抗腫瘤藥物評(píng)價(jià)技術(shù)

1、抗腫瘤藥物評(píng)價(jià)技術(shù)抗腫瘤藥物評(píng)價(jià)技術(shù)南京凱基生物科技發(fā)展公司聯(lián)系電話025-52880812抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中藥、天然藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中藥、天然藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則指導(dǎo)原則指導(dǎo)原則 體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中至體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中至 少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。

2、 試驗(yàn)結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效試驗(yàn)結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效 體外實(shí)驗(yàn)選用體外實(shí)驗(yàn)選用10-15株人癌細(xì)胞株株人癌細(xì)胞株 ，至少重復(fù)一次，至少重復(fù)一次23抗腫瘤藥物藥效學(xué)研究的要求抗腫瘤藥物藥效學(xué)研究的要求 體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)方法相結(jié)合；以體內(nèi)實(shí)驗(yàn)為主體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)方法相結(jié)合；以體內(nèi)實(shí)驗(yàn)為主1南京凱基生物科技發(fā)展公司聯(lián)系電話025-52880812體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn) 對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選了解候選化合物的抗瘤譜了解候選化合物的抗瘤譜為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)提供參考為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)提供參

3、考試驗(yàn)?zāi)康脑囼?yàn)?zāi)康捏w外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法 選用選用10-1510-15株人癌細(xì)胞株株人癌細(xì)胞株 試驗(yàn)還應(yīng)考察受試物對(duì)耐藥腫瘤細(xì)胞系和正常人源細(xì)胞的作用和影試驗(yàn)還應(yīng)考察受試物對(duì)耐藥腫瘤細(xì)胞系和正常人源細(xì)胞的作用和影響響 使用使用MTTMTT還原法、磺酰羅丹明還原法、磺酰羅丹明B(SRB)B(SRB)染色法染色法 藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為48-72 48-72 小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁24 24 小時(shí)后再給藥。小時(shí)后再給藥。 試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陰性、陽(yáng)性、溶媒對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陰性、陽(yáng)性、溶媒對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)

4、照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗腫瘤藥。腫瘤藥。 試驗(yàn)至少應(yīng)重復(fù)一次試驗(yàn)至少應(yīng)重復(fù)一次 四氮唑鹽還原法體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)后，值。值- 磺酰羅丹明染色法體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)水。OD和 染料排斥法體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)） 阿拉馬藍(lán)法體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)的 集落形成法體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)， 生長(zhǎng)曲線測(cè)定法體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)白血?。ò籽。?株）：株）：CCRF-CEM、HL-60、K562、MOLT-4、RPMI-8226、SR肺癌（肺癌（9株）：株）：A549、EKVX、HOP

5、-62、HOP-92、NCI-H23、NCI-H226、NCI-H322、 MNCI-H460、NCI-H522乳腺癌：乳腺癌：BT-549、HS578T、MCF-7、MCF-7/ADR、MDA-MB-231、ATCC、 MDA-MB-435、MDA-N、T-47D卵巢癌：卵巢癌：IGROV1、OVCAR-3、OVCAR-4、OVCAR-5、OVCAR-8、SK-OV-3腎癌：腎癌：786-0、A498、ACHN、CAKI-1、RXF-393、SN12C、TK-10、UO-31前列腺癌：前列腺癌：DU-145、PC-3中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤：中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤：SF-268 、SF-295 、SF-5

6、39、 SFB-19 、SFB-75、U251黑色素瘤：黑色素瘤：M14、MALME-3M、SK-MEL-2、SK-MEL-5、SK-MEL-28、UACC-62、 UACC-257、LOCIMV美國(guó)美國(guó)NCI抗腫瘤藥物體外篩選使用的抗腫瘤藥物體外篩選使用的60種人類細(xì)胞種人類細(xì)胞體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)瘤譜細(xì)胞株結(jié)合我國(guó)瘤譜細(xì)胞株結(jié)合我國(guó)實(shí)際情況實(shí)際情況呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、婦科腫、血液系統(tǒng)、婦科腫瘤瘤選用人正常細(xì)胞株選用人正常細(xì)胞株初步確定受試樣品對(duì)初步確定受試樣品對(duì)正常組織和腫瘤組織正常組織和腫瘤組織的選擇性的選擇性選用耐藥細(xì)胞株選用耐藥細(xì)胞株考察受

7、試樣品的抗耐考察受試樣品的抗耐藥作用藥作用國(guó)內(nèi)國(guó)內(nèi)體外體外篩選篩選的細(xì)的細(xì)胞株胞株選擇選擇選用人血管內(nèi)皮細(xì)胞選用人血管內(nèi)皮細(xì)胞株進(jìn)行同步考察株進(jìn)行同步考察細(xì)胞株有相當(dāng)一部分細(xì)胞株有相當(dāng)一部分是國(guó)內(nèi)自己建株是國(guó)內(nèi)自己建株胃癌、肝癌胃癌、肝癌體外初篩經(jīng)典三株細(xì)胞體外初篩經(jīng)典三株細(xì)胞A549HepG-2HCT-116兼顧選擇使用動(dòng)物（小鼠）腫瘤與人的腫瘤細(xì)胞；兼顧選擇使用動(dòng)物（小鼠）腫瘤與人的腫瘤細(xì)胞；篩選實(shí)驗(yàn)以快速生長(zhǎng)的細(xì)胞為主；篩選實(shí)驗(yàn)以快速生長(zhǎng)的細(xì)胞為主；兼顧選擇使用貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞與懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞兼顧選擇使用貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞與懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞樣品初篩時(shí)應(yīng)該注意三點(diǎn)樣品初篩時(shí)應(yīng)該注意三點(diǎn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體

8、外抗腫瘤活性試驗(yàn) 凱基現(xiàn)用的濃度為凱基現(xiàn)用的濃度為1、2、4、8、16、32、64、128、256、藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為般為48-72 小時(shí)，貼壁細(xì)胞小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁需先貼壁24 小時(shí)后再給藥。小時(shí)后再給藥。體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以同一樣品不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)以同一樣品不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線采用曲線采用Logit法計(jì)算半數(shù)有效濃度法計(jì)算半數(shù)有效濃度(IC50值或值或EC50值值)合成化合物或植物提取純品的合成化合物或植物提取純品的IC5010 gm1或植物粗提或植物粗提物的物的IC50

9、20 gm1時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。殺傷作用。體外試驗(yàn)至少重復(fù)一次體外試驗(yàn)至少重復(fù)一次體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外篩選其他方法：體外篩選其他方法：MTS法、刃天青法法、刃天青法以線粒體為作用靶點(diǎn)的受試物不宜采用四氮唑鹽還原法以線粒體為作用靶點(diǎn)的受試物不宜采用四氮唑鹽還原法 溶媒對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較，溶媒對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較，OD值應(yīng)在值應(yīng)在5%，且無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異應(yīng)考慮到受試物在水溶液中的穩(wěn)定性，比如環(huán)磷酰胺在水溶液中的半衰應(yīng)考慮到受試物在水溶液中的穩(wěn)定性，比如環(huán)磷酰胺在水溶液中的半衰 期為期為3h脂溶性的受試物常用

10、脂溶性的受試物常用DMSO助溶，但助溶，但DMSO終濃度不低于終濃度不低于0.1%測(cè)出的測(cè)出的OD值有事會(huì)出現(xiàn)假陰性（加值有事會(huì)出現(xiàn)假陰性（加MTT等染色劑時(shí)更換培養(yǎng)基）等染色劑時(shí)更換培養(yǎng)基）注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)舉舉例例HepG-2 72hGroupMeanSDInhibitive RateNegative Control 0.9550.010Positive Control 0.9520.0100.29%Solvent Control 0.1650.00782.74%化合物XXXIC50=22.588uM100M0.0510.00594.66%80M0.101

11、0.00989.47%60M0.1520.00884.08%40M0.2850.00470.16%20M0.6620.01330.72%10M0.7660.02019.81%5M0.8470.01111.31%2.5M0.9180.0103.92%1.25M0.9400.0101.59%表表 化合物化合物XXX對(duì)人肝癌細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG-2體外增殖的影響體外增殖的影響化合物XXX對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG-2體外增殖的影響化合物XXX對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG-2體外增殖的影響020406080100020406080100XXX濃度 uM抑制率（%）體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤試

12、驗(yàn)結(jié)果是評(píng)價(jià)候選化合物有效性的最重要指標(biāo)體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)結(jié)果是評(píng)價(jià)候選化合物有效性的最重要指標(biāo)體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中至少一種為體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中至少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。試驗(yàn)結(jié)果三種模型人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。試驗(yàn)結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效，評(píng)定該化合物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)性均為有效，再重復(fù)一次也為有效，評(píng)定該化合物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)性腫瘤具有治療作用。腫瘤具有治療作用。通常情況下，以人癌異體移植模型試驗(yàn)結(jié)果來評(píng)價(jià)細(xì)胞毒類抗通常情況下，以人癌異體移植模型試驗(yàn)結(jié)果來評(píng)價(jià)細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的有效性。腫瘤藥物的有效性。體內(nèi)

13、抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)小鼠腫瘤模型小鼠腫瘤模型大鼠腫瘤模型大鼠腫瘤模型人源異種移植腫瘤模型人源異種移植腫瘤模型動(dòng)物模型動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)動(dòng)物要求健康，符合等級(jí)動(dòng)物要求，三證動(dòng)物要求健康，符合等級(jí)動(dòng)物要求，三證 裸鼠：裸鼠：SPF級(jí)，小鼠：清潔級(jí)、級(jí)，小鼠：清潔級(jí)、SPF級(jí)級(jí) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證雌雄均可，但同一批實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物性別必須相同雌雄均可，但同一批實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物性別必須相同 婦科腫瘤使用雌性小鼠、前列腺癌等使用雄性小

14、鼠婦科腫瘤使用雌性小鼠、前列腺癌等使用雄性小鼠小鼠鼠齡為小鼠鼠齡為5-6周，體重為周，體重為18-22克克 裸鼠裸鼠6周齡以后，會(huì)產(chǎn)生體液免疫、周齡以后，會(huì)產(chǎn)生體液免疫、NK細(xì)胞、細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞免疫，成瘤率會(huì)下降淋巴細(xì)胞免疫，成瘤率會(huì)下降 同批動(dòng)物體重相差不超過同批動(dòng)物體重相差不超過20%評(píng)價(jià)同一物質(zhì)的活性時(shí)，不同批次的實(shí)驗(yàn)必須采用同一品系的小鼠評(píng)價(jià)同一物質(zhì)的活性時(shí)，不同批次的實(shí)驗(yàn)必須采用同一品系的小鼠體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)?zāi)[瘤瘤株腫瘤瘤株用體外試驗(yàn)敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗(yàn)。用體外試驗(yàn)敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗(yàn)。 模模型建立和使用應(yīng)注意：型建立和使

15、用應(yīng)注意：(1) 移植瘤一般由相應(yīng)的細(xì)胞株移植而建立，對(duì)細(xì)胞株和移植瘤的化療敏感性應(yīng)予了解。(2) 移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳2-3代后再用于體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。(3) 對(duì)模型生長(zhǎng)情況應(yīng)全面了解，尤其是生長(zhǎng)快的模型(4) 為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于 15-20代 呼吸系統(tǒng)腫瘤婦科腫瘤人肺癌 NCI-H460小鼠宮頸癌 U14人肺腺癌 A549人乳腺癌 MDA-MB-435消化系統(tǒng)腫瘤小鼠胃癌 MFC人乳腺癌 MDA-MB-231人胃癌 BGC-803人乳腺癌 MX-1人胃癌 HGC-27人乳腺癌 BCaP-37人低分化胃癌 BGC-823人宮頸癌 SiHa人低分化胃

16、癌 MGC-803人宮頸癌 Hela人低分化胃癌 MKN-45人卵巢癌 A2780人中分化胃癌 SGC-7901人卵巢癌 SK-OV-3人高分化胃癌 MKN-28生殖系統(tǒng)腫瘤人腎癌 Ketr-3小鼠肝癌 H22人膀胱癌 EJ人肝癌 QGY-7701人膀胱癌 T24人肝癌 SMMC-7721人前列腺癌 PC-3人肝癌 Bel-7402人前列腺癌 PC-3M人肝細(xì)胞性肝癌 IM3白血病人白血病 HL-60人肝癌 HepG-2人白血病 K562人結(jié)腸癌 Ls-174-T人耐阿霉素白血病 K562/Adr人結(jié)腸癌 CL187皮膚腫瘤小鼠黑色素瘤 B16F1人結(jié)腸癌 HCT-116小鼠黑色素瘤 B16F

17、10人結(jié)腸癌 SW1116小鼠黑色素瘤 B16BL6人結(jié)腸癌 HT-29人黑色素瘤 A375人胰腺癌 BxPC-3人黑色素瘤 M14頭頸部腫瘤人喉表皮癌 Hep-2其它腫瘤小鼠肉瘤 S180體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)小鼠腫瘤模型小鼠腫瘤模型優(yōu)點(diǎn)：潛伏期短、移植瘤成活率高、生長(zhǎng)均勻、無自發(fā)緩解、試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：潛伏期短、移植瘤成活率高、生長(zhǎng)均勻、無自發(fā)緩解、試驗(yàn)周期短、費(fèi)用低周期短、費(fèi)用低缺點(diǎn)：動(dòng)物腫瘤在生物學(xué)和遺傳學(xué)上與臨床不一致，在藥物敏感性缺點(diǎn)：動(dòng)物腫瘤在生物學(xué)和遺傳學(xué)上與臨床不一致，在藥物敏感性方面與人體腫瘤方面與人體腫瘤 不一致不一致僅可用于候選化合物的初步篩選僅可用于候選化合物的

18、初步篩選常用小鼠腫瘤常用小鼠腫瘤H22、S180、Lewis人癌裸鼠異種移植腫瘤模型人癌裸鼠異種移植腫瘤模型優(yōu)點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床較符合、優(yōu)點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床較符合、可用于研究獲得性藥物抗性可用于研究獲得性藥物抗性缺點(diǎn)：飼養(yǎng)條件要求高、接種成活率低、移植瘤個(gè)體差異大、缺點(diǎn)：飼養(yǎng)條件要求高、接種成活率低、移植瘤個(gè)體差異大、部分模型部分模型 很難構(gòu)建、生存時(shí)間不適合作為試驗(yàn)終點(diǎn)很難構(gòu)建、生存時(shí)間不適合作為試驗(yàn)終點(diǎn)人癌裸鼠皮下移植瘤操作簡(jiǎn)單、易于觀察與結(jié)果判定，但皮下移植瘤缺人癌裸鼠皮下移植瘤操作簡(jiǎn)單、易于觀察與結(jié)果判定，但皮下移植瘤缺乏腫瘤最典型的特性乏腫瘤最典型的特性- -轉(zhuǎn)移，是現(xiàn)在評(píng)價(jià)抗腫瘤藥

19、物活性的主要模型轉(zhuǎn)移，是現(xiàn)在評(píng)價(jià)抗腫瘤藥物活性的主要模型體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解者，可先用溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解者，可先用小量酸小量酸(0.1-0.5N HCl)或堿或堿(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解，調(diào)節(jié)溶解，調(diào)節(jié)pH在在4.5-9.0的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫80、DMSO助溶的藥物，或助溶的藥物，或用吐溫用吐溫60、吐溫、吐溫80、2-3%淀粉、淀粉、0.5%羧甲基纖維素制成混懸液的藥物，羧甲基纖維素制成混懸液的

20、藥物，可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相同濃度的溶劑對(duì)照組。用注射用花生油可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相同濃度的溶劑對(duì)照組。用注射用花生油配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉注射配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉注射藥物配制藥物配制體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、治療組。試驗(yàn)設(shè)模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、治療組。治療組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種治療組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將動(dòng)物隨機(jī)分組，裸鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植后次日將動(dòng)物隨機(jī)分組，裸鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至100300mm3后將動(dòng)物

21、隨機(jī)分組。后將動(dòng)物隨機(jī)分組。動(dòng)物數(shù)普通小鼠每組動(dòng)物數(shù)普通小鼠每組10只，裸鼠只，裸鼠6只。只。組別設(shè)置組別設(shè)置試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，一般按治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，一般按4:2:1設(shè)置設(shè)置如何確定試驗(yàn)劑量如何確定試驗(yàn)劑量臨床等效劑量（根據(jù)體表面積換算）臨床等效劑量（根據(jù)體表面積換算）根據(jù)半數(shù)致死量（根據(jù)半數(shù)致死量（1/10-1/20預(yù)摸）或者高劑量使用最大耐受量或預(yù)摸）或者高劑量使用最大耐受量或LD10的劑量的劑量根據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)劑量根據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)劑量劑量設(shè)置劑量設(shè)置試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)照組給予相應(yīng)

22、的溶劑；模型對(duì)照組給予相應(yīng)的溶劑；陽(yáng)性對(duì)照藥選用對(duì)該動(dòng)物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物（陽(yáng)性組陽(yáng)性對(duì)照藥選用對(duì)該動(dòng)物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物（陽(yáng)性組必須作出陽(yáng)性結(jié)果，否則有理由懷疑篩選方法和指標(biāo)的可信度）必須作出陽(yáng)性結(jié)果，否則有理由懷疑篩選方法和指標(biāo)的可信度）如受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時(shí)，必須選用該抗癌藥物如受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時(shí)，必須選用該抗癌藥物作為陽(yáng)性對(duì)照藥作為陽(yáng)性對(duì)照藥原型劑對(duì)照原型劑對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照藥選擇原則陽(yáng)性對(duì)照藥選擇原則 療效確切與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機(jī)理 對(duì)照組設(shè)置對(duì)照組設(shè)置試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)分組

23、當(dāng)日開始給藥，根據(jù)不同藥物的代謝動(dòng)力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定分組當(dāng)日開始給藥，根據(jù)不同藥物的代謝動(dòng)力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方案。給藥方案。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。 給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時(shí)，可考給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時(shí)，可考慮使用腹腔給藥，但在評(píng)價(jià)藥效時(shí)要注意這兩種給藥途徑是有差別慮使用腹腔給藥，但在評(píng)價(jià)藥效時(shí)要注意這兩種給藥途徑是有差別的。的?？刹扇×鲋?、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。可采取瘤周、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗(yàn)時(shí)一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑腹水瘤試驗(yàn)時(shí)一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。給藥

24、方案和給藥途徑給藥方案和給藥途徑試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)腹水瘤模型腹水瘤模型接種給藥后，觀察和記錄動(dòng)物接種給藥后，觀察和記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。如陰性對(duì)照組如陰性對(duì)照組20%動(dòng)物存活動(dòng)物存活時(shí)間超過時(shí)間超過4周，表明腹水瘤生周，表明腹水瘤生長(zhǎng)不良，實(shí)驗(yàn)作廢長(zhǎng)不良，實(shí)驗(yàn)作廢。裸鼠移植瘤模型裸鼠移植瘤模型推薦使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)推薦使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)根據(jù)移植腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)根據(jù)移植瘤的生長(zhǎng)情況而定，一般為瘤的生長(zhǎng)情況而定，一般為每周每周2-3次次,每次測(cè)量同時(shí)還需每次測(cè)量同時(shí)還需稱鼠重稱鼠重。免疫

25、缺陷小鼠皮下移植的腫瘤很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，多數(shù)死于原發(fā)腫免疫缺陷小鼠皮下移植的腫瘤很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，多數(shù)死于原發(fā)腫瘤。而臨床腫瘤病人大多死于腫瘤轉(zhuǎn)移，動(dòng)物和臨床腫瘤病人瘤。而臨床腫瘤病人大多死于腫瘤轉(zhuǎn)移，動(dòng)物和臨床腫瘤病人的死亡原因不同。因此，對(duì)于人癌異體移植試驗(yàn)，生命延長(zhǎng)率的死亡原因不同。因此，對(duì)于人癌異體移植試驗(yàn)，生命延長(zhǎng)率并不是理想的觀測(cè)指標(biāo)。并不是理想的觀測(cè)指標(biāo)。體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)裸鼠皮下移植瘤模型裸鼠皮下移植瘤模型腫瘤體積腫瘤體積(tumor volume,TV)的計(jì)算公式為：的計(jì)算公式為：V = 1/2ab2 或或/6abc其中其中a、b、c分別表示長(zhǎng)寬高。兩公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式。分別表示長(zhǎng)寬高。兩公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式。根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積（根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積（relative tumor volume，RTV），）， RTV = Vt / V0。其中其中V0為分籠給藥時(shí)為分籠給藥時(shí)(即即d0)測(cè)量