新冠試劑盒使用方法

新冠試劑盒使用方法新冠病毒檢測(cè)是目前防控疫情的重要措施之一。病毒核酸檢測(cè)試劑盒是檢測(cè)新冠病毒（SARS-CoV-2）的常規(guī)檢測(cè)方法之一。以下將詳細(xì)介紹新冠病毒核酸檢測(cè)試劑盒的使用方法。一、試劑盒的準(zhǔn)備1、檢測(cè)過(guò)程必須在滿足病原學(xué)實(shí)驗(yàn)條件和質(zhì)量管理要求的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。2、試劑盒應(yīng)在啟封前存放在干燥、陰涼處，避免高溫、直射陽(yáng)光，防止受潮、霉變、交叉污染等。3、打開試劑盒前，準(zhǔn)備必要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，如離心機(jī)、移液器、PCR儀、電泳儀等。4、啟封前應(yīng)檢查試劑盒是否完好，是否過(guò)期。如有問(wèn)題應(yīng)及時(shí)聯(lián)系生產(chǎn)廠家。二、病毒核酸提取1、樣本采集（1）標(biāo)本類型病毒核酸檢測(cè)需要采集呼吸道（鼻、咽）或肺泡灌洗液、支氣管肺泡灌洗液、氣管刷樣本等臨床標(biāo)本。（2）采集方法a.鼻咽拭子或組織樣本采集受試者用衛(wèi)生紙或濕巾擦去鼻翼分泌物、口腔中的食物殘?jiān)?，保持口腔清潔后，采?9mmx150mm的單用無(wú)菌鼻咽拭子。步驟1：受試者頭后仰，插入鼻咽拭子，一直插到鼻后庭，轉(zhuǎn)動(dòng)4~5次，停留15-30秒，在收縮肌的作用下慢慢提出鼻咽拭子。步驟2：將拭子放入約3ml-5ml的懸液用勻液管中樣品收集管中，輕輕旋轉(zhuǎn)拭子10幾次，在拭子上反復(fù)擠壓，最后將拭子扔掉。b.肺泡灌洗液和支氣管灌洗液采集：肺泡灌洗液和支氣管灌洗液是從患者口腔進(jìn)人支氣管，直達(dá)肺泡的液體，是比較理想的標(biāo)本來(lái)源，在病毒核酸檢測(cè)中具有更高的靈敏度。c.氣管刷樣本采集：氣管刷是通過(guò)呼吸道進(jìn)入氣管及支氣管，使用刷取技術(shù)對(duì)其進(jìn)行采集的樣本，作為呼吸道病原體檢測(cè)的一種重要方法。鈍頭也可用于采集這類樣品。此方法適用于接近1歲以上年齡的兒童及成人。2、核酸提取核酸提取是將病毒核酸從樣本中分離出來(lái)的過(guò)程。提取過(guò)程中避免交叉污染和失去模板DNA等問(wèn)題。核酸提取方法有多種，本文不作詳細(xì)介紹。三、PCR反應(yīng)1、PCR反應(yīng)體系正常量測(cè)量，每個(gè)PCR反應(yīng)體系為20-25μl，并且每個(gè)PCR試管必須加上反應(yīng)前2.5μl的熱激酶，堆積的PCR體系如下：PCR反應(yīng)體系分離如下：PCR擴(kuò)增酶20μM10XPCRBuffer2.5μlProbe1μlMgCl21.5μlProbe制成的稀釋劑（所有合成肺炎冠狀病毒的探針都應(yīng)在同一試管中配制）0.5μl超純水xμl（樣品和控制PCR使用的Δλ值為9μl）2、擴(kuò)增步驟步驟1：連接PCR儀，使用軟件設(shè)置反應(yīng)體系，預(yù)熱和全聚合過(guò)程，并根據(jù)核酸提取質(zhì)量設(shè)定稀釋倍數(shù)。步驟2：將擴(kuò)增管中的超純水（或稀釋液）和樣品混合，充分混合，放入PCR儀中，開始反應(yīng)。步驟3：設(shè)置PCR反應(yīng)程序。步驟4：反應(yīng)結(jié)束后，離心樣品，取出管內(nèi)溶液。四、檢測(cè)結(jié)果解讀病毒核酸檢測(cè)結(jié)果的解讀應(yīng)結(jié)合臨床癥狀和流行病學(xué)史等因素綜合判斷。對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果的樣本，應(yīng)及時(shí)告知患者并報(bào)告到相關(guān)部門，開展相應(yīng)的隔離和檢測(cè)工作。以上是新冠病毒核酸檢測(cè)試劑盒的基本使用方法，需注意的是，實(shí)驗(yàn)前必須充分了解試劑盒的使用說(shuō)明和生物