百合花提取物對AChE活性及抗氧化活性影響研究.doc

百合花提取物對AChE活性及抗氧化活性影響研究 李瀟 武漢大學(xué)藥學(xué)院湖北省武漢市430072 【摘要】目的：觀察百合花提取物對AChE活性及抗氧化活性的影響；方法：利用抗AChE活性試驗和DPPH清除試驗觀察百合花提取物對AChE活性及抗氧化活性影響；結(jié)果：三種百合花提取物均有一定的抗AChE作用和抗氧化作用；結(jié)論：百合花提取物的抗AChE作用及抗氧化作用可為抗老年癡呆提供新線索。 關(guān)鍵詞百合花；ache；活性；老年癡呆；清除率；抗氧化 老年癡呆癥，是由于大腦器質(zhì)性損害而引起的腦功能障礙，使記憶、理解、判斷、自我控制等能力發(fā)生進行性退化和持續(xù)性智能損害，病理特征以老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)和神經(jīng)元丟失為主1-2。它不僅是個體疾病，而且因其帶來的社會負擔(dān)，已成為一個重要的公共衛(wèi)生問題3。 本實驗擬從天然產(chǎn)物中尋找AChE抑制劑及抗氧化劑，為老年癡呆的預(yù)防治療提供新的治療線索。 1材料與方法 1.1試驗材料 器材：EP管、水浴鍋、移液槍、紫外分光光度計、96孔板。 試劑：BufferB、DTNB、ACTI、DPPH。 受試藥：50mg/ml和100mg/ml百合花醇提物； 50mg/ml和100mg/ml百合花水提物50mg/ml和100mg/ml百合花石油醚提取物； 0.01mg/ml陽性對照加蘭他敏； 0.2、0.4、0.8mg/ml陽性對照還原性VC。 1.2方法 1.2.1抗AChE活性試驗 （1）根據(jù)下表對1.5mlEP管進行編號。 做1-12號受試物 1-蒸餾水（空白對照）2-無水乙醇3、50mg/ml百合花水提物4-100mg/ml百合花水提物5、50mg/ml百合花醇提物6、100mg/ml百合花醇提物7、50mg/ml百合花石油醚提取物8-100mg/ml百合花石油醚提取物9、0.2mg/ml還原性 VC（陽性）10、0.4mg/ml還原性VC 11、0.8mg/ml還原性VC12、0.01mg/ml加蘭他敏（陽性） 1.2.2按下列步驟加樣、溫浴、調(diào)零、測定、記錄 （1）將12支EP管進行編號為1-12。 （2）將200lBufferB、400lDTNB、200lACTI分別加入到各個管中，再將不同編號EP管加入相應(yīng)編號的受試藥物200l。 （3）溫浴20min。 （4）調(diào)零。取溫浴樣品450l，加BufferB100l搖勻，在紫外分光光度計450nm處進行調(diào)零。 （5）測定。取溫浴樣品450l，加AChE100l搖勻，在450nm處進行測定，記錄0s、15s、30s、45s、60s的OD值（6）清洗，重復(fù)（4）（5）步。 1.2.3計算 （1）分別計算各樣品的OD值： OD0-15s、OD0-30s、OD0-45s、OD0-60s （2）取在線性范圍內(nèi)的OD值計算抑制率% 1.3體外抗氧化試驗DPPH清除實驗（1）關(guān)于DPPHDPPH是一種很穩(wěn)定的氮中心的自由基，在517nm處有一強吸收，其醇溶液呈紫色的特性。當(dāng)有氧自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可用分光光度計進行快速的定量分析。 自由基清除能力的表示：清除率越大表明抗氧化能力越強。 2步驟 取96孔板，根據(jù)以下設(shè)定加樣1-12號受試物，30min避光反應(yīng)，517nm測定吸光度值。 第一行1-12格樣品：50l受試物+150lDPPH 第二行1-12格空白：50l受試物+150l乙醇 第三行1-12格對照：50l溶劑+150lDPPH 3結(jié)論 （1）百合花提取物都對AChE具有抑制作用，其中百合花醇提物的抑制作用最強，石油醚提取物次之，水提物相對較弱，并且高濃度提取物均比低濃度提取物有更好的AChE抑制作用。 （2）百合花水提物濃度與AChE抑制率成正比，醇提物高濃度比低濃度對AChE抑制率稍高，而石油醚提取物高濃度與低濃度的AChE抑制作用相差不大。且三種提取物對AChE的抑制率均比陽性藥加蘭他敏要高。 （3）三種百合花提取物對DPPH均有一定的清除效果，清除率由高到低依次是醇提物、水提物、石油醚提取物；并且高濃度提取物均比低濃度有更高的清除率；我們還發(fā)現(xiàn)，還原VC的清除率比較強，但是100mg/ml百合花醇提物的清除率甚至超過了0.8mg/ml的陽性藥還原VC。 4討論 百合花提取物不僅對AChE有抑制作用，而且抗氧化作用比還原性VC還強。 百合花的醇提物比水提物和石油醚提取物抗氧化和抗AChE的效果都要好，可見不同的提取溶劑會對百合花的抗AChE與抗氧化作用產(chǎn)生影響。因此百合花的藥理作用可為老年癡呆提供新的治療線索。今后可以著重研究百合花醇提物中真正起作用的化學(xué)物質(zhì)和其作用靶點以及藥物構(gòu)效關(guān)系，藥代動力學(xué)和藥理毒理學(xué)，判斷百合花醇提物能否開發(fā)成新一代抗老年癡呆藥物，從而為廣大患者帶來福音，減輕病人與家屬的痛苦。 （通訊作者：丁虹） 參考文獻 1吳海燕.周金云.治療阿爾茨海默病藥物的研究進展J.中國新藥雜志,(xx)13(7):583-586. 2張均田.老年癡呆的發(fā)病機制及防治藥物J.醫(yī)藥