參附注射液對(duì)急性腎缺血-再灌注損傷的預(yù)防作用及機(jī)理探討

參附注射液對(duì)急性腎缺血-再灌注損傷的預(yù)防作用及機(jī)理探討

20世紀(jì)70年代末，格蘭曼a等人發(fā)現(xiàn)腎衰竭，并進(jìn)行了注射。腎損傷沒有改善，而是惡化。因此，他提出了干預(yù)腎臟病變的再感染（iri）。臨床常見的腎外傷和腎實(shí)質(zhì)切開取石等外科手術(shù)、腎移植和各種原因?qū)е碌男菘诉^程中均存在這一現(xiàn)象。參附注射液(ShenFu,SF)是根據(jù)中藥古方“參附湯”采用科學(xué)配方研制而成。一些研究顯示SF可增加失血性休克大鼠糖皮質(zhì)激素受體數(shù)量,保護(hù)失血性休克復(fù)蘇期間腸粘膜,具有強(qiáng)心、升壓、減慢呼吸和心率及和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用。但有關(guān)SF預(yù)防急性腎IRI的研究,尚未見報(bào)道。本文采用兔腎缺血1h再灌注3h致腎IRI模型,觀察SF預(yù)防急性腎IRI的作用并初步探討其機(jī)理。材料和方法1%克氏原螯蝦me參附注射液:每1mL含人參總皂甙不低于0.8mg,烏頭堿不高于0.1mg(雅安制藥廠,批號(hào)960831);10%葡萄糖注射液(瀘醫(yī)附院,批號(hào):971128)。20%烏拉坦和0.9%NaCl溶液均臨時(shí)配制;SOD、MDA及NO測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào):970628)。2分組及治療方法日本大耳白兔27只(瀘醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房提供),體重(2.20±0.30)kg,雌雄不拘。隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham組)、缺血再灌注組(I-R組)和參附預(yù)防組(SF+I-R組),每組9只。置空調(diào)室(溫度18-20℃)常規(guī)喂養(yǎng)。,術(shù)前4天每天1次,SF+I-R組用參附注射液2mL/kg、I-R組和sham組均用等容量生理鹽水加入10%的葡萄糖液10mL/kg中緩慢靜脈推注。3腎組織病理學(xué)檢查20%的烏拉坦4mL/kgiv,腹中線切口,去左腎。分離右腎動(dòng)、靜脈并夾閉,1h后恢復(fù)灌流,自左腎靜脈緩慢推注生理鹽水20mL/kg后關(guān)腹。再灌注2h時(shí),經(jīng)左腎靜脈殘端自腔靜脈取血2mL。再灌注3h時(shí)取右腎。上極組織做光鏡和電鏡檢查;余腎組織正中切開,肉眼觀察皮質(zhì)和髓質(zhì)淤血、水腫情況。隨即稱取0.5g腎下極組織加4℃生理鹽水4.5mL,制成10%的組織勻漿。Sham組右腎動(dòng)靜脈模擬夾閉1h。4指標(biāo)和方法的檢測(cè)4.1腎組織中no濃度的檢測(cè)和計(jì)算mL檢測(cè)(1)血清和腎組織中SOD活性、MDA含量及腎組織中的NO濃度(按試劑盒使用方法進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)算)。(2)腎組織中的Na+、Ca2+(用原子自吸收火焰分光光度計(jì)自動(dòng)檢測(cè)和顯示腎組織勻漿中的Na+、Ca2+含量)。4.2腎組織特征的改變以及腎內(nèi)wbc的留在一起腎上極組織標(biāo)本制成普通染色切片,在光鏡下檢測(cè)腎小管壞死程度和WBC滯留數(shù)。腎小管計(jì)分和WBC滯留數(shù)標(biāo)準(zhǔn)按Paller法。4.3腎組織的超微結(jié)構(gòu)腎上極組織標(biāo)本經(jīng)醋酸鈾和枸櫞酸鉛二重正染色,用透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)變化。5統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果1各組血中sod活性、i-r檢測(cè)缺血1h再灌注2h時(shí),I-R組血中MDA含量顯著高于sham組,P<0.05,SOD活性顯著低于sham組,P<0.05。SF+I-R組血中MDA含量顯著低于I-R組,P<0.05,SOD活性顯著高于I-R組,P<0.01;其SOD活性亦顯著高于sham組,P<0.05,但MDA含量差異無顯著(P>0.05),見表1。2腎組織中mda及sod活性缺血1h再灌注3h時(shí),I-R組腎組織中MDA含量明顯高于、SOD活性顯著低于sham組,P<0.05。SF+I-R組腎組織中MDA含量顯著低于I-R組P<0.05,SOD活性顯著高于I-R組(P<0.05);與sham組比較差異無顯著(P>0.05),見表2。3mol/g.wt.3.3.3.3.3細(xì)胞系統(tǒng)mol/g.wt.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3腎缺血1h再灌注3h時(shí),I-R組腎組織中NO-2/NO-3含量[(0.45±0.25)μmol/g.wt.]顯著低于sham組[(0.91±0.40)μmol/g.wt.],P<0.01。SF+I-R組腎組織NO-2/NO-3含量[(0.83±0.23)μmol/g.wt.]顯著高于I-R組,P<0.01,與sham組差異無顯著(P>0.05)。4腎組織中na+[10.972.333.323.323.323.323.323.4.323.323.323.4腎缺血1h再灌注3h,I-R組腎組織中Na+[(14.25±4.16)mg/L]、Ca2+[(2.25±1.03)mg/L]均顯著高于sham組相應(yīng)值[(10.34±4.97)mg/L,(1.39±0.94)mg/L],P<0.05。SF+I-R組腎組織中Na+[(10.97±2.93)mg/L]顯著低于I-R組(P<0.05),Ca2+[(2.02±1.29)mg/L]與I-R組無顯著差異(P>0.05);和sham組相比,Na+、Ca2+含量均無顯著差異(P>0.05)。5腎靜脈內(nèi)wbc滯留情況光鏡檢查缺血1h再灌注3h時(shí)腎上極皮質(zhì),發(fā)現(xiàn)I-R組有大量白細(xì)胞粘附、聚集在小靜脈內(nèi),WBC滯留數(shù)顯著高于sham組,P<0.05,腎小管計(jì)分較sham組顯著增高,P<0.01。SF+I-R組腎靜脈內(nèi)僅少量WBC粘附、聚集,WBC滯留數(shù)顯著低于sham組,P<0.05,同I-R組相比,差異具極顯著,P<0.01;腎小管計(jì)分顯著低于I-R組,P<0.01,但與sham組相比差異無顯著,P>0.05,見表3。6腎組織結(jié)構(gòu)正常I-R組腎皮質(zhì)和髓質(zhì)嚴(yán)重淤血和水腫,SF+I-R組髓質(zhì)可見輕度淤血和水腫,Sham組未見異常。I-R組腎小管顯著擴(kuò)張,細(xì)胞扁平,刷狀緣脫落,小管腔內(nèi)有脫落的壞死細(xì)胞。SF+I-R組病變較I-R明顯減輕。Sham組腎組織結(jié)構(gòu)正常。Sham組超微結(jié)構(gòu)正常。I-R組腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞變性壞死,基膜斷裂不連續(xù),局部增厚凸向囊腔,臟層細(xì)胞次級(jí)足突融合,濾過膜增厚(圖1);腎曲小管上皮細(xì)胞變性壞死。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)普遍擴(kuò)張,線粒體斷嵴、脫顆粒,膜溶解斷裂,胞內(nèi)電子密度高并出現(xiàn)空泡,高爾基氏器溶解,腔面微絨毛減少(圖2)。SF+I-R組腎曲小管上皮細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)褶多,腔面微絨毛較多,線粒體豐富,溶酶體較多,細(xì)胞核未見明顯改變(圖3);腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞未見壞死,基膜結(jié)構(gòu)較完整,足細(xì)胞的次級(jí)足突無融合(圖4)。fpsd對(duì)i-r腎組織n、n、pb和h-n的作用SF的主要有效成分是人參皂苷和烏頭類生物堿。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)SF對(duì)兔腎IRI有預(yù)防性保護(hù)作用,其機(jī)理可能同以下幾個(gè)方面的作用有關(guān)。①SF的抗氧化作用本實(shí)驗(yàn)顯示SF顯著提高腎I-R后血和腎組織SOD活性并減少M(fèi)DA含量,與文獻(xiàn)報(bào)道一致。不同的是本實(shí)驗(yàn)用SF預(yù)防腎IRI,并且SF+IR組血清SOD活性明顯高于sham組。表明SF可激活和保護(hù)SOD,提高SOD活性,使組織清除氧自由基的能力增強(qiáng)。SF作為氧自由基清除劑是其抗腎IRI的重要機(jī)理之一。②SF使腎組織內(nèi)NO含量增加,腎I-R后NO生成減少,增加NO含量可保護(hù)I-R后腎臟功能。另據(jù)報(bào)道NO可與超氧化物反應(yīng)生成過氧化硝酸鹽(ONOO-)及羥自由基(OH·)等細(xì)胞毒性物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)觀察到SF明顯增加I-R腎組織中NO含量,減小腎小管和腎組織受損程度。SF通過清除OFR和減少OFR生成等作用,可能阻斷NO與氧自由基的反應(yīng),使NO含量增加并延長其作用時(shí)間。③SF減少WBC在腎內(nèi)的滯留Klansner等發(fā)現(xiàn)在腎I-R前,白細(xì)胞的耗竭對(duì)腎的結(jié)構(gòu)和功能有保護(hù)作用。用各種針對(duì)CD11/CD18的單克隆抗體后,可減輕腎IRI。田力的研究表明SF具有顯著降低正常家兔血液粘度和紅細(xì)胞聚集的作用,血流速度顯著加快。此外,人參皂苷Rg1抑制中性粒細(xì)胞與血小板之間的相互作用,本研究首次觀察到SF使I-R腎組織中WBC滯留數(shù)顯著減少,減輕腎組織的淤血和水腫,顯示SF能抑制WBC的粘附、聚集,可能會(huì)防止由WBC嵌頓和堵塞血管導(dǎo)致的無復(fù)流現(xiàn)象,改善I-R后腎組織的血液灌流而減輕組織淤血和水腫。④SF減少腎組織內(nèi)Na+含量、調(diào)節(jié)Ca2+穩(wěn)態(tài)本文結(jié)果首次顯示SF顯著降低I-R腎組織內(nèi)Na+含量,可能與人參皂苷增加腎組織紅細(xì)胞2,3-二磷酸甘油酸濃度,促進(jìn)O2向組織內(nèi)釋放與攝取利用,以及SF可能提高細(xì)胞膜Na+-K+ATPase活性和抑制H+-Na+交換,抑制腎I