大腸癌中g(shù)s-pi、opo和pgp耐藥基因的表達(dá)及生物學(xué)意義

大腸癌中g(shù)s-pi、opo和pgp耐藥基因的表達(dá)及生物學(xué)意義

癌癥的發(fā)病率是腫瘤的第三種，其次是癌癥和胃癌。在全世界范圍內(nèi)，超過500萬人患有肺癌和癌。我國大腸癌發(fā)病率占惡性腫瘤的第4位或第5位。近年來,上海地區(qū)大腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢。目前,大腸癌的治療主要是手術(shù)切除及化療,臨床對大腸癌多采用聯(lián)合方案或憑臨床醫(yī)師的主觀判斷進(jìn)行用藥。近年研究發(fā)現(xiàn),某些癌耐藥蛋白往往是導(dǎo)致臨床化療失敗的主要原因之一。本文通過檢測大腸癌化療前腫瘤細(xì)胞的耐藥性,旨在為防止多種耐藥性的誘導(dǎo)方面提供一定的臨床病理依據(jù)。材料和方法一、一般臨床數(shù)據(jù)收集2000年5月～2002年6月我院外科手術(shù)切除的大腸癌標(biāo)本98例?；颊叩哪挲g為39～89歲,平均66.7歲。二、免疫組織化學(xué)染色(一)多藥耐藥分析胎盤型谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST-Pi),為單克隆抗體,克隆號353-10,標(biāo)記陽性者提示腫瘤細(xì)胞對GST-Pi所介導(dǎo)的抗癌藥物順鉑有耐藥傾向;多藥耐藥(MDR)基因產(chǎn)物P-糖蛋白(PgP),為單克隆抗體,克隆號JSBI,標(biāo)記陽性者提示腫瘤細(xì)胞對長春新鹼類和阿霉素有耐藥傾向;拓樸異構(gòu)酶-Ⅱ(TOPO-Ⅱ),為單克隆抗體,克隆號JH2.7,標(biāo)記陽性者提示腫瘤細(xì)胞對拓樸異構(gòu)酶抑制劑有耐藥傾向。抗體稀釋度:GST-Pi為1∶50,PgP和TOPO-Ⅱ均為1∶25。試劑均為DAKO公司產(chǎn)品(上海中達(dá)醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究所提供)。(二)方法采用免疫組織化學(xué)二步法進(jìn)行染色,四鹽酸二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。(三)腫瘤細(xì)胞陽性細(xì)胞表達(dá)的檢測陽性細(xì)胞呈棕褐色細(xì)顆粒狀,GST-Pi定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi),TOPO-Ⅱ定位于細(xì)胞核內(nèi),PgP定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的陽性數(shù)及其染色反應(yīng)的深淺進(jìn)行判定,采用高倍視野隨機(jī)計數(shù)500個腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞所占的比例,定為3級,未見陽性表達(dá)或陽性細(xì)胞數(shù)<5%為陰性(-),陽性細(xì)胞數(shù)≥5%至<30%為弱陽性(+),≥30%至<60%為中度陽性(++),≥60%為強(qiáng)陽性(+++)。以GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP陽性表達(dá)胃癌標(biāo)本為陽性對照組。三、統(tǒng)計處理采用相關(guān)分析。結(jié)果一、脫硫廢水發(fā)病年齡本組中80～89歲10例(10.20%);以70～79歲病例數(shù)最多,為33例(33.67%);60～69歲26例(26.53%);50～59歲17例(17.35%);40～49歲11例(11.22%);30～39歲1例(1.02%)。文獻(xiàn)示大腸癌的發(fā)病年齡高峰在我國為30～50歲,國外為50～60歲。本組60～79歲的病例占60.20%。二、病例責(zé)任分類本組98例大腸癌標(biāo)本中,92例為單個癌灶,5例為2個癌灶,1例為3個癌灶。對多個癌灶者僅對其中1個癌灶進(jìn)行病理分類、免疫組織化學(xué)標(biāo)記及分析。參照參考文獻(xiàn)進(jìn)行病理和組織學(xué)分類。病理學(xué)分類:早期大腸癌5例(5.10%),其中3例為息肉隆起型,2例為扁平隆起型;進(jìn)展期大腸癌93例(94.90%),其中14例為隆起型(14.29%),13例為局限潰瘍型(13.27%),56例為浸潤潰瘍型(57.14%),2例為浸潤型(2.04%),8例為膠樣型(8.16%)。組織學(xué)分類:高分化管狀腺癌63例(64.29%),中分化管狀腺癌14例(14.29%),低分化管狀腺癌6例(6.12%),黏液腺癌14例(14.29%),印戒細(xì)胞癌1例(1.02%)。Dukes分期:A期15例,B期33例,C期47例,D期3例。三、陽性表達(dá)率本組大腸癌標(biāo)本中,GST-Pi陽性表達(dá)率為45.92%,以強(qiáng)陽性表達(dá)居多;TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)率為26.53%,以弱陽性表達(dá)居多;PgP陽性表達(dá)率為11.22%,也以弱陽性表達(dá)居多。見表1。四、耐藥基因表達(dá)本組大腸癌標(biāo)本中以高分化管狀腺癌多見。大腸癌對GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP3種耐藥基因均有不同程度的陽性表達(dá)。不同組織學(xué)類型大腸癌與GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP的陽性表達(dá)相關(guān)(r值分別為0.993、0.998和0.966,P均<0.001)。見表2。五、耐藥基因表達(dá)本組大腸癌患者各年齡段對GST-Pi、TOPO-Ⅱ和Pgp3種耐藥基因均有不同程度的陽性表達(dá)。年齡與GST-Pi的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.92,P<0.005),而與TOPO-Ⅱ和Pgp的陽性表達(dá)不相關(guān)(r值分別為0.40和0.17,P>0.05)。見表3。六、pgp和-的表達(dá)差異大腸癌的Dukes分期與GST-Pi和TOPO-Ⅱ的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r值分別為0.995和0.984,P<0.01),但與PgP的陽性表達(dá)不相關(guān)(r=0.775,P>0.05)。見表4。七、gst-pi陽性檢測對98例大腸癌標(biāo)本中的33例進(jìn)行LRP(廣譜耐藥基因檢測項目,陽性表明腫瘤對多種化療藥物均不敏感)檢測,陽性26例,陰性7例,其中GST-Pi陽性13例,GST-Pi陰性20例,從理論上講,這20例對順鉑無耐藥傾向。此外,有11例LRP陽性者的GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP均為陰性,提示這些患者用順鉑、長春新堿類、阿霉素和拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑治療可能仍有效。因此,LRP的作用還有待于進(jìn)一步探討。gst-pi和pgp表達(dá)情況自1946年Gillman和Phillip報道氮芥類藥物治療造血系統(tǒng)腫瘤以來,化學(xué)治療已取得很大的進(jìn)步,已使絨毛膜細(xì)胞癌、惡性淋巴瘤、睪丸精原細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌等多種惡性腫瘤獲得治愈的機(jī)會,大多數(shù)惡性腫瘤得到緩解,所以化療仍是目前臨床治療惡性腫瘤的一種有效的輔助治療手段。但許多腫瘤在化療前即有耐藥基因MDR1mRNA水平的增高,在治療后更高。因此,在用藥前篩選出腫瘤細(xì)胞無明顯耐藥性的抗癌藥物進(jìn)行化療,可進(jìn)一步提高療效,延長患者的生存期。本組大腸癌標(biāo)本GST-Pi陽性表達(dá)率為45.92%,強(qiáng)陽性高達(dá)44.44%,表明近一半大腸癌對GST-Pi所介導(dǎo)的主要抗癌藥物順鉑產(chǎn)生耐藥傾向,并且大多有強(qiáng)耐藥性,提示大腸癌組合用藥化療時,對順鉑的選擇應(yīng)慎重考慮。同時本組資料還顯示,TOPO-Ⅱ和PgP陽性表達(dá)率分別為26.53%和11.22%,表明部分大腸癌對TOPO-Ⅱ和PgP所介導(dǎo)的主要抗癌藥拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑和長春新堿、阿霉素等有耐藥傾向。也表明部分大腸癌在抗癌藥物治療前癌細(xì)胞內(nèi)可原發(fā)地存在對上述抗癌藥物的耐藥傾向,或部分大腸癌患者體內(nèi)存在多向耐藥基因,這可能是化療有時難以達(dá)到預(yù)期效果的重要因素之一。因此,測定GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP對指導(dǎo)制定化療方案有重要臨床價值。根據(jù)對抗腫瘤藥物的研究表明,不同組織學(xué)類型的腫瘤采用相同的用藥方案,效果不盡相同。本組資料顯示,大腸癌