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文檔簡介

知識點(diǎn)回顧:基因工程的概念是指在

通過人工“剪切”和“拼接”等方法,對生物的基因進(jìn)行

,然后導(dǎo)入受體細(xì)胞并使重組基因在受體細(xì)胞中

,產(chǎn)生人類需要的

的技術(shù)。又稱

。思考:(1)基因工程的物質(zhì)基礎(chǔ)是:

(2)基因工程的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是:(3)一種生物的DNA上的基因之所以能在其他生物體內(nèi)得以進(jìn)行相同的表達(dá),是因?yàn)椋?/p>

知識點(diǎn)回顧:基因工程的概念是指在體外通過人工“剪切”和“拼接”等方法,對生物的基因進(jìn)行改造和重新組合,然后導(dǎo)入受體細(xì)胞并使重組基因在受體細(xì)胞中表達(dá),產(chǎn)生人類需要的基因產(chǎn)物的技術(shù)。又稱重組DNA技術(shù)。思考:(1)基因工程的物質(zhì)基礎(chǔ)是:所有生物的DNA均由四種脫氧核苷酸組成。(2)基因工程的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是:所有生物的DNA均為雙螺旋結(jié)構(gòu)。(3)一種生物的DNA上的基因之所以能在其他生物體內(nèi)得以進(jìn)行相同的表達(dá),是因?yàn)樗鼈児灿靡惶走z傳密碼子。基因工程的工具——酶與載體1、分子手術(shù)刀:

(簡稱限制酶)。(1)來源:主要從

中分離和純化。(2)特點(diǎn):每種限制酶只能識別

特定的核苷酸序列,并在

的位點(diǎn)上切割DNA分子。

(切割的化學(xué)鍵:磷酸二酯鍵)(2)切割方式錯(cuò)位切:產(chǎn)生

。平切:

產(chǎn)生

。2、分子針線:

。(1)類型:E·coliDNA連接酶、T4DNA連接酶等。(2)作用:可以將兩個(gè)DNA片段之間的2各缺口通過

同時(shí)連接起來。3、運(yùn)載工具:

。(1)種類:

(常用)、

、可起載體作用的

。(2)質(zhì)粒:來源:是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中一種很小的環(huán)狀、雙鏈DNA分子。條件:①具有

限制酶切割位點(diǎn)。②能在受體細(xì)胞中

,或

到染色體DNA上,隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制。③具有某些

。(供重組DNA的鑒定和選擇)④能“友好”地“借居”在受體細(xì)胞內(nèi);基因工程的工具——酶與載體1、分子手術(shù)刀:限制性核酸內(nèi)切酶(簡稱限制酶)。(1)來源:主要從原核生物中分離和純化。(2)特點(diǎn):每種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列,并在特定的位點(diǎn)上切割DNA分子。

(切割的化學(xué)鍵:磷酸二酯鍵)(2)切割方式錯(cuò)位切:產(chǎn)生黏性末端。平切:

產(chǎn)生平口末端。2、分子針線:DNA連接酶。(1)類型:E·coliDNA連接酶、T4DNA連接酶等。(2)作用:可以將兩個(gè)DNA片段之間的2各缺口通過磷酸二酯鍵同時(shí)連接起來。3、運(yùn)載工具:載體。(1)種類:質(zhì)粒(常用)、噬菌體、可起載體作用的動植物病毒。(2)質(zhì)粒:來源:是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中一種很小的環(huán)狀、雙鏈DNA分子。條件:①具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)。②能在受體細(xì)胞中自我復(fù)制,或整合到染色體DNA上,隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制。③具有某些標(biāo)記基因。(供重組DNA的鑒定和選擇)④能“友好”地“借居”在受體細(xì)胞內(nèi);將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)(1)受體種類不同,導(dǎo)入方法不同導(dǎo)入植物細(xì)胞:

(常用)、

。導(dǎo)入動物細(xì)胞:

。導(dǎo)入微生物細(xì)胞:

。(2)受體細(xì)胞的種類植物:可以是

(可經(jīng)組織培養(yǎng)成完整個(gè)體)動物:

(因?yàn)閯游锛?xì)胞的全能性受到抑制)(3)轉(zhuǎn)化實(shí)質(zhì):目的基因整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。4、目的基因的檢測與鑒定分子檢測①檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA是否插入了目的基因(

)②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA(

)③檢測目的基因是否翻譯出了蛋白質(zhì)(

)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)(1)受體種類不同,導(dǎo)入方法不同導(dǎo)入植物細(xì)胞:農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(常用)、基因槍法、花粉管通道法。導(dǎo)入動物細(xì)胞:顯微注射法。導(dǎo)入微生物細(xì)胞:Ca2+處理法。(2)受體細(xì)胞的種類植物:可以是受精卵、體細(xì)胞(可經(jīng)組織培養(yǎng)成完整個(gè)體)動物:受精卵(因?yàn)閯游锛?xì)胞的全能性受到抑制)(3)轉(zhuǎn)化實(shí)質(zhì):目的基因整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。4、目的基因的檢測與鑒定分子檢測①檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA是否插入了目的基因(DNA分子雜交法)②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA(分子雜交法)③檢測目的基因是否翻譯出了蛋白質(zhì)(抗原—抗體雜交法)專題4生物技術(shù)安全性和倫理問題4.1轉(zhuǎn)基因生物的安全性一、轉(zhuǎn)基因成果令人嘆為觀止1.1972年美國斯坦福大學(xué)的伯格第一次重組DNA獲得成功.2.轉(zhuǎn)基因的重要成果

(1)微生物方面:把某些重組DNA轉(zhuǎn)移到細(xì)菌中表達(dá)獲得成功,隨后,使出現(xiàn)了具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的各種重組微生物,如可以清除石油污染的假單孢桿菌等。利用轉(zhuǎn)基因細(xì)菌制造蛛絲

(2)基因制藥方面:生物制藥已經(jīng)成為21世紀(jì)的朝陽產(chǎn)業(yè).

近十幾年來,在利用生物技術(shù)制取新藥方面取得了驚人的成就,已有不少藥物應(yīng)用于臨床。例如人胰島素、人生長激素、干擾素、乙肝疫苗、人促紅細(xì)胞生成素(Epo)、GM-集落刺激因子(GM-CSF)、組織溶纖酶原激活素、白細(xì)胞介素-2及白介素-11等。正在研究的有降鈣素基因相關(guān)因子、腫瘤壞死因子、表皮生長因子等140多種。隨著生物技術(shù)藥物的發(fā)展,多肽與蛋白質(zhì)類藥物的研究與開發(fā),已成為醫(yī)藥工業(yè)中一個(gè)重要的領(lǐng)域,同時(shí)給生物制劑帶來了新的挑戰(zhàn)。在實(shí)際應(yīng)用中,基因工程藥物受到一定限制,如口服應(yīng)用時(shí)生物利用度低,會受到消化酶的破壞,在胃酸作用下不穩(wěn)定,在體內(nèi)半衰期較短等,因此只能注射給藥或局部用藥。為了克服這些缺陷,已開始改為合成這些天然蛋白質(zhì)的較小活性片段,即所謂“多肽模擬”或“多肽結(jié)構(gòu)域”合成,又叫“小分子結(jié)構(gòu)藥物設(shè)計(jì)”。這類藥物可口服,有利于由皮膚、粘膜給藥,用于治療免疫缺陷癥、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)性疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等,其制造成本也更低。這種設(shè)計(jì)思想也已應(yīng)用于多糖類藥物、核酸類藥物和模擬酶的有關(guān)研究。小分子藥物設(shè)計(jì)屬于第二代結(jié)構(gòu)相關(guān)性藥物設(shè)計(jì),所設(shè)計(jì)的分子能替代原先天然活性蛋白與特異靶相互作用。(3)轉(zhuǎn)基因動物方面:受到轉(zhuǎn)基因巨型小鼠獲得成功的鼓舞,科學(xué)家又在培育生長迅速、營養(yǎng)品質(zhì)優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因家畜、家禽方面,不斷取得輝煌成就。同時(shí),科學(xué)家還把轉(zhuǎn)基因動物變成生物反應(yīng)器。轉(zhuǎn)基因牛

(3)轉(zhuǎn)基因植物方面:

預(yù)防乙肝不用打針,只要吃幾個(gè)西紅柿就行。這可不是玩笑,中國農(nóng)科院生物技術(shù)研究中心經(jīng)過十年研究,培育出的抗乙肝西紅柿順利通過前三個(gè)階段的測試,短期內(nèi)有望上市??挂腋挝骷t柿與普通西紅柿口感一樣酸中帶甜,不但可以直接食用,還可以榨成汁或炒菜吃,對人體沒有任何毒副作用。據(jù)該項(xiàng)目負(fù)責(zé)人劉德虎研究員介紹,食用抗乙肝西紅柿,雖不能治愈乙肝,但一年只吃幾個(gè),就完全能代替注射乙肝疫苗??挂腋挝骷t柿屬于轉(zhuǎn)基因食品,就是將乙肝疫苗植入西紅柿內(nèi),經(jīng)多代繁殖,使轉(zhuǎn)入的基因穩(wěn)定化。這種西紅柿上市后將論個(gè)出售,每個(gè)售價(jià)大概在2元左右。吃西紅柿能防乙肝?轉(zhuǎn)入熒光素酶蛋白基因的發(fā)熒光煙草改變花色的轉(zhuǎn)基因矮牽?;ㄞD(zhuǎn)基因甜椒藍(lán)色玫瑰一直是人類美麗的夢想基因工程正在將它變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)轉(zhuǎn)基因植物方面:目前,科學(xué)家已經(jīng)培育出了大批具有抗蟲、抗病、抗除草劑、抗逆等全新性狀的農(nóng)作物?;蛞坏┍桓膭?,一方面可能引起生物體內(nèi)一系列未知的結(jié)構(gòu)與功能的變化;另一方面,轉(zhuǎn)基因操作對生物體的影響會通過遺傳傳遞。

轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全性問題外源基因引入后,是否會影響其他重要的調(diào)節(jié)基因,甚至?xí)せ钤┗??轉(zhuǎn)基因技術(shù)廣泛應(yīng)用是否會導(dǎo)致難以消滅的新病原物出現(xiàn)?是否會造成生態(tài)學(xué)災(zāi)難?人類攝食大量轉(zhuǎn)基因食品是否會影響人類及其后代的健康?二、對轉(zhuǎn)基因生物安全性的爭論

(1)在轉(zhuǎn)基因生物中,有時(shí)候會出現(xiàn)一些人們意想不到的后果的原因:

a.對基因的結(jié)構(gòu),基因間的相互作用及基因的調(diào)控機(jī)制都了解的相當(dāng)有限。b.轉(zhuǎn)移的基因雖然是功能已知的基因,但不少是異種生物的基因。c.外源基因插入宿主基因組的部分往往是隨機(jī)的。(2)轉(zhuǎn)基因生物與食物安全

a.轉(zhuǎn)基因食物引起食物安全性問題的理由:安全性檢測問題、滯后效應(yīng)、擔(dān)心出現(xiàn)新的過敏原、擔(dān)心營養(yǎng)成分的改變。

b.不必?fù)?dān)心轉(zhuǎn)基因食物安全性的理由:多環(huán)節(jié)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)陌踩栽u價(jià),可以保證轉(zhuǎn)基因食物的安全;科學(xué)家的負(fù)責(zé)態(tài)度可以防止新過敏原的產(chǎn)生;至今尚未發(fā)現(xiàn)食用轉(zhuǎn)基因食品而影響人體健康的事例;沒能足夠的證據(jù)證明轉(zhuǎn)基因食物有問題。(

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