紫外分光光度法

第二章紫外-可見吸收光譜法第一節(jié)概述第二節(jié)朗伯-比爾定律第三節(jié)

紫外吸收光譜基本原理第四節(jié)紫外可見分光光度計(jì)第五節(jié)紫外吸收光譜的應(yīng)用

2024/11/23第一節(jié)概述

利用被測物質(zhì)的分子對(duì)可見-紫外光具有選擇性吸收的特性而建立的分析方法。一、可見-紫外吸光光度法的特點(diǎn)（1）具有較高的靈敏度。（2）有一定的準(zhǔn)確度，該方法相對(duì)誤差為2%-5%，可滿足對(duì)微量組分測定的要求。（3）操作簡便、快速、選擇性好、儀器設(shè)備簡單。（4）應(yīng)用廣泛2024/11/23單色光：只具有一種波長的光?；旌瞎猓河蓛煞N以上波長組成的光，如白光。二、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收白光青藍(lán)青綠黃橙紅紫藍(lán)1、光的互補(bǔ)性與物質(zhì)的顏色

物質(zhì)的顏色是由于物質(zhì)對(duì)不同波長的光具有選擇性的吸收作用而產(chǎn)生的，物質(zhì)的顏色由透過光的波長決定。

如果兩種適當(dāng)顏色的光按一定的強(qiáng)度比例混合可以得白光，這兩種光就叫互為補(bǔ)色光。物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色和吸收的光顏色之間是互補(bǔ)關(guān)系。2024/11/232、吸收光譜或吸收曲線

吸收曲線：測定某種物質(zhì)對(duì)不同波長單色光的吸收程度，以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖。吸收光譜特征：定性依據(jù)吸收峰→λmax

吸收谷→λmin

肩峰→λsh

末端吸收→飽和σ-σ躍遷產(chǎn)生A末端吸收最強(qiáng)峰肩峰峰谷次強(qiáng)峰

max

sh

min

2024/11/23第二節(jié)

朗伯-比爾定律

ThetheoryofLambert-BeerLamber-Beer定律偏離Beer定律的因素透光率的測量誤差測量條件的選擇2024/11/23數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=-lgT=-lgIt/Io=ECLA：吸光度T：透光率

E:吸光系數(shù)；C：溶液濃度；L：液層厚度描述物質(zhì)對(duì)單色光吸收強(qiáng)弱與液層厚度和待測物濃度的關(guān)系Lamber

定律：A∝lBeer定律：A∝C一、朗伯-比爾定律（吸收光譜法基本定律）2024/11/23續(xù)前Lamber-Beer定律的適用條件（前提）

入射光為單色光溶液是稀溶液該定律適用于固體、液體和氣體樣品在同一波長下，各組分吸光度具有加和性應(yīng)用：多組分測定2024/11/23續(xù)前吸光系數(shù)兩種表示法：

1）摩爾吸光系數(shù)ε：在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm時(shí)的吸光度

2）E1%1cm百分含量吸光系數(shù)/比吸光系數(shù)：在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm時(shí)的吸光度

3）兩者關(guān)系ε=10ME1%1cm吸光系數(shù)的物理意義：單位濃度、單位厚度的吸光度3、吸光系數(shù)2024/11/23二、偏離Beer定律的因素依據(jù)Beer定律，A與C關(guān)系應(yīng)為經(jīng)過原點(diǎn)的直線偏離Beer定律的主要因素表現(xiàn)為以下兩個(gè)方面（一）光學(xué)因素（二）化學(xué)因素2024/11/23（一）光學(xué)因素

1．非單色光的影響：

Beer定律應(yīng)用的重要前提——入射光為單色光2．雜散光的影響：

3．反射光和散色光的影響：4．非平行光的影響：（二）化學(xué)因素Beer定律適用的另一個(gè)前提：稀溶液濃度過高會(huì)使C與A關(guān)系偏離定律1）離解作用：2）酸效應(yīng)：3）溶劑作用：2024/11/23三、透光率的測量誤差——ΔT影響測定結(jié)果的相對(duì)誤差兩個(gè)因素：T和ΔTΔT影響因素：儀器噪音

1）暗噪音：與檢測器和放大電路不確切性有關(guān)

2）訊號(hào)噪音：與光訊號(hào)有關(guān)四、吸光度測量的條件選擇：1）測量波長的選擇：λmax2）吸光度讀數(shù)范圍的選擇：3）參比溶液(空白溶液)的選擇：A=0.2~0.72024/11/23五、顯色反應(yīng)及其影響因素顯色反應(yīng)：將被測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的化學(xué)反應(yīng)顯色劑：能與被測組分反應(yīng)使之生成有色化合物的試劑1、對(duì)顯色反應(yīng)的要求2、影響顯色反應(yīng)的因素2024/11/23第三節(jié)紫外吸收光譜分析基本原理

principlesofUV一、紫外吸收光譜的產(chǎn)生

formationofUV二、有機(jī)物紫外吸收光譜ultravioletspectrometryoforganiccompounds2024/11/23一、紫外吸收光譜的產(chǎn)生

formationofUV（一）紫外光與紫外光譜紫外吸收光譜：分子價(jià)電子能級(jí)躍遷。波長范圍：4-800nm.遠(yuǎn)紫外光區(qū):

4-200nm

近紫外光區(qū):

200-400nm可見光區(qū):400-800nm250300350400nm1234eλ2024/11/23分子吸收光譜的產(chǎn)生——由能級(jí)間的躍遷引起物質(zhì)分子內(nèi)部三種運(yùn)動(dòng)形式：（1）電子相對(duì)于原子核的運(yùn)動(dòng)；（2）原子核在其平衡位置附近的相對(duì)振動(dòng)；（3）分子本身繞其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)。分子具有三種不同能級(jí)：電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)分子的內(nèi)能：電子能量Ee、振動(dòng)能量Ev

、轉(zhuǎn)動(dòng)能量Er即:E＝Ee+Ev+Er

ΔΕe>ΔΕv>ΔΕr

能級(jí)躍遷：電子受激發(fā)，從低能級(jí)轉(zhuǎn)移到高能級(jí)的過程。2024/11/23價(jià)電子：σ電子→飽和的σ鍵

π電子不飽和的π鍵

n電子（二）有機(jī)物吸收光譜與電子躍遷

ultravioletspectrometryoforganiccompounds基態(tài)與激發(fā)態(tài)：電子吸收能量，由基態(tài)→激發(fā)態(tài)成鍵軌道與反鍵軌道：σ<π<n<π*<σ*2024/11/23主要有四種躍遷類型躍遷所需能量為：

σ→σ*

n→σ*

π→π*

n→π*分子中電子的能級(jí)和躍遷

2024/11/231

σ→σ＊躍遷

所需能量最大；σ電子只有吸收遠(yuǎn)紫外光的能量才能發(fā)生躍遷；

飽和烷烴的分子吸收光譜出現(xiàn)在遠(yuǎn)紫外區(qū)；

吸收波長λ<200nm；例：甲烷的λmax為125nm,

乙烷λmax為135nm。只能被真空紫外分光光度計(jì)檢測到；作為溶劑使用；sp*s*RKE,Bnp

E2024/11/232

n→σ＊躍遷

所需能量較大。吸收波長為150～250nm，大部分在遠(yuǎn)紫外區(qū)，近紫外區(qū)仍不易觀察到。

含非鍵電子的飽和烴衍生物(含N、O、S和鹵素等雜原子)均呈現(xiàn)n→σ*躍遷。sp*s*RKE,Bnp

E2024/11/233.π→π*躍遷：不飽和基團(tuán)（—C＝C—，—C＝O）

E較小，λ~200nm體系共軛，E更小，λ更大乙烯π→π*躍遷的λmax為162nm，εmax為:1×104L·mol-1·cm－1。165nm217nm

?

?

?

sp*s*RKE,Bnp

E2024/11/234.n→π*躍遷：含雜原子不飽和基團(tuán)（—C≡N，C＝O）E最小，λ200~400nm（近紫外區(qū)）

n

165nm

n

Y=H,Rn→*

180-190nm

→

*

150-160nm

n→*

275-295nm2024/11/235、無機(jī)化合物的電子躍遷d—d配位場躍遷—按晶體場理論，金屬離子與水或其它配體生成配合物時(shí)，原來能量相同的d軌道會(huì)分裂成幾組能量不等的d軌道，d軌道之間的能量差稱為分裂能，配合物吸收輻射能，發(fā)生d—d躍遷，吸收光的波長與分裂能的大小反相關(guān)。電荷遷移躍遷——指配合物中配位體與金屬離子之間，一個(gè)電子由一方的一個(gè)軌道躍遷到另一方相關(guān)的軌道上。——產(chǎn)生電荷遷移躍遷的必要條件：一組分是電子給予體，另一組分是電子接收體。2024/11/23續(xù)前紫外光譜電子躍遷類型：n—π*躍遷

π—π*躍遷飽和化合物無紫外吸收電子躍遷類型與分子結(jié)構(gòu)及存在基團(tuán)有密切聯(lián)系根據(jù)分子結(jié)構(gòu)→推測可能產(chǎn)生的電子躍遷類型；根據(jù)吸收譜帶波長和電子躍遷類型→推測分子中可能存在的基團(tuán)（分子結(jié)構(gòu)鑒定）2024/11/23續(xù)前1．生色團(tuán)（發(fā)色團(tuán)）：能產(chǎn)生n→π*躍遷和π→π*躍遷，可吸收紫外-可見光的基團(tuán)。具有不飽和鍵和未成對(duì)電子的基團(tuán)；具n電子和π電子的基團(tuán)；例：C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N—注：當(dāng)出現(xiàn)幾個(gè)發(fā)色團(tuán)共軛，則幾個(gè)發(fā)色團(tuán)所產(chǎn)生的吸收帶將消失，代之出現(xiàn)新的共軛吸收帶，其波長將比單個(gè)發(fā)色團(tuán)的吸收波長長，強(qiáng)度也增強(qiáng)（三）相關(guān)的基本概念2024/11/232．助色團(tuán)：本身無紫外吸收，但可以使生色團(tuán)吸收峰加強(qiáng)同時(shí)使吸收峰長移的基團(tuán)有機(jī)物：連有雜原子的飽和基團(tuán)例：—OH，—OR，—NH—，—NR2—，—X

有機(jī)化合物的吸收譜帶常常因引入取代基或改變?nèi)軇┦棺畲笪詹ㄩLλmax和吸收強(qiáng)度發(fā)生變化:

λmax向長波方向移動(dòng)稱為紅移，向短波方向移動(dòng)稱為藍(lán)移

(或紫移)。3、紅移與藍(lán)移2024/11/23續(xù)前4．增色效應(yīng)和減色效應(yīng)增色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度增強(qiáng)的效應(yīng)減色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度減小的效應(yīng)5．強(qiáng)帶和弱帶：

εmax>104→強(qiáng)帶

εmin<102→弱帶6.預(yù)離解躍遷

如果分子中的化學(xué)鍵能低于電子激發(fā)能，分子在接受較高能量的躍遷過程中，使某些化學(xué)鍵斷裂，這種躍遷稱為預(yù)離解躍遷。不產(chǎn)生分子的吸收或發(fā)光光譜。2024/11/23（四）吸收帶類型和影響因素1．R帶：由含雜原子的不飽和基團(tuán)的n→π*躍遷產(chǎn)生C＝O；C＝N；—N＝N—E小，λmax250~400nm，εmax<100溶劑極性↑，λmax↓→藍(lán)移（短移）2．K帶：由共軛雙鍵的π→π*躍遷產(chǎn)生(—CH＝CH—)n，—CH＝C—CO—λmax>200nm，εmax>104共軛體系增長，λmax↑→紅移，εmax↑溶劑極性↑，對(duì)于—(—CH＝CH—)n—λmax不變對(duì)于—CH＝C—CO—λmax↑→紅移2024/11/23續(xù)前3．B帶：由π→π*躍遷產(chǎn)生芳香族化合物的主要特征吸收帶λmax=254nm，寬帶，具有精細(xì)結(jié)構(gòu)；εmax=200極性溶劑中，或苯環(huán)連有取代基，其精細(xì)結(jié)構(gòu)消失next4．E帶：由苯環(huán)環(huán)形共軛系統(tǒng)的π→π*躍遷產(chǎn)生芳香族化合物的特征吸收帶E1180nmεmax>104

（常觀察不到）E2200nmεmax=7000強(qiáng)吸收next苯環(huán)有發(fā)色團(tuán)取代且與苯環(huán)共軛時(shí)，E2帶與K帶合并一起紅移（長移）next2024/11/23續(xù)前5、影響吸收帶位置的因素：（1）溶劑效應(yīng)：對(duì)λmax影響：next

n-π*躍遷：溶劑極性↑，λmax↓藍(lán)移

π-π*躍遷：溶劑極性↑，λmax↑紅移對(duì)吸收光譜精細(xì)結(jié)構(gòu)影響next

溶劑極性↑，苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)消失溶劑的選擇——極性；純度高；截止波長<λmax2024/11/23選擇溶劑時(shí)注意下列幾點(diǎn)：溶劑對(duì)溶質(zhì)的溶解性好，且是惰性的。即所成溶液應(yīng)具有良好的化學(xué)和光化學(xué)穩(wěn)定性。選擇極性較小的溶劑。溶劑在樣品的吸收光譜區(qū)應(yīng)無明顯吸收。即溶劑在剪切點(diǎn)以下是透明的。剪切點(diǎn)：以水做溶劑，在1cm厚的樣品池中測得溶劑吸光度為0.1時(shí)的波長，為溶劑的剪切點(diǎn)。2024/11/23（2）pH值的影響：影響物質(zhì)存在構(gòu)型及吸收波長苯酚在酸性或中性水溶液中，有210.5nm及270nm兩個(gè)吸收帶；而在堿性溶液中，則分別紅移到235nm和287nm（3）共軛體系的存在----紅移如CH2=CH2的

-

*躍遷，

max=165~200nm；而1,3-丁二烯，

max=217nm（4）取代基：紅移或藍(lán)移取代基含孤對(duì)電子，可使分子紅移；取代基為斥電子基，如-R，-OCOR，則使分子藍(lán)移。苯環(huán)或烯烴上的H被各種取代基取代，多產(chǎn)生紅移。2024/11/23（5）立體結(jié)構(gòu)和互變結(jié)構(gòu)的影響（空間位阻）順反異構(gòu)：順式：λmax=280nm；εmax=10500反式：λmax=295.5nm；εmax=29000互變異構(gòu)：

酮式：λmax=204nm

烯醇式：λmax=243nm

2024/11/23二、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜（1）飽和烴及其取代衍生物飽和烴的最大吸收峰一般小于150nm。飽和烴的取代衍生物如鹵代烴，可產(chǎn)生n

*的躍遷。例如，CH3Cl、CH3Br和CH3I的n

*躍遷分別出現(xiàn)在173、204和258nm處。2024/11/23（2）不飽和烴及共軛烯烴產(chǎn)生*和

*兩種躍遷。在不飽和烴類分子中，當(dāng)有兩個(gè)以上的雙鍵共軛時(shí)，隨著共軛系統(tǒng)的延長，*躍遷的吸收帶將明顯向長波方向移動(dòng)，吸收強(qiáng)度也隨之增強(qiáng)。共軛烯烴的λmax的計(jì)算方法共軛二、三、四烯的λmax的計(jì)算（Woodward-Fieser規(guī)則）2024/11/23Woodward-Fieser規(guī)則2024/11/232024/11/23共軛多烯λmax的計(jì)算（Fieser-Kuhn公式）λmax=114+5M+n（48-1.7n）-16.5Rendo-10Rexoεmax=1.74×104nM：烷基數(shù)n：共軛雙鍵數(shù)Rendo：具有環(huán)內(nèi)雙鍵的環(huán)數(shù)Rexo：具有環(huán)外雙鍵的環(huán)數(shù)例：全反式β-胡蘿卜素的Λmax和εmax的計(jì)算Λmax=114+5×10+11（48-1.7×11）-16.5×2=453.3nm（452）εmax=1.74×104×11=19.1×104（15.2×104）2024/11/23α、β不飽和醛、酮、酸、酯的λmax的計(jì)算方法基值：α、β不飽和醛207α、β不飽和酮215α、β不飽和六元環(huán)酮215α、β不飽和五元環(huán)酮202α、β不飽和酸或酯193取代基的取代位置：α、β、γ、δ

烷基：10、12、18、18環(huán)外雙鍵不包括C=O例：六元不飽和環(huán)酮基值215

共軛雙鍵（30*2）60

同環(huán)二烯39

β-位烷基取代12

γ-位及更遠(yuǎn)烷基取代54

環(huán)外雙鍵5

計(jì)算值385

實(shí)測值3882024/11/23人們對(duì)α—莎草酮提出兩種結(jié)構(gòu)式，實(shí)驗(yàn)值λmax=252nm，問是下面那一種結(jié)構(gòu)式?基本值215nm

位烷基取代

+12nm計(jì)算值λmax227nm

基本值215nmα位烷基取代

+10nm

位烷基取代

+24nm

環(huán)外雙鍵+5nm計(jì)算值λmax254nm

αα

2024/11/23i.單取代苯苯環(huán)上有一元取代基時(shí)，一般引起B(yǎng)帶的精細(xì)結(jié)構(gòu)消失，并且各譜帶的λmax發(fā)生紅移，εmax值通常增大。

λmax

B帶λmax

E2

苯254204

甲苯262208

苯酚271213

苯甲酸272230（4）苯及其衍生物的紫外光譜2024/11/23b

當(dāng)一個(gè)發(fā)色團(tuán)及一個(gè)助色團(tuán)相互處于（在苯環(huán)中）對(duì)位時(shí)，由于兩個(gè)取代基效應(yīng)相反，產(chǎn)生協(xié)同作用，λmax產(chǎn)生顯著的向紅位移。效應(yīng)相反的兩個(gè)取代基若相互處于間位或鄰位時(shí)，則二取代物的光譜與各單取代物的區(qū)別是很小的。

260nm

280nm

380nm

280nm

282.5nmii二取代苯a對(duì)于二甲苯來說，取代基的位置不同，紅移和吸收增強(qiáng)效應(yīng)不同，通常順序?yàn)椋?/p>

對(duì)位＞間位＞鄰位。2024/11/23

c當(dāng)兩個(gè)發(fā)色基或助色基取代時(shí)，由于效應(yīng)相同，兩個(gè)基團(tuán)不能協(xié)同，則吸收峰往往不超過單取代時(shí)的波長，且鄰、間、對(duì)三個(gè)異構(gòu)體的波長也相近。例如：

230nm260nm258nm

255nm255nm

2024/11/23苯的多取代衍生物K帶的λmax的計(jì)算（Scott規(guī)則）

基值：

-CO-Alkyl246

-CO-環(huán)246

-CHO250

-COO-230

-CN224

iii多取代苯2024/11/232024/11/23推測官能團(tuán)

200～280nm無吸收不含不飽和鍵，不含苯環(huán)，可能是飽和化合物

210～250nm強(qiáng)吸收π—π*，2個(gè)共軛單位

260～350nm強(qiáng)吸收π—π*，3—5個(gè)共軛單位

270～350nm弱吸收n—π*，無強(qiáng)吸收，孤立含雜原子的雙鍵C=O,-NO2,-N=N-260nm（230～270）中吸收π—π*，有苯環(huán)2024/11/23第四節(jié)紫外—可見分光光度計(jì)

ultravioletspectrometer基本組成

generalprocess分光光度計(jì)的類型

typesofspectrometer

2024/11/23（一）基本組成generalprocess光源單色器樣品室檢測器顯示分為三個(gè)部分：光學(xué)系統(tǒng)、電學(xué)系統(tǒng)及機(jī)械系統(tǒng)

1.光源可見光區(qū)：鎢燈作為光源。紫外區(qū)：氫、氘燈。2024/11/23

2.單色器

將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長單色光的光學(xué)系統(tǒng)。①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；

④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。2024/11/23續(xù)前3．吸收池：玻璃——僅適用于可見光區(qū)石英——適用于紫外和可見光區(qū)要求：匹配性（對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致）4．檢測器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置5．記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示系統(tǒng)光電池光電管光電倍增管二極管陣列檢測器2024/11/23（二）分光光度計(jì)的類型typesofspectrometer

2024/11/23（三）分光光度計(jì)的校正校正內(nèi)容：波長校正和吸光度校正。校正方法：校正波長鈥玻璃紫外和可見光區(qū)分光鐠銣玻璃可見光區(qū)吸光度校正：K2CrO4標(biāo)準(zhǔn)溶液2024/11/23一、定性分析qualitativeanalysis定性鑒別的依據(jù)→吸收光譜的特征吸收光譜的形狀吸收峰的數(shù)目吸收峰的位置（波長）吸收峰的強(qiáng)度相應(yīng)的吸光系數(shù)第五節(jié)紫外-可見吸收光譜的應(yīng)用

applicationsofUV2024/11/23續(xù)前1、對(duì)比法同一測定條件下，與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對(duì)照比較（1）對(duì)比吸收光譜的一致性2024/11/23續(xù)前（2）對(duì)比吸收光譜的特征值2024/11/23續(xù)前（3）對(duì)比吸光度或吸光系數(shù)的比值：例：2024/11/23續(xù)前2、純度檢查和雜質(zhì)限量測定（1）純度檢查（雜質(zhì)檢查）a峰位不重疊：

找λ→使主成分無吸收，雜質(zhì)有吸收→直接考察雜質(zhì)含量b峰位重疊：

主成分強(qiáng)吸收，雜質(zhì)無吸收/弱吸收→與純品比較，E↓

雜質(zhì)強(qiáng)吸收>>主成分吸收→與純品比較，E↑，光譜變形2024/11/23續(xù)前(2)雜質(zhì)限量的測定：例：腎上腺素中微量雜質(zhì)——腎上腺酮含量計(jì)算

2mg/mL-0.05mol/L的HCL溶液，λ310nm下測定規(guī)定A310≤0.05即符合要求的雜質(zhì)限量≤0.06%2024/11/23（一）單組分定量分析吸光系數(shù)法標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)照法：外標(biāo)一點(diǎn)法二、定量分析quantitativeanalysis2024/11/23續(xù)前1．吸光系數(shù)法（絕對(duì)法）解：例：維生素B12

的水溶液在361nm處的百分吸光系數(shù)為207，用1cm比色池測得某維生素B12溶液的吸光度是0.414，求該溶液的濃度2024/11/23練習(xí)例：精密稱取B12樣品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm處測定吸光度為0.507，求B12的百分含量？（維生素B12

的水溶液在361nm處的百分吸光系數(shù)為207）解：2024/11/23續(xù)前2．標(biāo)準(zhǔn)曲線法2024/11/23示例

蘆丁含量測定0.710mg/25mL2024/11/23續(xù)前3．對(duì)照法（比較法）：外標(biāo)一點(diǎn)法注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的稀釋倍數(shù)相同時(shí)2024/11/23練習(xí)例：維生素B12的含量測定精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀釋至10.00mL；另配制對(duì)照液，精密稱定對(duì)照品25.00mg，加水稀釋至1000mL。在361nm處，用1cm吸收池，分別測定吸光度為0.508和0.518，求B12注射液注射液的濃度以及標(biāo)示量的百分含量（該B12注射液的標(biāo)示量為100μg/mL）解：對(duì)照法2024/11/23練習(xí)解法二：吸光系數(shù)法

2024/11/23續(xù)前（二）多組分的定量方法a．兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾）

兩組分在各自λmax下不重疊→分別按單組分定量2024/11/23續(xù)前b．兩組分吸收光譜部分重疊

λ1→測A1→b組分不干擾→可按單組分定量測Caλ2→測A2→a組分干擾→不能按單組分定量測Ca

2024/11/23續(xù)前c兩組分吸收光譜完全重疊——混合樣品測定解線性方程組法等吸收雙波長消去法系數(shù)倍率法示差法2024/11/23解線性方程組法步驟：2024/11/23

等吸收雙波長法步驟：

消除a的影響測b2024/11/23續(xù)前消去b的影響測a注：須滿足兩個(gè)基本條件選定的兩個(gè)波長下干擾組分具有等吸收點(diǎn)選定的兩個(gè)波長下待測物的吸光度差值應(yīng)足夠大2024/11/23系數(shù)倍率法前提：干擾組分b不成峰形無等吸收點(diǎn)2024/11/23續(xù)前步驟：b曲線上任找一點(diǎn)→λ1

另一點(diǎn)→λ2優(yōu)點(diǎn)：同時(shí)將待測組分和干擾組分放大信號(hào)K倍，提高了待測組分測定靈敏度abλ1

λ22024/11/231.推斷官能團(tuán)如果一個(gè)化合物在紫外區(qū)有強(qiáng)的吸收，表明它可能存在共軛體系，吸收波長越長，共軛體系越大。2.判斷異構(gòu)體不同的異構(gòu)體可能具有不同的紫外光譜，以此來判斷屬哪個(gè)異構(gòu)體。3.推斷分子結(jié)構(gòu)

(可結(jié)合Woodward規(guī)則的計(jì)算結(jié)果)三、有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)輔助解析

structuredeterminationoforganiccompounds2024/11/23

1.可獲得的結(jié)構(gòu)信息（1）200-400nm無吸收峰。飽和化合物，單烯。（2）

270-350nm有吸收峰（ε=10-100）醛酮n→π*躍遷產(chǎn)生的R

帶。（3）

250-300nm有中等強(qiáng)度的吸收峰（ε=200-2000），芳環(huán)的特征吸收（具有精細(xì)解構(gòu)的B帶）。（4）

200-250nm有強(qiáng)吸收峰（ε

104），表明含有一個(gè)共軛體系（K）帶。共軛二烯：K帶（

230nm）；

不飽和醛酮：K帶

230nm，R帶

310-330nm260nm,300nm,330nm有強(qiáng)吸收峰，3,4,5個(gè)雙鍵的共軛體系。

2024/11/232.光譜解析注意事項(xiàng)(1)確認(rèn)

max，并算出㏒ε，初步估計(jì)屬于何種吸收帶；(2)觀察主要吸收帶的范圍，判斷屬于何種共軛體系；(3)乙?；灰艬帶：262nm(ε302)274nm(ε2040)261nm(ε300)(4)pH值的影響加NaOH紅移→酚類化合物，烯醇。加HCl蘭移→苯胺類化合物。2024/11/233.分子不飽和度的計(jì)算定義：不飽和度是指分子結(jié)構(gòu)中達(dá)到飽和所缺一價(jià)元素的“對(duì)”數(shù)。如：乙烯變成飽和烷烴需要兩個(gè)氫原子，不飽和度為1。

計(jì)算：若分子中僅含一，二，三，四價(jià)元素(H，O，N，C)，則可按下式進(jìn)行不飽和度的計(jì)算：