基因工程在治療1型糖尿病方面的研究進(jìn)展與發(fā)展.doc

基因工程在治療1型糖尿病方面的研究進(jìn)展與發(fā)展 【摘要】 近年來(lái), 隨著人們對(duì)糖尿病本質(zhì)的深層次揭示和現(xiàn)代分子生物學(xué)手段的發(fā)展, 糖尿病,尤其是1型糖尿病基因治療的內(nèi)容不斷增加。本文總結(jié)了利用合適的啟動(dòng)子載送胰島素原的cDNA, 刺激新的B 細(xì)胞生成以達(dá)到恢復(fù)胰島素的生理性分泌及改善或避免破壞B細(xì)胞免疫應(yīng)答的1型糖尿病基因治療進(jìn)展，并展望其未來(lái)發(fā)展方向。【關(guān)鍵詞】 1型糖尿??；基因治療；病毒載體；B細(xì)胞工程 自上個(gè)世紀(jì)以來(lái), 胰島素的發(fā)現(xiàn)和其類似物的不斷發(fā)展挽救了無(wú)數(shù)1型糖尿病患者的生命。但外源性胰島素及其類似物的補(bǔ)充治療存在需要多次注射、嚴(yán)密監(jiān)視血糖及無(wú)法按生理需求分泌等缺陷。隨著新病毒載體的成熟運(yùn)用, 載送方式的不斷改進(jìn)以及治療思路的不斷擴(kuò)展, 科學(xué)家們開(kāi)始嘗試用基因治療技術(shù)來(lái)治療1 型糖尿病。1型糖尿病( Type 1 diabetesme llitus, T1DM )的主要病因與自身免疫對(duì)于機(jī)體胰島B細(xì)胞的破壞有關(guān)。目前研究人員嘗試通過(guò)以下三種策略來(lái)平穩(wěn)控制血糖。首先是直接載送具有合適啟動(dòng)子的胰島素原cDNA 到胰腺以外的部位(通常是肝), 通過(guò)異位分泌胰島素來(lái)維持正常血糖水平。其次是通過(guò)刺激新的B細(xì)胞的生成來(lái)促使胰腺恢復(fù)原來(lái)的功能。第3種思路則是改善胰島B細(xì)胞的自身免疫反應(yīng)。下面就1 型糖尿病胰島素基因治療研究現(xiàn)狀分別從上述3 個(gè)方面作一綜述。1. 利用合適的啟動(dòng)子載送胰島素原的cDNA 1型糖尿病最簡(jiǎn)單直接的基因治療法是通過(guò)載送胰島素原的cDNA來(lái)替代死亡B細(xì)胞的功能。通常選擇肝細(xì)胞為基因送載的目的部位, 這是由于肝臟具有合成糖代謝相關(guān)酶及運(yùn)載蛋白的功能。目前已用于此基因轉(zhuǎn)移的載體有: ( 1) 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。( 2) 脂質(zhì)體載體。( 3) 腺相關(guān)病毒載體等。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體由于構(gòu)建簡(jiǎn)單, 宿主范圍廣, 可整合入宿主細(xì)胞基因組中獲得穩(wěn)定表達(dá)等優(yōu)點(diǎn), 而成為目前各種基因治療實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的載體。有研究顯示, 將含有人胰島素原基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體注入大鼠門靜脈后, 可在肝臟獲得5% 15% 的基因轉(zhuǎn)移效率, 并可使其表達(dá)持續(xù)6 個(gè)月, 阻止大劑量STZ 誘導(dǎo)的糖尿病鼠高血糖、體重下降、酮癥酸中毒以至死亡1 。然而逆轉(zhuǎn)錄病毒載體也有其缺點(diǎn), 它只能感染分裂期的細(xì)胞, 在體內(nèi)直接基因轉(zhuǎn)移時(shí)需要采取部分肝切除等方法促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖, 這使其在活體動(dòng)物以及人的直接應(yīng)用受到限制, 另外, 它缺乏靶向性, 隨機(jī)整合, 不可避免的產(chǎn)生安全性問(wèn)題。傳統(tǒng)的中性脂質(zhì)體載體是將磷脂、膽固醇或其它脂類的乙醚溶液加入DNA 溶液中, 通過(guò)處理得到帶DNA 的脂質(zhì)體小泡, DNA 被包裹在脂質(zhì)體膜內(nèi)部, 可與細(xì)胞膜融合被細(xì)胞內(nèi)吞而實(shí)施基因轉(zhuǎn)移。這種方法在胰島素基因活體直接基因轉(zhuǎn)移研究中應(yīng)用較早。八十年代已有學(xué)者將含有胰島素基因的質(zhì)粒與中性脂質(zhì)體作用后注入大鼠體內(nèi), 發(fā)現(xiàn)在肝組織中可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的存在, 并獲得一過(guò)性血糖下降和血漿胰島素水平升高。1987 年起出現(xiàn)了一系列陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑, DNA 通過(guò)與陽(yáng)離子之間的相互作用形成DNA脂質(zhì)體復(fù)合物再被細(xì)胞捕獲并最后表達(dá), 這大大提高了脂質(zhì)體的基因轉(zhuǎn)染效率 。目前認(rèn)為, 影響脂質(zhì)體活體直接基因轉(zhuǎn)移效率的因素有: ( 1) 啟動(dòng)子因素。有研究比較了巨細(xì)胞病毒( CMV) 啟動(dòng)子、SV40 啟動(dòng)子、腺病毒啟動(dòng)子及胸苷激酶( TK) 啟動(dòng)子引導(dǎo)氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶基因在大鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移表達(dá)效率, 發(fā)現(xiàn)CMV 啟動(dòng)子最高, 而TK 啟動(dòng)子效率最低 。還有研究發(fā)現(xiàn), 在各種啟動(dòng)子引導(dǎo)熒光酶( luc) 基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)中, CMV啟動(dòng)子可在肌肉中獲得最高表達(dá)效率 。( 2) 脂質(zhì)體的組成因素。研究發(fā)現(xiàn)在活體直接基因轉(zhuǎn)移時(shí),含有膽固醇的脂質(zhì)體可獲得最高轉(zhuǎn)移效率。( 3) DNA 與脂質(zhì)體的比例。 Thierry 等認(rèn)為經(jīng)靜脈基因轉(zhuǎn)移時(shí)DNA 與脂質(zhì)體的最佳比例為0. 08(wt/wt) , 而Egilmez 等 認(rèn)為這個(gè)比例應(yīng)在1 1 1 4( ug/nmol) 之間( 4)DNA 的用量。 Thierry 等在研究luc 基因經(jīng)靜脈注入小鼠體內(nèi)后的表達(dá)情況時(shí)發(fā)現(xiàn), 組織中l(wèi)uc 水平隨DNA 用量增加而逐漸增高, 當(dāng)DNA 用量增至100ug 以上時(shí), 組織中l(wèi)uc水平不再繼續(xù)增高甚至開(kāi)始下降。當(dāng)前在基因治療領(lǐng)域, 脂質(zhì)體尤其是陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移已成為一種最具創(chuàng)新性的、高效的轉(zhuǎn)染技術(shù)。然而大量研究表明, 脂質(zhì)體介導(dǎo)的活體直接轉(zhuǎn)移的基因表達(dá)是一過(guò)性的, 如何充分利用它的高效性和安全性, 使其介導(dǎo)轉(zhuǎn)移的基因長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)成為學(xué)者們今后需要研究的重要課題。腺相關(guān)病毒( AAV) 載體由于其位點(diǎn)特異性整合而在近年倍受重視。與其它病毒性載體相比, AAV載體具有以下優(yōu)點(diǎn): AAV 無(wú)致病性, 人類為自然宿主, 安全性較高; AAV 基因組可克隆入質(zhì)粒, 載體構(gòu)建簡(jiǎn)單; AAV 載體可將外源基因定點(diǎn)整合于人類19號(hào)染色體長(zhǎng)臂,基因表達(dá)穩(wěn)定;AAV 顆粒穩(wěn)定, 可通過(guò)離心濃縮提高病毒滴度達(dá)1012 cfu/ml。最近的研究表明, 腺病毒是最好的有效載體系統(tǒng)。它可以選擇性的將基因轉(zhuǎn)移到胰島, 但是要經(jīng)受免疫應(yīng)答反應(yīng)和載體的細(xì)胞毒作用。完全刪除病毒成分的腺病毒載體可以避免這一問(wèn)題, 它沒(méi)有毒副作用, 可以選擇性地將基因轉(zhuǎn)移到胰島上, 且胰島素的表達(dá)具有長(zhǎng)效性和高效性, 基因突變率低, 對(duì)體內(nèi)重要基因的表達(dá)幾乎不產(chǎn)生影響。通過(guò)探索不同的基因轉(zhuǎn)染路徑(腹膜內(nèi)注射, 導(dǎo)管內(nèi)注射, 靜脈內(nèi)注射) 和研究不同血清型的AAV 載體( ssAAV, dsAAV ) , 以研發(fā)廣泛、高效和穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)體系。研究證明, 幾乎整個(gè)胰島都可以表現(xiàn)出基因轉(zhuǎn)移, 但使用不同的轉(zhuǎn)移方法和載體表現(xiàn)出不同的效率和模式。經(jīng)腹腔和靜脈內(nèi)的AAV8注射可有效的轉(zhuǎn)染外分泌細(xì)胞, 使之像內(nèi)分泌細(xì)胞一樣分泌胰島素, 且AAV8在腹腔注射后可以廣泛的分布于肝、心、肌肉等。而AAV 6的胰腺導(dǎo)管內(nèi)傳遞則表現(xiàn)出很高的效率, 選擇性更強(qiáng)。與腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)注射相比，導(dǎo)管內(nèi)注射AAV 6是基因轉(zhuǎn)染的最佳方法。其最大優(yōu)點(diǎn)在于病毒的需求量少, 病毒也較少侵及非胰腺器官和組織, 更適用于大型動(dòng)物和人類。dsAAV比ssAAV 更適合于基因轉(zhuǎn)染, 因?yàn)閟sAAV 產(chǎn)生的胰島的基因轉(zhuǎn)染相當(dāng)有限。故導(dǎo)管內(nèi)注射dsAAV6是較為理想、廣泛、高效和穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)體系。目前，人們還在持續(xù)不斷地尋找和改進(jìn)能提高基因表達(dá)效率的分子生物學(xué)手段, 如以低壓脈沖電流介導(dǎo)的體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法電穿孔法( e lectroporation) 能顯著提高基因表達(dá)效率, 也被用于胰島素基因的體內(nèi)轉(zhuǎn)染, 其安全、高效的特點(diǎn)正受到人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注, 成為一種很有前途的體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法。2. 刺激新的B細(xì)胞生成以達(dá)到恢復(fù)胰島素的生理性分泌該方法的主要思路是將胰島素合成或調(diào)控基因?qū)氚屑?xì)胞，使其轉(zhuǎn)化為胰島B細(xì)胞。依轉(zhuǎn)移基因的靶細(xì)胞不同可分為生殖細(xì)胞基因治療和體細(xì)胞基因治療兩種途徑。因轉(zhuǎn)基因在受體細(xì)胞的隨機(jī)整合性和可傳代性, 以及其對(duì)人類長(zhǎng)期影響的不能完全預(yù)知, 并涉及倫理學(xué)問(wèn)題, 因此目前尚不考慮生殖細(xì)胞基因治療途徑。迄今臨床采用的均屬體細(xì)胞基因治療. 這種基因治療方法有兩種治療方案可供選擇: 一是將病人的體細(xì)胞取出作原代培養(yǎng), 將目的基因轉(zhuǎn)入后再移植回該病人體內(nèi), 這樣就避免了組織排異反應(yīng)帶來(lái)的問(wèn)題; 二是采用轉(zhuǎn)入胰島素基因后培養(yǎng)的傳代非B細(xì)胞系 。這兩種治療方案采用的技術(shù)方法大致相同, 然而, 將目的基因?qū)朐囵B(yǎng)的細(xì)胞較導(dǎo)入傳代培養(yǎng)的細(xì)胞系困難許多, 技術(shù)要求也更高, 目前 用于糖尿病基因治療研究的主要有三類靶細(xì)胞: :一類為胸昔激酶缺乏(Lt k 一) 的成纖維細(xì)胞; 一類為肝細(xì)胞; 第三類為來(lái)自垂體前葉的A C T H 瘤細(xì)胞(A t T 一2 0) 。L tk 一細(xì)胞為穩(wěn)定傳代細(xì)胞系, 具有易于培養(yǎng)、增殖、傳代、轉(zhuǎn)染和移植并表達(dá)分泌蛋白質(zhì)的特點(diǎn)。肝臟為體內(nèi)大器官, 是葡萄糖代謝和蛋白質(zhì)合成的重要場(chǎng)所, 進(jìn)食后糖和其它營(yíng)養(yǎng)成分首先通過(guò)門靜脈進(jìn)入肝臟并形成肝一胰聯(lián)系; 肝細(xì)胞具有與B 細(xì)胞類似的一些組織細(xì)胞特點(diǎn), 除參與葡萄糖代謝和蛋白質(zhì)合成外, 還表達(dá)B 細(xì)胞分泌胰島素所需的特異性葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(G L U T Z ) 和葡萄糖激酶(G K ); 其特殊的解剖部位和血循環(huán)特點(diǎn),靜脈或腹腔途徑移植轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞較易進(jìn)入肝、脾等內(nèi)臟, 而且可以通過(guò)這兩條途徑直接進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移, 因此肝細(xì)胞是糖尿病基因治療非常有前途的靶細(xì)胞。另外A t T 一20 細(xì)胞為神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞,具有一般內(nèi)分泌細(xì)胞分泌激素的特有結(jié)構(gòu)和功能。研究發(fā)現(xiàn)上述三類細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)人前胰島素。D N A 后均能合成分泌胰島素, 轉(zhuǎn)染的陽(yáng)性克隆細(xì)胞, 注射于糖尿病鼠腹腔后, 糖尿病鼠高血糖狀態(tài)明顯改善, 體重恢復(fù)。這些實(shí)驗(yàn)顯示利用胰外組織進(jìn)行糖尿病體細(xì)胞基因治療是可能的。但前兩者表達(dá)產(chǎn)物為人前胰島素, 而后者又稱A tT 一2 0 ins 細(xì)胞則分泌成熟胰島素。晚近證實(shí)A t T 一2 0i n s 細(xì)胞分泌顆粒中含有B 細(xì)胞分泌顆粒的膚酶PC Z 和P C 3, 因而可以加工前胰島素為成熟胰島素, 顯示神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞作為糖尿病基因治療的靶細(xì)胞具有特殊意義。型糖尿病基因治療中最為關(guān)鍵和復(fù)雜問(wèn)題是胰島素的表達(dá)調(diào)控問(wèn)題，分泌水平過(guò)高則造成低血糖死亡, 分泌水平過(guò)低又不能滿足治療要求。目前認(rèn)為, 有效的生理性調(diào)控序列分別為: 磷酸烯醇式丙酮酸激酶( phosphoeno lpyruvate carboxyk inase, PEPCK )、肝丙酮酸激酶( liver-pyruvate k inase, L-PK ) 和葡萄糖-6-磷酸酶( g lucose-6-phosphatase, G6Pase) 的啟動(dòng)子。PEPCK 啟動(dòng)子可同時(shí)受血糖和血漿胰島素的反饋調(diào)控, 但在血糖明顯升高時(shí)其作用將受到抑制而使胰島素的產(chǎn)量減少, 目前已不多用。L-PK和G6Pase是相對(duì)理想的啟動(dòng)子, 但作用不夠強(qiáng)大,基因表達(dá)效率不高, 影響了降糖的效果。近年, 人們又發(fā)現(xiàn)了一種新的調(diào)節(jié)因子) ) ) Foxa l ( 肝核因子) , 它是屬于Foxa家族的, 來(lái)源于內(nèi)胚層器官,可以對(duì)血糖的穩(wěn)態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié)。Foxal可以直接調(diào)節(jié)胰高血糖素, 因?yàn)槠渑c胰高血糖素的啟動(dòng)子是綁定在一起的。Foxal對(duì)胰島素的分泌有間接影響,UCP2 (線粒體解耦聯(lián)蛋白) 的啟動(dòng)子是Foxa l負(fù)性依賴性的。而UCP2可以通過(guò)氧化磷酸化來(lái)抑制胰島素分泌。故Foxal 可以用來(lái)維持血糖的穩(wěn)態(tài) 。但有許多問(wèn)題仍需要進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。2000年，Cheung 等 發(fā)現(xiàn)位于胃、十二指腸、空腸的K 細(xì)胞具有較高的GK 表達(dá)能力。K 細(xì)胞本身可以合成、分泌葡萄糖依賴的促胰島素多肽( g lucose 2 dependent insulinot ropic po lypeptide,G IP), 能增加糖調(diào)節(jié)胰島素的分泌。GIP 與胰島素的分泌都受血糖濃度調(diào)控。Cheung 將人胰島素基因?qū)胄∈蟮囊环N腸道細(xì)胞 STC-1( slow transit constipation, STC ) 細(xì)胞中，使之在GIP的調(diào)控下進(jìn)行表達(dá)，發(fā)現(xiàn)胰島素的產(chǎn)量會(huì)根據(jù)血糖的濃度而發(fā)生改變。在能夠分泌人胰島素的轉(zhuǎn)基因小鼠中， 人胰島素基因只限定在胃、十二指腸的K 細(xì)胞中表達(dá)，對(duì)由鏈脲佐菌素( streptozo tocin,STZ) 誘導(dǎo)的高血糖， 起到了滿意的降糖效果。口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)亦證實(shí), 血糖能很好地調(diào)控胰島素的分泌, 符合生理要求。這一發(fā)現(xiàn)使人們重新認(rèn)識(shí)了K 細(xì)胞的價(jià)值。由于它位于胃腸道，易于接近，且數(shù)量較多, 有可能通過(guò)一種非創(chuàng)傷性方法, 如采用內(nèi)窺鏡或口服的方法, 將胰島素基因?qū)隟 細(xì)胞中使之表達(dá)。因此, K 細(xì)胞被認(rèn)為是B細(xì)胞工程的理想選擇, 有希望解決胰島細(xì)胞移植中胰島B細(xì)胞供體不足的問(wèn)題。3.改善或避免破壞B細(xì)胞的免疫應(yīng)答免疫耐受的缺失導(dǎo)致胰島B細(xì)胞受損是1型糖尿病的病因, 而調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞在維持免疫耐受的過(guò)程中起關(guān)鍵作用。多種抗T 細(xì)胞單克隆抗體, 如: CD3, CD4,CD8, CD45RB, CD40L, TCRA、B等的抗體可以封阻某一類T細(xì)胞亞群, 減少T 細(xì)胞的浸潤(rùn), 并可誘導(dǎo)胰島B細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞的主動(dòng)耐受。谷氨酸脫羧酶自身抗體( GAD65Ab) 是一種與1型糖尿病密切相關(guān)的自身抗體。將GAD65Ab的Fc段基因與IL-4基因同時(shí)注入動(dòng)物體內(nèi), 可以收到預(yù)防NOD 小鼠發(fā)生糖尿病及減輕糖尿病患病個(gè)體病情的作用。熱休克蛋白p277 ( Hsp p277 )是來(lái)源于熱休克蛋白H sp60的/免疫調(diào)節(jié)肽, 也是一種重要的自身抗原的靶向抗原。近10年的研究證實(shí), H sp p277 能有效地減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島炎。Raz等 10 給35 位1 型糖尿病患者注射H spp277 10個(gè)月, 與對(duì)照組比較, 患者外源胰島素的用量沒(méi)有增加, C 肽水平并沒(méi)有下降。這一結(jié)果說(shuō)明H sp p277對(duì)糖尿病具有一定的緩解作用。目前，CD3, H sp p277已深入到臨床階段, 在一些病例中已得到一定療效。然而, 效果有待進(jìn)一步證明。4.展望目前, 糖尿病基因治療不斷取得新進(jìn)展。首先,研究人員開(kāi)始摒除以肝細(xì)胞為基因轉(zhuǎn)載目的地的思路, 采取側(cè)腦室內(nèi)注射載有瘦素基因的腺相關(guān)病毒來(lái)治療鏈脲霉素糖尿病小鼠。通過(guò)側(cè)腦室內(nèi)瘦素的持續(xù)過(guò)量表達(dá), 糖尿病小鼠的血糖在注射8周后恢復(fù)至正常水平, 并保持正常長(zhǎng)達(dá)44周之久。其次, 研究人員開(kāi)始探索使用非病毒的基因載送方式來(lái)治療糖尿病以回避使用病毒的風(fēng)險(xiǎn)。如用超聲定位微氣泡破壞技術(shù)攜帶促進(jìn)胰島細(xì)胞生成的細(xì)胞因子來(lái)治療鏈脲霉素糖尿病大鼠。攜帶質(zhì)粒的微小氣泡經(jīng)靜脈注射入大鼠體內(nèi)后, 用超聲波定位于大鼠胰腺, 使經(jīng)過(guò)此處的微小氣泡破裂, 從而釋放具有治療作用的質(zhì)粒。采用這種方法將糖尿病大鼠的血糖恢復(fù)了正常, 并維持正常達(dá)90 d。另外, 采用自體移植的方法將糖尿病約克夏豬的部分肝從體內(nèi)取出, 在體外轉(zhuǎn)染人胰島素質(zhì)粒, 再將其注射回糖尿病豬的肝內(nèi)后, 糖尿病豬的高血糖狀態(tài)得以改善, 肝細(xì)胞胰島素分泌長(zhǎng)達(dá)47周。這些策略成功規(guī)避了使用病毒載體帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。5.結(jié)束語(yǔ)隨著糖尿病在病因?qū)W、細(xì)胞生物學(xué)等多方面的發(fā)展, 人們的視角逐漸由宏觀轉(zhuǎn)向微觀, 思路更加開(kāi)闊, 不再局限于體外如何獲得胰島素, 而是從糖尿病發(fā)生的根本本質(zhì)上去解決問(wèn)題, 然而面臨的挑戰(zhàn)也更大。目前基因治療仍存在著兩大關(guān)鍵問(wèn)題:一是由于胰島B細(xì)胞的分泌機(jī)制尚未完全闡明,胰島素基因表達(dá)究竟是如何調(diào)控的? 如何使胰島素的分泌過(guò)程與生理過(guò)程相同或相似? 這是人們遇到的巨大挑戰(zhàn)。二是機(jī)體如何對(duì)胰島素基因的外源載體產(chǎn)生耐受? 外源載體的“侵入”是否會(huì)產(chǎn)生新的疾病? 故此我們需要從多方面進(jìn)行研究, 努力去構(gòu)建一種可以迅速準(zhǔn)確進(jìn)入靶細(xì)胞并根據(jù)血糖變化而快速反應(yīng)又可以避免或減輕基因治療的不良后果的載體系統(tǒng)。2010年國(guó)際糖尿病聯(lián)盟的數(shù)據(jù)顯示, 目前全球大約有2. 85億糖尿病患者, 預(yù)計(jì)到2030年, 全世界的糖尿病患者將達(dá)到4. 38 億?；蛑委熖悄虿≡诮?0多年中已取得大量寶貴的資料。但目前仍處于基礎(chǔ)研究階段, 距臨床應(yīng)用還有相當(dāng)?shù)木嚯x。隨著人們對(duì)胰島B細(xì)胞的生理機(jī)制和糖尿病的發(fā)病機(jī)制深入認(rèn)識(shí), 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的改進(jìn)和創(chuàng)新, 糖尿病的基因治療將會(huì)有更加廣闊的天地。隨著更優(yōu)秀病毒載體的出現(xiàn)以及非病毒載體技術(shù)的不斷成熟, 基因治療將有可能成為臨床上治療糖尿病的可靠方法或者重要輔助手段。參考文獻(xiàn)：游碩，張清，周智廣,2011，“糖尿病基因研究治療的新進(jìn)展”，國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志，第31卷，：69-72 2 李立，季軍，2008，“1型糖尿病的基因治療策略”，醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，第5卷，：181-184 3 肖新華，王女亙，1995，“1型糖尿病的基因治療”，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，第15卷，：28-304孫家忠，2000，“基因工程療法在糖尿病中的應(yīng)用進(jìn)展”，國(guó)外醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)分冊(cè)，第23卷，：313-3155李鴻，蘇本利，2003，“糖尿病基因療法的新進(jìn)展”，生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，第30期，：24-266 ZHONG W, TONG Z, KHA JA K R, et al1W idespread and s tab lepan creat ic gene tran sfer by adeno-associated v irus vectors via d i-fferen t rou tes J1 D iab etes, 2006, 55: 875-8841.7 楊志林, 徐如祥1 三維細(xì)胞培養(yǎng)在腫瘤研究中的進(jìn)展 J 1 國(guó)外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè), 2001, 28( 2) : 100-1041.8ZHONG W, TONG Z, KHA JA K R, et al1W idespread and s table pan creat ic gene tran sfer by adeno-associated v irus vectors v