油茶果皮多元酚富集工藝研究

油茶果皮多元酚富集工藝研究【摘要】目的建立油茶果皮中多元酚的富集工藝。方法油茶果皮用60%丙酮-水提取，醋酸乙酯萃取后，流經(jīng)D101型大孔吸附樹脂，然后用不同濃度乙醇梯度洗脫，最后紫外分光光度法測定多元酚含量。結果60%丙酮-水提取物中多元酚含量為%，萃取后含量達到%，用30%乙醇進行洗脫，此組分含量可達45%。結論此工藝用于油茶果皮中多元酚的富集操作簡單、效果好。

【關鍵詞】油茶果皮多元酚大孔樹脂富集工藝

Abstract：ObjectiveToestablishaprocessingmethodforenrichingpolyphenolfromCamelliaoleiferaAbelpeelbyMacroporousResinthatpeelofCamelliaoleiferaAbelwasextractedby60%Acetone-H2Oandfractedbyethylacethe.Gradientalcoholelutionwasusedtoelutethecomponentsabsorptedonmacroporousresinandtheircontentsweredeterminedbyspectrophotometry.ResultsTheextractionof60%Acetone-H2Owasverygoodandthepolyphenolwasgatheredin40%alcohol.Thecontentofpolyphenolwas45%.ConclusionTheprocessingtechnologycanbeusedtoenrichpolyphenolfromCamelliaoleiferaAbelpeel.

Keywords：CamelliaoleiferaAbelpeel;Polyphenol;Macroporousresin;Process

油茶果皮是油茶果實去籽后的干燥果殼。油茶CamelliaoleiferaAbel為山茶科山茶亞屬油茶組植物，在我國資源豐富。油茶根皮、花、種子、油粕早就被《中國藥典》收載為藥用［1］，而茶油在2005年版《中國藥典》才收載入藥［2］?，F(xiàn)代研究證明，油粕和油茶果皮均具有抑制腫瘤細胞生長的藥理作用。到目前為止，對油茶根皮、花、種子、油粕的研究均有報道［3］，而對油茶果皮的研究卻少之又少。前期研究得知油茶果皮含有大量的鞣質和皂苷類成分。為明確油茶果皮抗腫瘤作用的具體藥用部位，本文對采自廣西巴馬縣的油茶果皮中多元酚類成分進行了富集工藝研究，為進一步確證油茶果皮的抗腫瘤作用和開發(fā)應用提供理論依據(jù)。

1儀器與試藥

Unico7200可見分光光度計；Laborata4000型旋轉蒸發(fā)儀；BP210s十萬分之一電子天平；Jascov-560紫外可見分光光度計；沒食子酸；所用試劑均為分析純；水為蒸餾水；油茶果皮。

2方法與結果

樣品提取稱取油茶果皮250g，60%丙酮-水回流提取3次，1h/次［4］，合并提取液，回收溶劑至干，供用。

總多元酚含量測定

標準品與樣品溶液的制備精密稱取10mg干燥至恒重的沒食子酸，置于100ml容量瓶中，用水溶解，精確配制mg/ml沒食子酸標準品溶液，備用。取60%丙酮-水提取浸膏7g,置于100ml容量瓶中，加入水溶解至刻度，搖勻過濾，棄去初濾液20ml左右。精確吸取續(xù)濾液5ml置于50ml棕色容量瓶，加水稀釋至刻度，得樣品溶液濃度為7mg/ml。

測定波長的選擇標準品與樣品加磷鉬鎢酸-碳酸鈉顯色劑［5］，30min后用分光光度計在400～800nm范圍內(nèi)，對標準品和樣品進行波長掃描，結果在754nm左右有最大吸收，故以沒食子酸最大吸收為基準，選擇754nm作為測定波長。

標準曲線的繪制精密吸取沒食子酸標準溶液，，，，ml，分別置于10ml棕色容量瓶中，加水至5ml，再分別加入1ml磷鉬鎢酸，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以相同試劑為空白，30min后在754nm處測定其吸光度。以A值為縱坐標，體積V(ml)為橫坐標，得回歸方程：A=5V+9(r=8)，線性關系良好，其線性范圍為5～5mg/ml。

樣品多元酚含量測定精密吸取樣品溶液ml，置于10ml棕色容量瓶，依照標準曲線繪制項下的方法測定吸光度，并計算多元酚含量，浸膏中總多酚的含量為%，RSD=%。

萃取工藝研究取干燥浸膏10g直接加醋酸乙酯萃取，可稍微加熱，然后減壓下回收醋酸乙酯，得到萃取樣品g，采用上述方法測定萃取物中多元酚含量，結果為%，收率為18%。

大孔吸附樹脂富集工藝研究

大孔吸附樹脂的處理

將大孔樹脂裝入吸附柱中,并保持95%乙醇液面高出樹脂，浸泡。之后95%乙醇洗滌樹脂層,至流出液加蒸餾水不呈白色渾濁，再用蒸餾水洗至無醇味即可。然后用4%NaOH溶液1-2體積動態(tài)洗滌-水洗至中性-4%HCl1-2體積酸洗，最后用蒸餾水洗至中性備用。

洗脫溶劑考察

將萃取浸膏水溶解后流經(jīng)處理好D101大孔吸附樹脂，靜態(tài)吸附過夜。之后控制流速3ml/min，分別用水、濃度為10%，20%，30%，40%，50%的乙醇溶液進行梯度洗脫，各個梯度洗脫終點用磷鉬鎢酸-碳酸鈉做指示劑。然后將各個梯度下洗脫液減壓回收，將樣品干燥測定多元酚含量。結果見表1。表1不同梯度多元酚含量及在水中的溶解性

工藝可行性考察

取干燥浸膏10g重復以上萃取過程，直接用30%乙醇進行洗脫，得到洗脫樣品，并且多元酚含量為45%，收率為%，與上述測定結果接近。

從以上結果看出，此工藝用于油茶果皮中多元酚的富集操作簡單、重復性好。

3討論

經(jīng)過大量文獻調研表明，以沒食子酸為對照品測定多元酚含量，方法簡便、穩(wěn)定性好、易于操作。結合油茶果皮中含有大量沒食子酸及其衍生物，故選擇以沒食子酸為對照品、以分光光度法測定多元酚的含量。

富集多元酚的方法很多，傳統(tǒng)的有醋酸鉛沉淀法、明膠沉淀法、溶劑法等，但作為藥物應用來講有其自身缺點，用大孔吸附樹脂與乙醇洗脫體系結合則無污染且易于溶劑回收。同時多元酚在水中的溶解性大于在醋酸乙酯中，即多元酚在水中的分配比大于在醋酸乙酯中的分配比，所以要采用先水溶解提取物再醋酸乙酯萃取的方法，在水中仍會殘有大量多元酚，萃取不完全。為了避免多元酚在水中的殘留，選用了醋酸乙酯直接萃取的方法，實驗結果表明此富集工藝效果較好。據(jù)報道植物中的多元酚類成分對腫瘤預防和控制惡化有重要作用。通過此富集工藝獲得了油茶果皮中的多元酚類成分，這也為確證油茶果皮的抗腫瘤作用和開發(fā)應用提供了一條新途徑。

【參考文獻】

［1］江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典，上冊［M］.上海:上?？茖W技術出版社,2000,1603.

［2］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［S］.北京:化學工業(yè)出版社,2005:278