分光光度法在藥品中應(yīng)用

紫外-可見(jiàn)分光光度法在

藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用1精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)紫外－可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述2精選2021版課件一.概述：分光光度法是通過(guò)測(cè)定物質(zhì)在某些特定波長(zhǎng)處或一定范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法。紫外-可見(jiàn)分光光度法具有操作簡(jiǎn)便快速、專屬性和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。因此在藥品的分析檢驗(yàn)中被廣泛采用。在各國(guó)藥典中藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢查和含量測(cè)定等各個(gè)項(xiàng)目中都能見(jiàn)到紫外-可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用實(shí)例。3精選2021版課件一.概述：吸收光譜：發(fā)射連續(xù)光譜的光源（如氘燈和鎢絲燈）發(fā)出的光通過(guò)透明物質(zhì)（固體、液體或氣體）后，一些波長(zhǎng)的單色光成分被該物質(zhì)選擇吸收，在原來(lái)的連續(xù)光譜上出現(xiàn)若干條暗線或暗帶，這種光譜叫做吸收光譜。4精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)紫外－可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述5精選2021版課件二.分光光度法的基本原理在紫外和可見(jiàn)光區(qū)，靈敏度和精密度較高，一般每1ml溶液中含有幾微克（

g）的物質(zhì)即可測(cè)定，誤差約為1-2%，在此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對(duì)光的吸收主要系分子中電子的能級(jí)躍遷所致，同時(shí)伴有分子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的變化，電子吸收光譜一般比較平緩，選擇性不如紅外光區(qū)，故紫外-可見(jiàn)光區(qū)主要用于定量分析以及作為物理常數(shù)的測(cè)定。6精選2021版課件紅外光區(qū)的靈敏度和精密度較低，一般需要數(shù)百微克（

g）的供試品進(jìn)行測(cè)定，此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對(duì)光的吸收系由分子中振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷引起，紅外光譜的特征性很強(qiáng)，特別是在7-15

m（稱為“指紋區(qū)”），吸收峰很多，而且尖銳。除光學(xué)異構(gòu)體外，不會(huì)遇到兩種不同的化學(xué)物質(zhì)完全相同的紅外吸收光譜，故紅外區(qū)主要用于鑒別和分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。7精選2021版課件透光率（T）：?jiǎn)紊馔ㄟ^(guò)一物質(zhì)的溶液時(shí)，透過(guò)光的強(qiáng)度（I）與入射光的強(qiáng)度（I0）之比。即：T=I/I0。吸光度（A）：透光率的負(fù)對(duì)數(shù)值.即:A=log1/T=-logT比耳-郎伯定律（Beer-Lambert’sLaw）：吸光度（A）與溶液的濃度（C）和光路長(zhǎng)（L）是成正比例的。即：A=ECL8精選2021版課件

比耳-郎伯定律適用范圍：1.溶液的濃度不能過(guò)高或過(guò)低，使測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差最小的最佳透射率為T=37%左右。2.所用溶劑不得與測(cè)定物質(zhì)有分子間締合，生成復(fù)合物、異構(gòu)化或出現(xiàn)酸堿平衡。9精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)的使用紫外－可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述10精選2021版課件三.紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用1.基本構(gòu)造：穩(wěn)壓電源光源波長(zhǎng)選擇裝置樣品池檢測(cè)器記錄裝置11精選2021版課件2.儀器的校正和檢定（1）波長(zhǎng)的校正：由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、 360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、 536.2nm與637.5nm的波長(zhǎng)處有尖銳的吸收

峰，可作為波長(zhǎng)校正用。12精選2021版課件

取在120

C干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算其吸收系數(shù)。（2）吸光度的準(zhǔn)確度：波長(zhǎng)（nm）235（最?。?57（最大）313（最?。?50（最大）吸收系數(shù)（E1%1cm）124.5144.048.6106.6許可范圍123.0-126.0142.8-146.247.0-50.3105.5-108.513精選2021版課件（3）雜散光的檢查：

按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。試劑濃度%（g/ml）波長(zhǎng)（nm）透光率（%）碘化鈉1.00220<0.8亞硝酸鈉5.00340<0.814精選2021版課件3.紫外分光光度法對(duì)溶劑的要求

用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白，測(cè)定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)滿足以下要求：波長(zhǎng) 吸光度要求220nm-240nm 不得超過(guò)0.40241nm-250nm 不得超過(guò)0.20251nm-300nm 不得超過(guò)0.10300nm以上不得超過(guò)0.0515精選2021版課件4.紫外分光光度法測(cè)定法測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)

2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確。應(yīng)以吸光度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸光度會(huì)偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸光度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。16精選2021版課件1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)的使用紫外－可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用content概述17精選2021版課件四.紫外-可見(jiàn)分光光度法

在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用紫外-可見(jiàn)分光光度法的項(xiàng)目有吸收系數(shù)、鑒別、顏色檢查、純度檢查、溶出度、含量均勻度檢查和含量測(cè)定等等。18精選2021版課件1.吸收系數(shù)：

藥品的吸收系數(shù)是藥品的理化特性常數(shù)，可作為藥品生產(chǎn)過(guò)程中精制純化的一種指標(biāo)。對(duì)紫外區(qū)一定波長(zhǎng)的光有特征吸收的藥物進(jìn)行精制時(shí)，應(yīng)進(jìn)行到產(chǎn)品在其特定波長(zhǎng)測(cè)定吸收系數(shù)達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的最大值時(shí)為止，因此吸收系數(shù)同其它物理常數(shù)一樣，也可作為判斷藥品純度的依據(jù)。19精選2021版課件2.鑒別：藥物對(duì)光輻射的吸收特點(diǎn)（即其吸收光譜）可與其它化學(xué)的或物理的方法配合作為鑒別的一種手段，即繪制出藥物的吸收光譜曲線與標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜互相核對(duì)。對(duì)于具有兩個(gè)以上最大吸收的藥物可以進(jìn)一步簡(jiǎn)化操作，無(wú)需費(fèi)時(shí)作吸收光譜曲線，只要測(cè)出各最大吸收波長(zhǎng)處的吸收度，求出這些吸收度的比值，測(cè)出它們相對(duì)位置的比值即可。20精選2021版課件維生素B12的鑒別規(guī)定每1ml中含維生素B1225

g的水溶液，照分光光度法測(cè)定，在278、361與550nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。

A361nm/A278nm應(yīng)為1.70-1.88。

A361nm/A550nm應(yīng)為3.15-3.45。21精選2021版課件22精選2021版課件3.純度檢查：若一種化合物對(duì)紫外光和可見(jiàn)光區(qū)的某一波段呈光學(xué)透明（即不吸收或幾乎不吸收），而不純雜質(zhì)有吸收時(shí)，則該物質(zhì)的生產(chǎn)精制應(yīng)當(dāng)進(jìn)行到規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)降到最低時(shí)為止。有些藥物就以此作為雜質(zhì)限度檢查的依據(jù)。此外，有些藥物的雜質(zhì)是通過(guò)比色法與雜質(zhì)對(duì)照品比較進(jìn)行控制的。23精選2021版課件檢查腎上腺素中的酮體：取腎上腺素，加0.1mol/L鹽酸溶液，制成每1ml中含2mg的溶液，照分光光度法，在310nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得過(guò)0.05。24精選2021版課件25精選2021版課件4.含量測(cè)定：藥典中含量測(cè)定方法可分為：（1）對(duì)照品比較法（2）吸收系數(shù)法（3）比色法26精選2021版課件（1）對(duì)照品比較法：應(yīng)用范圍：?jiǎn)我怀煞炙巹┑臏y(cè)定。混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測(cè)組分的測(cè)定波長(zhǎng)沒(méi)有或幾乎沒(méi)有吸收27精選2021版課件

測(cè)定要求分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液所含對(duì)照品的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)組分標(biāo)示量的

10%以內(nèi)。所用溶劑、其它試劑、操作方法和條件都應(yīng)保持一致。28精選2021版課件計(jì)算公式：Cs=Cr*As/Ar

Cs：供試品溶液的濃度

As：供試品溶液的吸光度

Cr：對(duì)照品溶液的濃度

Ar：對(duì)照品溶液的吸光度29精選2021版課件（2）吸收系數(shù)法：應(yīng)用范圍：?jiǎn)我怀煞炙巹┑臏y(cè)定?；旌衔锘驈?fù)方制劑，但其它成分在被測(cè)組分的測(cè)定波長(zhǎng)沒(méi)有或幾乎沒(méi)有吸收30精選2021版課件測(cè)定要求：通常為測(cè)定最大吸收峰波長(zhǎng)處的吸光度供試品溶液在測(cè)定波長(zhǎng)處濃度與吸光度嚴(yán)格遵循比耳-郎伯定律，具有良好的線性關(guān)系。測(cè)定條件和操作應(yīng)與測(cè)定吸收系數(shù)時(shí)完全一致。吸收系數(shù)是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別在經(jīng)過(guò)校正的不同型號(hào)分光光度計(jì)上進(jìn)行多次測(cè)定求得的平均值。特別注意儀器的校正和檢定31精選2021版課件計(jì)算公式：

A=ECL以《中國(guó)藥典》2000年版氯霉素含量測(cè)定為例:精密稱取氯霉素0.1009g，置100ml量瓶中，加乙醇10ml振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，在278nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0.596，按氯霉素(C11H12Cl2N2O5)吸收系數(shù)(E1%1cm)為298計(jì)算氯霉素含量。已知：A=0.596E=298L=1則：

C=A/(E*L)=0.596/(298*1)%=0.002%氯霉素含量=0.002%*100*100/(0.1009*2)=99.1%32精選2021版課件（3）比色法供試品本身在紫外－可見(jiàn)光區(qū)沒(méi)有強(qiáng)吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收，但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后測(cè)定33精選2021版