的代謝物qca殘留，樣品經(jīng)堿性水解，水解液用濃鹽酸調(diào)整ph 1后，用乙酸乙酯提取，提取液再與0.5 mol/l緩沖液(ph8) llp反萃取，進一步用離子

4、排阻色譜柱凈化，甲醇-水洗脫液用鹽酸酸化后，再與氯仿llp，蒸干氯仿層，用流淌相溶解后，hplc分析。雞組織中qca的loq為0.025 mg/kg(內(nèi)臟組織)和0.02 mg/kg(肌肉)，回收率為70%78%，cv為7.69%11.43%。用同樣的辦法，huang等提取和凈化豬和雞組織中qct的代謝物mqca，樣品的堿性水解液用濃鹽酸調(diào)整ph 1后，用乙酸乙酯提取，提取液再與水llp，棄去水相，乙酸乙酯層再用0.5 mol/l檸檬酸緩沖液(ph8)反萃取，反萃取液經(jīng)離子排阻色譜凈化后hplc測定，loq為0.05 mg/kg，lod為0.025 mg/kg，回收率為74%84%，cv為4.

5、5%10.8%。 酸性水解提取液在多數(shù)狀況下挺直經(jīng)llp轉(zhuǎn)移至有機溶劑中，再進一步處理。della等采納偏磷酸-甲醇-水(2+20+78，v/v)水解豬肝臟中qca，水解液用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯提取液再用0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7)llp反萃取，水相再經(jīng)spe凈化后，gc-ms測定。辦法回收率為90%102%，cv為1.7%8.4%，cca和cc分離為32g/kg和34g/kg，lod為0.2g/kg，loq為0.7g/kg。 wu等采納5%偏磷酸-10%甲醇溶液水解提取豬肝臟中的qca和mqca，水解液用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯用0.01mol/l緩沖液(用磷酸調(diào)整ph7.0)ll

6、p反萃取，磷酸鹽緩沖液再用正己烷llp脫脂，脫脂后磷酸鹽緩沖液經(jīng)spe凈化后測定。回收率為70%110%，cv小于20%。試驗發(fā)覺，磷酸二氫鉀緩沖液濃度從0.011.0mol/l(用磷酸調(diào)整ph7.0)均能達到愜意回收率，但是0.01mol/l濃度萃取后雜質(zhì)含量最少。sniegocki等測定豬肉中cbx代謝物(脫氧卡巴氧、qca)和olq代謝物(mqca)。樣品用含偏磷酸的甲醇水解后，再用乙酸乙酯-二氯甲烷(50+50，v/v)llp凈化提取，蒸干提取物后用含0.5%異丙醇的1%乙酸溶解，lc-msms測定。cca為1.042.11ug/kg，cc為1.462.89g/kg，回收率在99.8%

7、101.2%之間。 酶解普通在弱堿性條件下舉行，酶解液往往加入酸性溶液提取并脫蛋白，酸性提取液經(jīng)llp轉(zhuǎn)入有機溶劑中，然后再進一步處理。hutchinson等測定豬肝中mqca和qca殘留，蛋白酶解液放置室溫后加入1ml濃鹽酸酸化提取，提取液與乙酸乙酯llp，乙酸乙酯萃取液再用0.1mol/l磷酸鈉緩沖液(ph8.0)llp反萃取，進一步spe凈化后，lc-ms/ms測定qca的cc。和cc分離為0.4g/kg和1.2ug/kg，mqca分離為0.7g/kg和3.6g/kg。劉正才等(4用蛋白酶酶解魚、蝦、豬肉、雞肉、牛肉、豬肝中olq代謝殘留標(biāo)識物mqca。酶解液冷至常溫后，加入0.3mol/lhci溶液