抗獨特型抗體開發(fā)技術(shù)及重難點問答解析

義翹神州·在線講座一一《抗獨特型抗體開發(fā)技術(shù)及重難點解析》答疑環(huán)節(jié)匯總非常感謝大家對北京義翹神州在線講座的大力支持，本次講座已圓滿結(jié)束，我們對直播過程中答疑環(huán)節(jié)大家的問題以及老師的解答進行整理如下。如果有需要補充的，有任何建議或想聽到其他更多相關(guān)主題的講座，歡迎來信和我們交流，我們會根據(jù)您的寶貴意見不斷完善，以后給大家?guī)砀喔实脑诰€講座！問題1：老師您好，鼠源和兔源抗獨特型抗體在性能上有什么明顯區(qū)別嗎？答：抗獨特型抗體的鼠源單抗和兔源多抗相比，鼠單抗針對的表位單—，特異性更好、批次間穩(wěn)定性也更好；兔多抗特異性和穩(wěn)定性都不及鼠單抗，但由于多抗是直接由抗血清純化獲得，所以更能反映血液中抗體的真實情況。鼠源單抗和兔源單抗相比，兔單抗在親和力方面可能會更有優(yōu)勢。當然，這個優(yōu)勢是相對于這兩類抗體的整體狀況而言，并不是所有兔單親和力都會高千同靶點的鼠單抗。問題2:用于PK檢測的抗獨特型抗體如何選擇？什么情況下用中和活性的，什么情況下用非中和活性的。跟靶標在血液中是否游離有關(guān)？答：PK檢測中選擇哪種類型的anti-ID抗體，由我們的檢測目的決定。中和抗體因為只能和游離形式的抗體藥物結(jié)合，所以常用在游離抗體藥的檢測中；而非中和抗體因為和抗體藥的結(jié)合不受其結(jié)合形式的影響，所以可以用在各種形式的總抗體藥的血樣濃度檢測中。問題3:非競爭型抗體篩選難度更高—些？答：從我們之前的篩選數(shù)據(jù)來看，是的。雖然CDR區(qū)不是全長抗體分子上的優(yōu)勢表位，但是特異性的抗原結(jié)合位點在CDR區(qū)上卻是相對優(yōu)勢的表位。由于在anti-ID抗體的篩選過程中，我們通過人lgG的交叉檢測去掉了通用型的anti-lgG抗體，所以剩余陽性抗體中，競爭型anti-ID抗體占大部分比例。問題4：麻煩問下主要應(yīng)用是什么，抗獨特性抗體？答：抗獨特型抗體目前主要用于抗體類藥物的血藥濃度檢測和抗藥抗體檢測中，同時，因為它有模擬抗原的“內(nèi)影像”作用，所以也會在自身免疫性疾病、腫瘤、感染性疾病的預(yù)防和治療中發(fā)揮作用。問題5：請問酶切—般用什么酶??？答：lgG的酶切常用的有胃蛋白酶和木瓜蛋白酶兩種，我們通常會選擇胃蛋白酶進行酶切，收獲F(ab)2段作為免疫原制備anti-ID抗體。問題6：針對納米抗體的獨特型抗體篩選有做過嗎？答：有，我們目前可以制備針對VHH、scFv等小分子抗體的anti-ID抗體。問題7:抗體的純化采用什么方式？答：抗體純化的方式有很多，常規(guī)有飽和硫酸按沉淀法、proteinA和proteinG純化法、免疫親和純化法。我們公司最常用的純化方式是proteinA純化和抗原親和純化兩種。問題8:如何有效篩選出非競爭型抗體？答：首先，在血清效價檢測中，我們可以用競爭ELISA的方法對不同動物血清中的免疫反應(yīng)進行評估，選擇競爭抑制率相對低—些的動物進行融合。接下來，在主克隆、亞克隆等篩選的不同階段，使用競爭ELISA的方法對上清進行競爭分型的檢測，有目的性的保留自己需要的抗體類型。競爭ELISA的幾種主要檢測形式課程中有提到，大家可以參考。問題9：雙特異性抗體做—個抗抗體就行嗎？答：主要還是看anti-ID抗體的使用目的。如果用在免疫原性的初篩檢測中，雙特異性抗體可以只制備多抗；如果計劃制備在PK實驗中使用的anti-ID單抗，我們理論上會收獲四種類型的anti-ID抗體，即A靶標蛋白競爭型、B靶標蛋白競爭型、A靶標蛋白非競爭型、B靶標蛋白非競爭型。當然，如果不使用單靶點抗體復核檢測的話，后兩種類型我們沒辦法區(qū)分，所以會拿到3種不同表現(xiàn)形式的抗體。具體每種類型的anti-ID抗體是否都必須保留，還是看PK實驗怎樣設(shè)計，需要根據(jù)PK檢測的具體目的來選擇合適類型的anti-ID抗體。問題10:想咨詢制備多抗該聯(lián)系誰呢？答：您可以直接聯(lián)系我們技術(shù)服務(wù)的工作人員：400-8909989;cro-service@。問題11:做受體占有試驗的競爭性和非競爭性抗體的篩選可以做嗎？答：可以的。我們可以重組表達受體蛋白，采用ELISA競爭的方法對抗藥抗體是否能與受體競爭結(jié)合來進行分型；如果受體蛋白不容易表達，也可以嘗試采用流式或細胞ELISA競爭實驗對抗藥抗體進行分型檢測。問題12:—般非競爭型抗體的比率會占到多少？篩選方法對非競爭型抗體的檢出率有影響么？答：非競爭抗體的比例因靶點和實驗的小鼠不同而不同，按照我們的經(jīng)驗，單次融合非競爭和競爭抗體的平均比例通常會在1:3到1:8,但也有可能會出現(xiàn)非競爭抗體比例高，或單次融合只拿到競爭型抗體的情況。問題13:老師好，配對檢測elisa,抗獨特型抗體是選擇兩種抗不同表位的更好，還是都可以？答：為了能夠更好的檢測到我們的目標類型抗體藥，我們還是建議選用不同表位的anti-ID抗體進行配對檢測。問題14：如何進行快速免疫？謝謝！答：關(guān)于快速免疫技術(shù)平臺數(shù)據(jù)目前暫不支持對外公開，義翹神州可以提供這—類型抗體制備的外包服務(wù)工作，大家如果有這方面的需求，可以聯(lián)系我們：400-8909989;cro-service@。問題15:您說的非競爭性抗體的識別表位也是抗體藥物的CDR區(qū)嗎？答：是的，雖然非競爭型抗體不影響目標抗體和靶標蛋白的結(jié)合，但理論上，它的結(jié)合位點還是位于CDR區(qū)附近，因為通過人lgG的交叉檢測，我們已經(jīng)人為的去掉了和CDR區(qū)之外lgG恒定序列結(jié)合的通用型抗體。問題16:請問兔多抗的檢測靈敏度通常能到多少？如果檢測雙特異性抗體這種用藥量比較低的抗體能不能滿足要求？答：Anti-ID的多抗通常用在ADA檢測中，按照現(xiàn)行法規(guī)要求，檢測體系的靈敏度需要低于lOOng/ml,目前通過兔多抗建立的檢測方法絕大部分是可以滿足這個檢測要求的。問題17:多抗純化總lgG與同型lgG吸附純化是要偶聯(lián)到beads上嗎？謝謝！答：是的，把同型lgG或總lgG偶聯(lián)在純化基質(zhì)上進行吸附純化，但常規(guī)親和純化不同的是，這—步驟的吸附操作需要收集吸附后的流穿液。問題18：老師，有用全抗進行免疫獲得中和抗體的成功案例嗎？陽性率怎么樣？答：全抗制備中和抗體的難點在于Fc的強免疫干擾，我們初篩獲得的抗體可能絕大部分是anti-Fc的無效抗體。但用全抗制備anti-ID抗體并不是不可行，只是需要付出更大的融合篩選工作量，相對來說，中和抗體有可能拿到，但非中和抗體的篩選難度會遠大于F(ab)2免疫。問題19：抗獨特型抗體是在抗體血藥濃度測定時必須用到的嗎？目前有沒有其他辦法代替？答：抗獨特型抗體的配對檢測僅是血藥濃度檢測的常用方法之—，但并不是唯—的方法，所以anti-ID抗體在抗體藥物的血藥濃度檢測中也不是必需的。除使用anti-ID抗體的檢測方法之外，我們還可以選擇其他類型的配體結(jié)合試驗來進行血藥濃度的檢測一一比如包被靶標蛋白捕獲抗體藥，然后加入通用性檢測二抗顯色；包被靶標蛋白捕獲抗體藥，再加入標記后的靶標蛋白競爭，通過競爭值高低進行血藥濃度的計算等等。我們的課程里有列舉到幾種血藥濃度的常用檢測方法，大家可以參考。北京義翹神州科技股份有限公司(SinoBiologicalInc.,股票簡稱：義翹神州）于2021年8月16日成功登陸深圳證券交易所創(chuàng)業(yè)板（股票代碼：301047)。義翹神州重點從事重組蛋白、抗體、基因、ELISA試劑盒、培養(yǎng)基等產(chǎn)品，以及重組蛋白、抗體的開發(fā)和生物分析檢測等服務(wù)。同時，義翹神州也致力于提供真正｀｀一站式＇＇技術(shù)服務(wù)推進客戶研發(fā)進程，如重組蛋白生產(chǎn)及純化服務(wù)、抗體研發(fā)及生產(chǎn)技術(shù)服務(wù)、分子生物學技術(shù)服務(wù)、免疫檢測技術(shù)服務(wù)等。未來，義