霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)課件整理

霍亂弧菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)霍亂弧菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1目的:提高檢出率減少漏檢以及誤判的發(fā)生手段檢測(cè)人員是否有足夠的責(zé)任心?檢測(cè)試劑準(zhǔn)備是否齊全且符合要求?是否嚴(yán)格按照檢測(cè)流程進(jìn)行操作?目的:提高檢出率減少漏檢以及誤判的發(fā)2雪沉概述什么是霍亂?霍亂是由01群和0139群霍亂弧菌(V.cho/erae)引起的急性腸道傳染病,發(fā)病急、傳播速度快、波及范圍廣、危害嚴(yán)重的甲類傳染病。古典生物型01群稻葉型lna埃爾托生物型彥島型Hkc霍亂弧菌框亂病原菌0139群(Benga非o1群Ao2o200群腹瀉病原菌雪沉概述3病原體O1群,O139群霍亂弧菌發(fā)病特征:劇烈腹瀉、嘔吐、嚴(yán)重脫水時(shí)致酸中毒、循環(huán)衰竭而致死亡不治療或醫(yī)療很差的條件下病死率可達(dá)到20-50%(重癥病人達(dá)70100%)培養(yǎng)特性:營(yíng)養(yǎng)要求不高,兼性厭氧,37℃生長(zhǎng),怕酸嗜堿,pH:7.4-9.6快速生檢驗(yàn)依據(jù):WS289-2019《霍亂診斷標(biāo)準(zhǔn)》霍亂防治手冊(cè)(2019年第五版)病原體4亂的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)測(cè)一樣品的采集和運(yùn)輸不同樣品的病原分離流程及技術(shù)要點(diǎn)>糞便水體>水產(chǎn)品,食品等一平板分離及可疑菌落挑取一菌落鑒定常用快速檢測(cè)方法膠體金檢測(cè)條熒光PCR檢測(cè)檢測(cè)工作中應(yīng)關(guān)注的事項(xiàng)亂的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)測(cè)5樣品的采桌運(yùn)物采集:病例:糞便、肛拭子、嘔吐物未使用抗生素之前健康”人:糞便、肛拭子其他傳播環(huán)節(jié)的標(biāo)本:食物、水、環(huán)境類樣品監(jiān)測(cè):水樣,水產(chǎn)品等運(yùn)輸:般要求在3小時(shí)內(nèi)室溫(20-25℃)條件下送達(dá)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)C-B運(yùn)輸培養(yǎng)基(pH8.4);(或文臘二氏保存液)堿性蛋白胨水(pH8.49.2):不是最佳的,尤其6小時(shí)內(nèi)還不能進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),盡量采用CB運(yùn)輸培養(yǎng)基。樣品的采桌運(yùn)物6分離流及技術(shù)要點(diǎn)糞便的采集與保存運(yùn)送以采集病人自然排除的新鮮糞便為主,水樣便采取1~3mL,成形便采取指甲大小的糞量,亦可用直腸棉拭或采便管由肛門插入直腸內(nèi)3~5cm處采取,采集后的樣品應(yīng)盡快挑取接種于堿性蛋白胨水(PH8.6-9.2)同時(shí)劃線分離選擇性培養(yǎng)基(慶大/四號(hào)/TCBS平板),如不能在6小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的樣品,應(yīng)插入Cary-Blair二氏半固體保存培養(yǎng)基(或文臘二氏保存液)中送檢。標(biāo)本與保存液比例約為1:5分離培養(yǎng)要點(diǎn)(兩管三板法):挑取糞便,直接接種于堿性蛋白胨水(第一管)中,同時(shí)劃線分離選擇性平板(慶大/四號(hào)/TCBS平板,第一板)。第一管堿性蛋白胨水在37℃增菌6-8小時(shí),沾取菌膜下表層液體,劃線分離選擇性平板(慶大/四號(hào)/TCBS平板,第二板)0.1~0.2mi表層培養(yǎng)物,接種堿性蛋白陳水(第二管)。·同時(shí)吸取第二管堿性蛋白胨水增菌18小時(shí)后劃線分離選擇性平板(慶大/四號(hào)TCBS平板,第三板)分離流及技術(shù)要點(diǎn)7k水分流要點(diǎn)A水體的采集與保存運(yùn)送水體的采集一般用無(wú)菌的500m水樣瓶采集相對(duì)靜止的表層水(深度為30cm以內(nèi))500ml,密封加蓋后于室溫(2025℃)3小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。·分離培養(yǎng)要點(diǎn)(十倍濃縮堿胨水增菌培養(yǎng)法):取450m水樣,用1M氬氧化鈉調(diào)整至pH8.49.2。然后加10倍濃縮堿性胨水50ml。再加入1%亞碲酸鉀0.25~0.5m和1000單位/m青霉素lml37℃培養(yǎng)過夜,取菌膜下表層培養(yǎng)物接種選擇性培養(yǎng)基(慶大/四號(hào)/TCBS平板)分離培養(yǎng),同時(shí)吸0.1~0.2m表層培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于堿性胨水管中作二次增菌,37℃培養(yǎng)6~&h再劃線接種于選擇性培養(yǎng)基(慶大/四號(hào)/TCBS平板)。k水分流要點(diǎn)A8k水產(chǎn)品分流況要點(diǎn)口水產(chǎn)品的采集與保存運(yùn)送通常選取活的或者新鮮的水生動(dòng)物為采集對(duì)象,有時(shí)也應(yīng)考慮冰凍的水生動(dòng)物,有條件的采樣點(diǎn)可將水生動(dòng)物整體采回實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行相關(guān)處置涂抹采集:使用無(wú)菌棉簽涂抹5只以上水水生動(dòng)物表面、腮部及泄殖腔,直接接種到20ml堿性蛋白胨水作為增菌液處理。整體或局部采集在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)以無(wú)菌操作將其解剖,取鰓部和腸內(nèi)容物25克剪碎后,置滅菌均質(zhì)杯或均質(zhì)袋中,加入225mL倍體積的堿性蛋白胨水增菌;但小貝殼類動(dòng)物,則用錘子將外殼擊碎,整體放入100m三角瓶中,加入5-10倍的堿性蛋白陳水增菌;甲殼類動(dòng)物除含肉質(zhì)部分外,其余部分(包括鰓、腸、足、表層外殼等整體放入100ml三角瓶中,加入5-10倍的堿性蛋白胨水增菌分離培養(yǎng)(兩管兩板法):接種后的堿性蛋白胨水37℃培養(yǎng)過夜,取菌膜下表層培養(yǎng)物接種選擇性培養(yǎng)基(慶大/四號(hào)/TCBS平板).同時(shí)吸0.1~0.2m表層培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于陳水管中作二次增菌,37℃培種于選擇性培養(yǎng)k水產(chǎn)品分流況要點(diǎn)口9圖9-71霍亂弧菌在堿性蛋白胨水培養(yǎng)基(pH2)中生長(zhǎng),液體呈均勻混濁,有菌膜(6~8h)左側(cè)為陰性對(duì)照。圖9-71霍亂弧菌在堿性蛋白胨水培養(yǎng)基10霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)課件整理11霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)課件整理12霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)課件整理13霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)課件整理14霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)課件整理15霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)