等吸收紫外光度法測定槐米提取物中的蘆丁和槲皮素

等吸收紫外光度法測定槐米提取物中的蘆丁和槲皮素

1蘆丁、槲皮素的測定蝗蟲是豆科植物的干燥花和花蕾?；泵子址Q槐花米,涼血止血,用于血熱所致的各種出血癥。尤宜于大腸火盛,溫熱郁結引起的便血、痔血等下部出血癥。本品因含有蘆丁和槲皮素等黃酮類生物活性物質,能降血壓及改善毛細血管的脆性,近年來,常用于高血壓癥的治療,是醫(yī)藥工業(yè)提取蘆丁的常用藥材。蘆丁是制備槲皮素的主要原料,具有多方面的生理活性,有保持及恢復毛細血管的正常彈性,調節(jié)毛細血管壁滲透性的作用。臨床上用于治療過敏性紫癜及各種因毛細血管脆性增加而引起的出血性疾病,也用于治療高血壓和老年氣管炎等。槲皮素用于治療慢性支氣管炎,對冠心病及高血壓也有輔助治療作用。同時具有明顯的抗腫瘤、抗氧化及影響各種酶的活性等作用。蘆丁和槲皮素的結構及臨床上的作用很相似。兩種物質往往共存,測定它們的含量時,相互之間有干擾,需經分離后才能進行測定,操作繁瑣費時,誤差較大?；泵字刑J丁和槲皮素的測定,已有脈沖極譜法、高效液相色譜法、流動注射法、毛細管電泳-電化學檢測法和卡爾曼濾波法等。本法不經分離,對槐米中的蘆丁和槲皮素同時進行測定。其原理為:在等吸收波長處測定樣品溶液的吸光度,其吸光度差值ΔA只與其中一種組分的濃度呈線性關系,而與另一組分的濃度無關。本法簡便、快捷,精密度和準確度亦令人滿意。2實驗部分2.1主要試劑的配制751G分光光度計(上海分析儀器廠);756MC分光光度計(上海分析儀器廠);AB2004-N電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)。槲皮素(中國預防醫(yī)學科學院勞衛(wèi)所,生化純),用電子天平準確稱取槲皮素4.2mg,用甲醇溶解,移入50mL的容量瓶中,用甲醇定容至刻度,濃度為84μg/mL。蘆丁(國藥集團化學試劑有限公司,生化純),用電子天平準確稱取蘆丁4.3mg,用甲醇溶解,移入50mL的容量瓶中,用甲醇定容至刻度,濃度為86μg/mL;實驗用水為蒸餾水。2.2評估蘆丁、槲皮素在13、34分別配制槲皮素(8.04μg/mL)和蘆丁(17.36μg/mL)的單組分標準溶液,測定它們在波長240—380nm的吸光度,經過粗選和細選,分別找出槲皮素和蘆丁的等吸收波長λ1、λ2、λ3、λ4。由于槲皮素在λ1、λ2處有相同的吸收,在此二波長處混合物的ΔA只與蘆丁的濃度有關。同理,在λ3、λ4處測定其吸光度,ΔA只與的槲皮素濃度有關。配制一系列濃度的槲皮素和蘆丁標準溶液,在等吸收波長處測定其吸光度,計算吸光度的差值,作校準曲線及線性回歸方程,由此可計算出未知物樣品中蘆丁和槲皮素的含量。3結果與討論3.1稀堿穩(wěn)定性的考察主要從蘆丁和槲皮素樣品的溶解度和穩(wěn)定性考慮,選擇稀堿(醋酸鈉、氫氧化鈉)水溶液、甲醇、不同比例的甲醇水溶液、乙醇實驗。結果表明,樣品不溶于醋酸鈉溶液,稀氫氧化鈉對待測物質的穩(wěn)定性影響較大,很短時間就使蘆丁、槲皮素溶液由黃色變?yōu)樽攸S色。樣品均能很好地溶于甲醇,蘆丁在1∶4的甲醇水溶液中穩(wěn)定性最好(約放置3h吸光度不會有大的變化)。槲皮素在1∶4的甲醇水溶液中能穩(wěn)定1h,符合測定要求。樣品在乙醇中溶解時需水浴加熱,但在加熱時,蘆丁少部分發(fā)生水解,生成槲皮素和糖。本實驗用甲醇溶解并配制樣品,用1∶4的甲醇水溶液作為稀釋液。3.2紫外分光光度計檢測移取一定體積的蘆丁和槲皮素儲備液,經1∶4的甲醇水溶液稀釋后,配制成蘆丁8.04μg/mL、槲皮素17.36μg/mL的單組分標準溶液,經紫外分光光度計掃描測定,繪制相應的吸收曲線,同時確定槲皮素在波長247nm和266nm有相同的吸收,蘆丁在波長340nm和370nm處有相同的吸收。具體情況如圖1所示。3.3校準曲線測定配制一系列濃度的蘆丁溶液,測定其在波長247nm和266nm的吸光度,計算其對應的吸光度差值,作出ΔA—C校準曲線。結果列于表1。校準曲線回歸方程:ΔA=0.0147C+0.0058;相關系數r=0.9996。配制一系列濃度的槲皮素標準溶液,在波長340nm和370nm處測定其吸光度,計算相應的吸光度差值,結果列于表2。校準曲線回歸方程:ΔA=0.0679C+0.0327,相關系數r=0.9993。3.4蘆丁和槲皮素標準使用液移取2mL樣品儲備液,用1∶4的甲醇水溶液稀釋至10mL,計算得到此溶液中含蘆丁14.88μg/mL,槲皮素1.742μg/mL。在該溶液中加入不同比例的蘆丁和槲皮素的標準溶液,測定后計算其回收率。結果列于表3。3.5蘆丁含量測定結果稱取50g槐米(本市藥店所購)用蒸餾水浸泡10h后,用70%乙醇回流提取3次,過濾合并濾液,蒸餾回收乙醇,濃縮干燥得提取物。稱取4.6mg提取物,用甲醇溶解,轉移至50mL的容量瓶中,用1∶4的甲醇水溶液定容至刻度,制得樣品儲備液。移取2.0mL—4.5mL(間隔0.5mL)的樣品儲備液,配制成一系列濃度的樣品溶液,在波長247nm和266nm下測定其吸光度值,并計算吸光度差值,用ΔA=0.0147C+0.0058計算蘆丁的濃度,進而可以計算出樣品中蘆丁的含量。結果列于表4。移取2.0mL—4.5mL(間隔0.5mL)的樣品儲備液,配制成一系列濃度的樣品溶液,在波長340nm和370nm下測定其吸光度值,并計算吸光度差值,用ΔA=0.0679C+0.0327計算槲皮素的濃度,進而可以計算出樣品中槲皮素的含量。結果列于表5。4組分同