高中生物實(shí)驗(yàn)—DNA的粗提取和鑒定PPT精選文檔

1、.1課題課題 DNA的的粗粗提取與鑒定提取與鑒定染色體成分染色體成分蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)RNA(少量少量)DNA.2酶的專一性酶的專一性）高溫高溫DNADNA耐高溫耐高溫DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNADNA熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60608080的高溫，而的高溫，而DNADNA在在8080以上才會(huì)變性。以上才會(huì)變性。DNADNA對(duì)洗滌劑耐受性對(duì)洗滌劑耐受性 洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNADNA沒(méi)有影響。沒(méi)有影響。洗滌劑洗滌劑.31 1）不同濃度）不同濃度NaClNaCl中中D

2、NADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同，與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，細(xì)不溶于酒精，細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。3 3）DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)酶耐受性不同：酶的專一性和蛋白質(zhì)對(duì)酶耐受性不同：酶的專一性蛋白酶水解蛋蛋白酶水解蛋白質(zhì)。但是對(duì)白質(zhì)。但是對(duì)DNADNA沒(méi)有影響。沒(méi)有影響。4 4）DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNADNA熱穩(wěn)定性不同。熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60608080的高溫，而的高溫，而DNADNA

3、在在8080以上才會(huì)變以上才會(huì)變性。性。5 5）DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，和蛋白質(zhì)對(duì)洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)但對(duì)DNADNA沒(méi)有影響。沒(méi)有影響。提取提取DNA的原理包括的原理包括DNA的的 兩個(gè)方面兩個(gè)方面 溶解性和耐受性溶解性和耐受性1.DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)原理的粗提取實(shí)驗(yàn)原理.4雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞核，含大量的核，含大量的DNA,DNA,既經(jīng)濟(jì)又易取既經(jīng)濟(jì)又易取 .53 3、方法與過(guò)程、方法與過(guò)程 1).1).制雞血細(xì)胞液制雞血細(xì)胞液0.1g/mL檸檬酸鈉檸檬酸鈉100mL活活雞鮮血雞鮮血180mL5

4、00mL燒杯中，玻棒燒杯中，玻棒攪拌攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液離心或靜置后去掉上清液血漿血漿血細(xì)胞血細(xì)胞.6關(guān)于關(guān)于DNA粗提取的實(shí)驗(yàn)材料的選擇，也經(jīng)過(guò)了多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較，粗提取的實(shí)驗(yàn)材料的選擇，也經(jīng)過(guò)了多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較，最終選擇雞血做實(shí)驗(yàn)材料的原因是什么？請(qǐng)回答下列問(wèn)題：最終選擇雞血做實(shí)驗(yàn)材料的原因是什么？請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）雞血中紅細(xì)胞）雞血中紅細(xì)胞 ，家雞屬于鳥(niǎo)類，家雞屬于鳥(niǎo)類，新陳代謝旺盛，因而血液中新陳代謝旺盛，因而血液中 細(xì)胞數(shù)目較多，可以提供豐富的細(xì)胞數(shù)目較多，可以提供豐富的 （2）實(shí)驗(yàn)前由老師制備雞血細(xì)胞液供同學(xué)們做實(shí)驗(yàn)材料，而不用）實(shí)驗(yàn)

5、前由老師制備雞血細(xì)胞液供同學(xué)們做實(shí)驗(yàn)材料，而不用雞全血，主要原因是雞全血，主要原因是（3）生活在牧區(qū)的人們，采集羊、牛和馬血比較方便，若他們按）生活在牧區(qū)的人們，采集羊、牛和馬血比較方便，若他們按實(shí)驗(yàn)要求完成實(shí)驗(yàn)步驟后，結(jié)果是實(shí)驗(yàn)要求完成實(shí)驗(yàn)步驟后，結(jié)果是 ，這是因?yàn)檫@是因?yàn)?， 但若改用動(dòng)物肝臟做實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)可以順利進(jìn)行，這是因但若改用動(dòng)物肝臟做實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)可以順利進(jìn)行，這是因?yàn)闉?。（4）若選用動(dòng)物肝臟做實(shí)驗(yàn)材料，在提取之前，最好增加）若選用動(dòng)物肝臟做實(shí)驗(yàn)材料，在提取之前，最好增加 程程序，使組織細(xì)胞更易分離。序，使組織細(xì)胞更易分離。含有完整的、成形的細(xì)胞核含有完整的、成形的細(xì)胞核紅紅

6、DNA量，所以一般采用雞血量，所以一般采用雞血 雞的全血包括血漿和血細(xì)胞，血漿中無(wú)雞的全血包括血漿和血細(xì)胞，血漿中無(wú)DNA，全血中除掉血漿后就是濃縮的血細(xì)胞液，全血中除掉血漿后就是濃縮的血細(xì)胞液，DNA的相對(duì)含量提高了。的相對(duì)含量提高了。在實(shí)驗(yàn)中很難提取到在實(shí)驗(yàn)中很難提取到DNA哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中無(wú)細(xì)胞核，反靠白細(xì)胞哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中無(wú)細(xì)胞核，反靠白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中的少量和淋巴細(xì)胞中的少量DNA，在實(shí)驗(yàn)中很難提取到，在實(shí)驗(yàn)中很難提取到肝細(xì)胞中含有細(xì)胞核，并且肝組織容易被破壞，有利于肝細(xì)胞中含有細(xì)胞核，并且肝組織容易被破壞，有利于DNADNA的提取的提取若使肝組織易分離，將肝細(xì)胞剪碎、研

7、磨是一種簡(jiǎn)便易行的方法。若使肝組織易分離，將肝細(xì)胞剪碎、研磨是一種簡(jiǎn)便易行的方法。.7提取細(xì)胞核物質(zhì)：提取細(xì)胞核物質(zhì)：溶解核內(nèi)溶解核內(nèi)DNA：在濾液中加在濾液中加2mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶液并攪拌，使染色質(zhì)中溶液并攪拌，使染色質(zhì)中DNADNA 與蛋白質(zhì)分離，與蛋白質(zhì)分離，DNADNA充分溶解，充分溶解，析出析出DNA：DNA黏稠物再溶解：黏稠物再溶解：在燒杯中用在燒杯中用2mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。提取較純凈的提取較純凈的DNA：DNA的鑒定：的鑒定：取取兩試管兩試管各加各加2mol/L的的NaClNaCl溶液，溶液，將將DNA充分

8、溶解于其充分溶解于其 中一試管，然后向兩試管中一試管，然后向兩試管加入加入二苯胺試劑二苯胺試劑，混勻沸水中加熱，混勻沸水中加熱 5min5min后后冷卻冷卻，可發(fā)現(xiàn)，可發(fā)現(xiàn)DNADNA與試劑反應(yīng)使溶液呈與試劑反應(yīng)使溶液呈現(xiàn)藍(lán)色現(xiàn)藍(lán)色。濾取濾取DNA黏稠物：黏稠物：過(guò)濾含過(guò)濾含DNA的的NaClNaCl溶液溶液：用兩層紗布過(guò)濾。用兩層紗布過(guò)濾。2)實(shí)驗(yàn)方法步驟：實(shí)驗(yàn)方法步驟： 在上述溶液中緩緩在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，加入蒸餾水，并沿一個(gè)方向并沿一個(gè)方向輕輕攪拌輕輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；出現(xiàn)絲狀物；當(dāng)絲狀物不在增加時(shí)，停止加水當(dāng)絲狀物不在增加時(shí)，停止加水（此時(shí)（此時(shí)NaCl溶液的濃度相當(dāng)于溶液的濃

9、度相當(dāng)于0.14mol/L）。）。 用多層紗布用多層紗布過(guò)濾過(guò)濾，含，含DNA的粘稠物留在紗布上。的粘稠物留在紗布上。 濾液中含有濾液中含有DNA。所得的濾液體積分?jǐn)?shù)為所得的濾液體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精的冷卻酒精50mL，用玻棒沿，用玻棒沿一個(gè)方向一個(gè)方向輕緩攪拌輕緩攪拌，溶液中（，溶液中（析出析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒玻棒將將絲狀物絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。卷起，并用濾紙吸取上面的水分。利用細(xì)胞吸水破裂，細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)，后用利用細(xì)胞吸水破裂，細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)，后用紗布紗布過(guò)濾取其濾液。過(guò)濾取其濾液。血細(xì)胞在蒸餾水中易吸水而導(dǎo)致血細(xì)胞在蒸餾水中易

10、吸水而導(dǎo)致細(xì)胞膜和核膜細(xì)胞膜和核膜的破裂，據(jù)此可得出含核的破裂，據(jù)此可得出含核DNADNA的溶液。的溶液。.8鑒定時(shí)藍(lán)色的深淺與溶液中鑒定時(shí)藍(lán)色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關(guān)。的含量多少有關(guān)。自變量你能采用其他方法對(duì)你能采用其他方法對(duì)DNADNA進(jìn)行鑒定嗎？進(jìn)行鑒定嗎？洋蔥的鱗片葉表皮細(xì)胞洋蔥的鱗片葉表皮細(xì)胞鑒定所用的試劑是鑒定所用的試劑是二苯胺二苯胺或或甲基綠甲基綠。用用二苯胺二苯胺須加熱。用須加熱。用甲基綠不用水浴甲基綠不用水浴加熱。加熱。.9.10整個(gè)實(shí)驗(yàn)中整個(gè)實(shí)驗(yàn)中加入加入“兩次蒸餾水，兩次蒸餾水，三次三次NaClNaCl溶液溶液，一次酒精，一次酒精”酒精最好用酒精最好用95%95

11、%的冷酒精的冷酒精; ;加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時(shí)加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時(shí), ,動(dòng)作要?jiǎng)幼饕p緩且朝一個(gè)方向輕緩且朝一個(gè)方向。保證保證DNADNA分子的完整性。分子的完整性。.11下圖為下圖為“DNADNA粗提取和鑒定粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作。這些操作目的正確實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作。這些操作目的正確的是的是（）A.A.是洗滌血細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)是洗滌血細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)B.B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的雜質(zhì)，去除不溶于酒精的雜質(zhì)C.C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)D.D

12、.是稀釋是稀釋NaClNaCl溶液，去除不溶于低濃度溶液，去除不溶于低濃度NaClNaCl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)是釋放核物質(zhì)是釋放核物質(zhì)是提純是提純DNADNA，去除溶于酒，去除溶于酒精的雜質(zhì)，精的雜質(zhì)，稀釋稀釋NaClNaCl溶液，析出溶液，析出DNADNA。C.12甲、乙兩圖為甲、乙兩圖為“DNADNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)中涉及的兩個(gè)操作裝實(shí)驗(yàn)中涉及的兩個(gè)操作裝置圖。相關(guān)敘述正確的是置圖。相關(guān)敘述正確的是 甲甲 乙乙A A圖甲的燒杯和圖乙的試管中所用溶劑都為圖甲的燒杯和圖乙的試管中所用溶劑都為NaClNaCl溶液，但兩者溶液，但兩者濃度不同濃度不同B B圖乙試管經(jīng)少許加熱后即可

13、觀察到一支試管中的溶液明顯變圖乙試管經(jīng)少許加熱后即可觀察到一支試管中的溶液明顯變藍(lán)，另一支試管中的溶液不變藍(lán)藍(lán)，另一支試管中的溶液不變藍(lán)C C圖甲操作需用玻棒迅速攪拌以使圖甲操作需用玻棒迅速攪拌以使DNADNA成為絮狀沉淀并纏繞在成為絮狀沉淀并纏繞在玻棒上玻棒上D D圖乙操作中所用的二苯胺需現(xiàn)配現(xiàn)用以達(dá)到較好的鑒定效果圖乙操作中所用的二苯胺需現(xiàn)配現(xiàn)用以達(dá)到較好的鑒定效果D.13植物細(xì)胞植物細(xì)胞需要先用需要先用洗滌劑洗滌劑（洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔（洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔精等）精等）溶解細(xì)胞膜。溶解細(xì)胞膜。 洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜的原因是：的原因是：洗滌液中含有十二烷基硫酸鈉和洗

14、滌液中含有十二烷基硫酸鈉和堿，堿，它們可使細(xì)胞膜破裂，蛋白它們可使細(xì)胞膜破裂，蛋白質(zhì)變性，使蛋白質(zhì)與質(zhì)變性，使蛋白質(zhì)與DNADNA分離開(kāi)來(lái)。分離開(kāi)來(lái)。 動(dòng)物細(xì)胞膜是不用試劑（動(dòng)物細(xì)胞膜是不用試劑（洗滌劑）洗滌劑）破壞的，破壞的，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞膜外面沒(méi)因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞膜外面沒(méi)有細(xì)胞壁的保護(hù)有細(xì)胞壁的保護(hù)，放在清水中自，放在清水中自然的就會(huì)吸水而脹破，釋放出其然的就會(huì)吸水而脹破，釋放出其中的中的DNADNA等物質(zhì)。等物質(zhì)。 .14方法步驟方法步驟1 1、將、將30g30g香蕉或菜花切碎，放入研缽中。向研香蕉或菜花切碎，放入研缽中。向研缽中加入缽中加入2g2g氯化鈉氯化鈉，研磨直至成半流體狀。，研磨直至成

15、半流體狀。3 3、將混合液用兩層紗布過(guò)濾，向?yàn)V液中、將混合液用兩層紗布過(guò)濾，向?yàn)V液中加入加入預(yù)冷預(yù)冷的的10ml10ml乙醇乙醇溶液，靜置，可產(chǎn)生溶液，靜置，可產(chǎn)生絮狀的絮狀的DNADNA。4 4、取兩支試管，分別加入、取兩支試管，分別加入5ml5ml生生理鹽水，將理鹽水，將DNADNA挑至其中一支試挑至其中一支試管中，輕輕攪拌使其溶解。管中，輕輕攪拌使其溶解。2 2、向研缽中加入、向研缽中加入10ml10ml蒸餾水或涼開(kāi)水，攪蒸餾水或涼開(kāi)水，攪拌。然后加入拌。然后加入10ml10ml洗滌劑洗滌劑，輕輕攪拌。，輕輕攪拌。.15例題例題1 1：下列圖示中能反映：下列圖示中能反映DNADNA溶解度溶解度與與NaClNaCl溶液濃度溶液濃度(mol/L)(mol/L)之間的關(guān)系的是（之間的關(guān)系的是（ ）C C0.140.14DNADNA溶解度溶解度0.140.140.140.140.140.14DNADNA溶解度溶解度DNADNA溶解度溶解度DNADNA溶解度溶解度A