無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證方案

無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證驗(yàn)證工程編號(hào)R-YZ-501-01年 月驗(yàn)證機(jī)構(gòu)云南德華生物藥業(yè)質(zhì)控部化驗(yàn)室負(fù)責(zé)部門(mén)：質(zhì)控部序號(hào)姓序號(hào)姓名部門(mén)職務(wù)組內(nèi)職務(wù)本人簽名1楊祖平質(zhì)控部負(fù)責(zé)人組長(zhǎng)2試驗(yàn)室QC操作對(duì)驗(yàn)證方案批準(zhǔn)表示同意其測(cè)試內(nèi)容、測(cè)試方法和本方案內(nèi)的各種表格格式、內(nèi)容。方案起草方案起草簽名日期方案審核方案審核簽名日期方案批準(zhǔn)方案批準(zhǔn)簽名日期4目錄概述驗(yàn)證目的驗(yàn)證范圍驗(yàn)證人員及職責(zé)文件預(yù)備和培訓(xùn)驗(yàn)證條件及驗(yàn)證時(shí)間安排驗(yàn)證依據(jù)驗(yàn)證過(guò)程評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證過(guò)程評(píng)價(jià)驗(yàn)證結(jié)論建議無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證概述無(wú)菌檢查是用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其它品種是否無(wú)菌的一種方法。無(wú)菌檢查工作量大、操作不標(biāo)準(zhǔn)、人員的學(xué)問(wèn)匱乏、檢查方法應(yīng)用不當(dāng)?shù)榷紩?huì)導(dǎo)致試驗(yàn)失敗，因此在對(duì)一個(gè)產(chǎn)品進(jìn)展無(wú)菌檢查之前應(yīng)先對(duì)無(wú)菌檢查方法進(jìn)展驗(yàn)證。驗(yàn)證目的確認(rèn)所用的無(wú)菌檢查方法適用于“醫(yī)用即溶止血紗布”的無(wú)菌檢查。確保檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性、牢靠性、準(zhǔn)確性和重性以及檢查方法的完整性。通過(guò)對(duì)不同批次產(chǎn)品無(wú)菌檢查的比較，對(duì)醫(yī)用即溶止血紗布產(chǎn)品的生產(chǎn)全過(guò)程進(jìn)展質(zhì)量監(jiān)控。驗(yàn)證范圍醫(yī)用即溶止血紗布產(chǎn)品的無(wú)菌檢查。驗(yàn)證人員及職責(zé)驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)驗(yàn)證工程確實(shí)定；質(zhì)控部負(fù)責(zé)該驗(yàn)證方案的起草及組織實(shí)施；驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審批；質(zhì)控部參與驗(yàn)證的實(shí)施及監(jiān)視。驗(yàn)證小組成員：文件預(yù)備和培訓(xùn)檢查驗(yàn)證所需的各類文件資料，應(yīng)齊全；相關(guān)的文件草案是否已具備。培訓(xùn)參與驗(yàn)證人員需進(jìn)展本文件及下述內(nèi)容的培訓(xùn)：微生物學(xué)問(wèn)、無(wú)菌檢查及微生物檢驗(yàn)操作培訓(xùn)。驗(yàn)證條件及驗(yàn)證時(shí)間安排驗(yàn)證條件檢驗(yàn)公用系統(tǒng)驗(yàn)證及儀器安裝完成；儀表量器經(jīng)過(guò)校驗(yàn)合格，且在有效期內(nèi)。供試品 3批 ① ② ③培育基及試劑：0.9%濃度的溶液硫乙醇酸鹽流體培育基 批號(hào)： 生產(chǎn)廠家：改進(jìn)馬丁培育基 批號(hào)： 生產(chǎn)廠家：養(yǎng)分肉湯培育基 批號(hào)： 生產(chǎn)廠家：改進(jìn)馬丁瓊脂培育基 批號(hào)： 生產(chǎn)廠家：〔來(lái)源：云南省藥品檢驗(yàn)所〕金黃色葡萄球菌 【CMCC〔B〕26003】銅綠假單胞菌 【CMCC〔B〕10104】枯草芽孢桿菌 【CMCC〔B〕63501】生孢梭菌 【CMCC〔B〕64941】大腸埃希菌 【CMCC〔B〕44102】白色念珠菌 【CMCC〔F〕98001】無(wú)菌檢驗(yàn)儀器及相關(guān)設(shè)備壓力蒸汽滅菌器 型 號(hào)： 生產(chǎn)廠家：生化培育箱 型 號(hào)： 生產(chǎn)廠家：霉菌培育箱 型 號(hào)： 生產(chǎn)廠家：超凈工作臺(tái) 型 號(hào)： 生產(chǎn)廠家：驗(yàn)證時(shí)間驗(yàn)證小組提出完整的驗(yàn)證打算，經(jīng)批準(zhǔn)后實(shí)施，整個(gè)驗(yàn)證活動(dòng)按下面時(shí)間安排完成。年 月 日至 年 月 日。驗(yàn)證依據(jù)：《中國(guó)藥典》2023年版二部附錄XIH無(wú)菌檢查法方法驗(yàn)證試驗(yàn)。驗(yàn)證過(guò)程培育基無(wú)菌性檢查514天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。試驗(yàn)菌液的制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的穎培育物至10mL養(yǎng)分肉湯培育基中,30～3518～241mL9mL0.910倍遞增稀釋至(10-5、10-7)1mL100CFU的菌懸液。12mL硫乙醇酸鹽流體培育基中,30～3518～24小時(shí)，取上述培育物1mL加9mL0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋至(10-7)每1mL含菌數(shù)小于100CFU的菌懸液。接種白色念珠菌的穎培育物至10mL23～2824～481mL9mL0.910倍遞增稀釋至(10-7)1mL含菌數(shù)小于100CFU的菌懸液。菌液計(jì)數(shù)：稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#〔2.〕銅綠假單胞菌稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#培育基靈敏度檢查操作12mL9100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌菌懸液各1mL，每種培育基各接種2支，另139mL32支分100CFU1mL15天，逐日觀看結(jié)果。空白比照管無(wú)菌生長(zhǎng),加菌的培育基管均生長(zhǎng)良好,判靈敏度檢查合格。培育基硫乙醇酸鹽流體培育基〔培育基硫乙醇酸鹽流體培育基〔12mL/管〕改進(jìn)馬丁培育基〔9mL/管〕菌液金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌空白白色念珠菌空白1#2#＼＼方法驗(yàn)證試驗(yàn)菌液制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的穎培育物至10mL養(yǎng)分肉湯培育基中,30～3518～241mL9mL0.910倍遞增稀釋至(10-5、10-7)1mL100CFU的菌懸液。12mL硫乙醇酸鹽流體培育基中,30～3518～24小時(shí)，取上述培育物1mL加9mL0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋至(10-7)每1mL含菌數(shù)小于100CFU的菌懸液。10mL23～2824～48小時(shí)，1mL9mL0.9％的無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋至(10-7)1mL含菌數(shù)小于100CFU的菌懸液。菌液計(jì)數(shù)：稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#〔2.〕大腸埃希菌稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-1稀釋倍數(shù)菌落數(shù)10-110-210-310-410-510-610-71#2#3#樣品處理：取“醫(yī)用即溶止血紗布”樣品12片，按物料進(jìn)入凈化區(qū)程序送入無(wú)菌室，用酒精擦拭外表后去掉最外層包裝。直接接種法：取8支裝量為15mL/1mL小于100cfu/mL的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2管，其中一管分別剪取“醫(yī)用即溶止血紗布”1cm×3cm接入，另一管作比照，30～35℃培育3～5天215mL/1mL100cfu/mL的白色念1cm×3cm接入23～283～5天。逐日觀看結(jié)果。培育基培育基管〕〔15mL/管〕菌液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌白色念珠菌第一天菌液 樣品 菌液 樣品 菌液 樣品 菌液 樣品菌液樣品其次天第三天第四天第五天評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)2023年版二部附錄XIH無(wú)菌檢查法規(guī)定對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)展推斷：與比照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以無(wú)視不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)展供