血型血清學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)對新生兒溶血病的產(chǎn)前診斷價(jià)值

1、血型血清學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)對新生兒溶血病的產(chǎn)前診斷價(jià)值【關(guān)鍵詞】 新生兒溶血病 新生兒溶血病（heamolytic disease of the fetus and the newborn, HDN）是發(fā)生在胎兒和早期新生兒的一種自限性免疫溶血性疾病，該病由母嬰血型不合引起，常導(dǎo)致胎兒早期流產(chǎn)或新生兒出現(xiàn)貧血、水腫、肝脾腫大甚至造成新生兒死亡等嚴(yán)重后果。由于我國RhD（-）人群僅占0.24%，大大低于白種人的15%，因而在我國Rh血型不合引起的HDN較ABO為少見，而Rh血型D抗原卻又是引起中度和重度HDN的最常見原因1。目前，血型血清學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)是臨床進(jìn)行新生兒產(chǎn)前診斷最簡便常見、實(shí)用

2、有效的方法，正確運(yùn)用血清學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)，可以為HDN預(yù)防及診斷提供有價(jià)值的依據(jù)，從而指導(dǎo)臨床采取相應(yīng)措施，防止HDN的發(fā)生。 1 血型血清學(xué)方法 為預(yù)防及避免HDN的發(fā)生，妊娠婦女除行常規(guī)的產(chǎn)前檢查外，還應(yīng)包括妊娠史、流產(chǎn)史、HDN史及夫妻雙方的ABO和Rh血型的鑒定、不規(guī)則抗體篩選。如RhD為陰性時(shí)，應(yīng)做弱D檢測，以避免漏檢。一般應(yīng)在孕16周、28周、36周時(shí)各進(jìn)行1次抗體篩選，當(dāng)檢測到有臨床意義的同種抗體時(shí)，應(yīng)測定IAT（indirect antibody test）滴度，以評估抗體水平并動(dòng)態(tài)監(jiān)控其變化。盡管有研究表明，HDN的發(fā)病率隨母體內(nèi)抗-A/B或抗-RhD水平的升高而遞增，但仍

3、有一些高抗體水平的個(gè)體并沒有發(fā)生HDN而一些低抗體水平的個(gè)體發(fā)生了中至重度的HDN2，3。對那些有過流產(chǎn)史、HDN史的孕婦，應(yīng)該密切注意其體內(nèi)的血清抗體水平。 如免疫性ABO抗體效價(jià)64，且無流產(chǎn)史及HDN史時(shí)，可每4周檢查一次抗體濃度；如ABO抗體效價(jià)256，為可疑HDN；ABO抗體效價(jià)512者，為高度可疑；如既往有HDN史且本次ABO抗體效價(jià)512時(shí)，建議換血治療。 如Rh抗體效價(jià)8時(shí)，為可疑HDN，建議復(fù)查，16時(shí)可行羊膜穿刺術(shù)進(jìn)一步檢測其羊水膽紅素含量，因?yàn)榇藭r(shí)胎兒可能已經(jīng)發(fā)生中度貧血4，5，必要時(shí)換血。 血清學(xué)方法可用于孕婦在懷孕早期的弱抗體檢測，具有較好的靈敏度，但其局限性在于實(shí)驗(yàn)

4、須在標(biāo)準(zhǔn)化條件下進(jìn)行，且檢測出來的抗體滴度與HDN疾病嚴(yán)重程度之間的相關(guān)關(guān)系仍然欠缺。 2 分子生物學(xué)方法 運(yùn)用PCR-序列特異性引物（sequence specific primer,SSP）、PCR-限制片段長度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphisms, RFLP）等分子生物學(xué)技術(shù)可從懷孕16周的孕婦羊水細(xì)胞中檢測出胎兒的血型基因，此技術(shù)已常規(guī)運(yùn)用于臨床檢測胎兒RhD、RhCE、KEL、Fy等基因6，7。對于有HDN史或流產(chǎn)史的婦女，且其丈夫基因?yàn)殡s合型者，該技術(shù)可以更早、更準(zhǔn)確地預(yù)測胎兒的血型基因型，可選擇性地終止RhD陽性胎兒的妊娠，避

5、免對RhD陰性胎兒的一些侵入性損害檢查。在ABO溶血病的預(yù)測中，如母為O型，父為AO/BO型的夫婦，檢測其胎兒ABO血型基因型，如胎兒為O型，則完全可以排除HDN發(fā)生的可能，避免其他不必要的檢測；如胎兒為AO/BO基因型，則提示有發(fā)生HDN的可能，從而指導(dǎo)臨床在必要時(shí)進(jìn)行其他檢測。 3 綜合診斷及評價(jià) 評估HDN的發(fā)生，如結(jié)合妊娠史及HDN史、孕婦同種抗體動(dòng)態(tài)水平、胎兒血型基因型預(yù)測、抗體功能活性測定等進(jìn)行綜合判斷，可將HDN預(yù)測準(zhǔn)確性提高到95%8。綜合診斷及評價(jià)方法為（1）流產(chǎn)史、HDN史；（2）母血型為O/RhD（-），父為A或B或AB/RhD（+）；（3）孕婦妊娠期抗-A/B或抗-D水

6、平的變化：ABO抗體效價(jià)64時(shí)，建議復(fù)查；256時(shí)，可疑HDN；512時(shí)，高度懷疑HDN；既往HDN史且本次512時(shí)，建議換血。RhD抗體效價(jià)8時(shí)，會有中度HDN風(fēng)險(xiǎn)；16時(shí)，很危險(xiǎn)，可考慮換血；高危病例可采集羊水用PCR方法進(jìn)行早期基因定型。 參考文獻(xiàn) 1 李勇，楊貴貞.人類紅細(xì)胞血型學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù).北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,1999,173-181. 2 Voak D, Mitchell R, Scott M, et al. Guidelines for blood grouping and red cell antibody testing during pregnancy. Tran

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8、asis of Transfusion Medicine. Implication for Clinical Practice. Philadelphia:Saunders,2000,102. 6 Bowman J. The management of heamolytic disease of the fetus and newborn. Semin Perinatol,1997,21（1）:39. 7 hessner MJ, McFarland JC, Eindeen DJ. Genotyping of KEL1and KEL2 of the human Kell blood group system by PCR-SSP.Transfusion,1996,36（6）:495. 8 Cotreras M, Garner SF. Prenat