大鼠(Rat)IV型膠原(CoIV)中文000000教學(xué)文案

1、此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除RD ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY-大鼠 (Rat) IV 型膠原 (Co IV) ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿試驗原理：Co IV 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ ELISA）.已知 Co IV 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將 Co IV 和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的 HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物 A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中 Co IV 的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其

2、配制試劑盒成份（ 2-8保存）96 孔配置48 孔配置配制96/48 人份酶標(biāo)板1塊板（ 96T）半塊板（ 48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品： 800ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（ 0.3ml）按說明書進行稀稀空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（ 0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml ）1瓶（ 2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的抗 Co IV 抗體1瓶（6ml ）1瓶（ 3.0ml）即用型親和鏈酶素 -HRP1瓶（10ml）1瓶（ 5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（ 10ml）按說明書進行稀釋底物 A1瓶（6.0ml）1瓶（ 3.0ml）即用型底物 B1瓶（6

3、.0ml）1瓶（ 3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（ 3.0ml）即用型標(biāo)本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（ 6.0ml）即用型自備材料1 蒸餾水。2 加樣器： 5ul、 10ul、50ul 、100ul、 200ul、500ul 、1000ul 。3 振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項此文檔僅供學(xué)習(xí)和交流此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除1 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2 實驗中

4、不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、 液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。4B 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。5 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。6 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。 避免用手接觸，7有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD 值。8 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣

5、品收集、處理及保存方法、 血清-操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000g1離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。、 血漿-EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。離心30分鐘去除顆粒。21000 g、 細胞上清液-1000g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。34、 組織勻漿 - 將組織加入適量生理鹽水搗碎。 1000g 離心 10 分鐘，取上清液5、 保存 - 如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均

6、勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：800 ng/ml（6號標(biāo)準(zhǔn)品）400 ng/ml（5號標(biāo)準(zhǔn)品）200 ng/ml（4號標(biāo)準(zhǔn)品）100 ng/ml（3號標(biāo)準(zhǔn)品）50 ng/ml（2 號標(biāo)準(zhǔn)品）25 ng/ml（1號標(biāo)準(zhǔn)品）0 ng/ml（空白對照）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul 。100ul 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 100ul 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 100ul 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 100ul 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 100u

7、l 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 100ul 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液原始濃度不用稀釋直接加入 50ul 。2 洗滌緩沖液（ 50）的稀釋：蒸餾水50 倍稀釋。操作步驟1 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1 稀釋后加入 50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品 50ul 于反應(yīng)孔、加入待測樣品 50ul 于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入 50ul 的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜

8、板，輕輕振蕩混勻， 37溫育 1 小時。此文檔僅供學(xué)習(xí)和交流此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。4如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5 每孔加入 80ul 的親和鏈酶素 -HRP ，輕輕振蕩混勻， 37溫育 30 分鐘。 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。6如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻， 溫育10分鐘。避免光照。737 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。89 在 450nm

9、 波長處測定各孔的OD 值。建議使用的實驗方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml ）A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6 號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。試劑盒性能1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1 號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為 0.990。2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值：于波長 450n