白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類實(shí)用教案

1、實(shí)驗(yàn)(shyn)一、 白細(xì)胞計(jì)數(shù) 1.原理：血液經(jīng)稀乙酸(y sun)定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。2.試劑器材 白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸(y sun) 2.0ml 10g/L亞甲藍(lán) 3滴 加蒸餾水 至100ml第1頁(yè)/共26頁(yè)第一頁(yè)，共27頁(yè)。器材器材 改良改良(giling)牛鮑牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及專用蓋片、微量專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、刻度移液管、小試管、潔凈軟小試管、潔凈軟紗布、干棉球、紗布、干棉球、光學(xué)顯微鏡。光學(xué)顯微鏡。第2頁(yè)/共26頁(yè)第二頁(yè)，共27頁(yè)。第3頁(yè)/共26頁(yè)第

2、三頁(yè)，共27頁(yè)。第4頁(yè)/共26頁(yè)第四頁(yè)，共27頁(yè)。毛細(xì)血管(mo x xu un)采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序 操作步驟：1 采血部位成人以左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下(yxi)嬰幼兒通常自拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。2 輕輕按摩采血部位。3 用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。第5頁(yè)/共26頁(yè)第五頁(yè)，共27頁(yè)。4 緊捏刺血部位，使其自然充血。5 用無(wú)菌刺針穿刺取血，動(dòng)作應(yīng)迅速，深度 23mm，稍加擠壓(j y)以血液流出為宜。6 用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。8 采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。第6頁(yè)/共26頁(yè)第六頁(yè)，共27頁(yè)。 微量吸管的使用(shyng) 1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管

3、上，連接緊密不漏氣； 2拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空氣； 3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指； 4用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準(zhǔn)確），輕觸吸管下口吸去多余(duy)血量，使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度； 5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻； 6拔出微量吸管棄入污物桶。第7頁(yè)/共26頁(yè)第七頁(yè)，共27頁(yè)。 3.操作步驟（1）加稀釋液 用移液管向小試管內(nèi)加入白細(xì)胞稀釋液。（2）采血、稀釋用微量

4、吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試 管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計(jì)數(shù)板及蓋片（動(dòng)作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。（4）充計(jì)數(shù)池將小試管輕微振蕩(zhndng)2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細(xì)胞懸液，充入計(jì)數(shù)池內(nèi)。靜置2-3min，使細(xì)胞沉于計(jì)數(shù)池底面。（5）調(diào)試顯微鏡 將計(jì)數(shù)板放置載物臺(tái)上，選擇（4 ）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10），調(diào)節(jié)光亮 。（6）計(jì)數(shù) 低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。第8頁(yè)/共26頁(yè)第八頁(yè)，共27頁(yè)。結(jié)果計(jì)算白細(xì)

5、胞總數(shù)(zngsh) =4大格白細(xì)胞數(shù)（N） /410 20 106 = N 20 109/L用. 109/L（小數(shù)點(diǎn)后一位）表示第9頁(yè)/共26頁(yè)第九頁(yè)，共27頁(yè)。5細(xì)胞(xbo)計(jì)數(shù)原則 大方格(fn )四邊壓線細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下， 弓形移動(dòng)第10頁(yè)/共26頁(yè)第十頁(yè)，共27頁(yè)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容(nirng) 原理 試劑器材 操作步驟 實(shí)驗(yàn)結(jié)果( ji gu) 討論第11頁(yè)/共26頁(yè)第十一頁(yè)，共27頁(yè)。診斷學(xué) 實(shí)驗(yàn)(shyn)二 白細(xì)胞分類(fn li)第12頁(yè)/共26頁(yè)第十二頁(yè)，共27頁(yè)。 1.1.分類原理分類原理(yunl)(yunl)：白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)是將血液制備成涂片，：白細(xì)胞分類計(jì)

6、數(shù)是將血液制備成涂片，瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細(xì)胞的形態(tài)特征進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。通瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細(xì)胞的形態(tài)特征進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。通常分類常分類100100個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算得出各種白細(xì)胞所占百分比個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算得出各種白細(xì)胞所占百分比第13頁(yè)/共26頁(yè)第十三頁(yè)，共27頁(yè)。 2.瑞氏染色原理：瑞氏染料瑞氏染色原理：瑞氏染料(rnlio)溶于溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和）和帶負(fù)電的酸性伊紅（帶負(fù)電的酸性伊紅（E-）離子。細(xì)胞的染色）離子。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。各 種 細(xì) 胞 成 分 的 化

7、學(xué) 性 質(zhì) 不 同 ， 對(duì) 染 料各 種 細(xì) 胞 成 分 的 化 學(xué) 性 質(zhì) 不 同 ， 對(duì) 染 料(rnlio)的親和力也不一樣，故可呈不同的的親和力也不一樣，故可呈不同的著色特點(diǎn)。著色特點(diǎn)。第14頁(yè)/共26頁(yè)第十四頁(yè)，共27頁(yè)。 3.器材器材光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡推片，載玻片推片，載玻片試劑試劑Wright染液染液 甲醇甲醇 600ml磷酸鹽緩沖液（）磷酸鹽緩沖液（）香柏油香柏油標(biāo)本標(biāo)本(biobn)來(lái)源來(lái)源EDTA-K2抗凝全血抗凝全血 第15頁(yè)/共26頁(yè)第十五頁(yè)，共27頁(yè)。第16頁(yè)/共26頁(yè)第十六頁(yè)，共27頁(yè)。3 3白細(xì)胞分類：白細(xì)胞分類： 細(xì)胞分布細(xì)胞分布(fnb)(fnb)均勻的體尾

8、交界處，均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，滴加香柏油一滴，油鏡下分類計(jì)數(shù)。油鏡下分類計(jì)數(shù)。分類時(shí)要有秩序的分類時(shí)要有秩序的連續(xù)進(jìn)行，避免主連續(xù)進(jìn)行，避免主觀選擇視野。通常觀選擇視野。通常分類計(jì)數(shù)分類計(jì)數(shù)100100個(gè)白細(xì)個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算并報(bào)告各胞，計(jì)算并報(bào)告各種白細(xì)胞所占比例。種白細(xì)胞所占比例。 第17頁(yè)/共26頁(yè)第十七頁(yè)，共27頁(yè)。q中性粒細(xì)胞（中性粒細(xì)胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圓形，胞漿染粉紅）：在瑞氏染色血涂片上呈圓形，胞漿染粉紅色，核形一葉色，核形一葉(y y)（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見(jiàn)，（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見(jiàn)，染成深紫紅色，胞漿中有許多細(xì)小均勻紫紅色顆粒。染成

9、深紫紅色，胞漿中有許多細(xì)小均勻紫紅色顆粒。各類成熟各類成熟(chngsh)白細(xì)胞的形態(tài)學(xué)：白細(xì)胞的形態(tài)學(xué)： 第18頁(yè)/共26頁(yè)第十八頁(yè)，共27頁(yè)。q嗜酸性粒細(xì)胞（嗜酸性粒細(xì)胞（Eo）：較中性粒細(xì)胞稍大，胞核多為）：較中性粒細(xì)胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡兩葉，呈眼鏡(ynjng)、八字形，核染色質(zhì)粗糙染深、八字形，核染色質(zhì)粗糙染深紫紅色，胞漿內(nèi)充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色紫紅色，胞漿內(nèi)充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈桔紅色，有折光性。時(shí)呈桔紅色，有折光性。 第19頁(yè)/共26頁(yè)第十九頁(yè)，共27頁(yè)。q嗜堿性粒細(xì)胞（嗜堿性粒細(xì)胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，）：胞漿中含有大小不

10、等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈蘭黑色。于光學(xué)顯微鏡下常見(jiàn)胞漿中有小空泡，瑞氏染色時(shí)呈蘭黑色。于光學(xué)顯微鏡下常見(jiàn)胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動(dòng)乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動(dòng)(hu dng)而脫顆粒而脫顆粒所致；核呈淡紫紅色?？床磺?，呈桿狀或分葉狀。所致；核呈淡紫紅色?？床磺澹蕳U狀或分葉狀。 第20頁(yè)/共26頁(yè)第二十頁(yè)，共27頁(yè)。q淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（Ly）：胞體呈圓形，在成人）：胞體呈圓形，在成人(chng rn)血涂血涂片中以小淋巴細(xì)胞為多見(jiàn)，核大呈深紫色致密而濃染，片中以小淋巴細(xì)胞為多見(jiàn)，核大呈深紫色致密而濃染，胞漿量極少；大淋巴細(xì)胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍(lán)色，胞漿量

11、極少；大淋巴細(xì)胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍(lán)色，可見(jiàn)少量嗜苯胺藍(lán)顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細(xì)胞一可見(jiàn)少量嗜苯胺藍(lán)顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細(xì)胞一側(cè)，染色較深。側(cè)，染色較深。 第21頁(yè)/共26頁(yè)第二十一頁(yè)，共27頁(yè)。 單核細(xì)胞（單核細(xì)胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上為）：在瑞氏染色涂片上為1220m，胞體，胞體圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形多種多樣，最重要圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形多種多樣，最重要(zhngyo)的特點(diǎn)是染色質(zhì)較細(xì)致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷的特點(diǎn)是染色質(zhì)較細(xì)致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細(xì)小塵土樣顆粒。狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細(xì)小塵土樣顆粒。第22頁(yè)/共26頁(yè)第二十二頁(yè)，共27頁(yè)。正常成人正常成人(chng rn)外周血白細(xì)胞分類參考值：外周血白細(xì)胞分類參考值：Ne 50%70%Ly 20%40%Mo 3%8%Eo 0.5%5%Ba 0%1%第23頁(yè)/共26頁(yè)第二十三頁(yè)，共27頁(yè)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告 原理 方法 各類細(xì)胞百分比報(bào)告(bogo) 討論第24頁(yè)/共26頁(yè)第二十四頁(yè)，共27頁(yè)。第25頁(yè)/共26頁(yè)第二十五頁(yè)，共27頁(yè)。感謝您的觀看(gunkn)！第26頁(yè)/共26頁(yè)第二十六頁(yè)，共27頁(yè)。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)實(shí)驗(yàn)一、 白細(xì)胞計(jì)數(shù)。改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、帶