電針不同經(jīng)穴治療心肌缺血的機(jī)制研究

電針不同經(jīng)穴治療心肌缺血的機(jī)制研究

近年來(lái)，預(yù)防針灸效果的中央控制機(jī)制在國(guó)內(nèi)外科學(xué)研究中引起了越來(lái)越多的關(guān)注。研究表明,下丘腦可通過(guò)調(diào)控自主神經(jīng)的功能、精氨酸加壓素(argininevasopressin,AVP)的合成和釋放以及壓力感受器反射等方面調(diào)節(jié)心血管功能活動(dòng),其內(nèi)諸多神經(jīng)遞質(zhì)均可通過(guò)改變自主神經(jīng)活動(dòng)引起心血管反應(yīng)。本研究通過(guò)觀察電針手厥陰心包經(jīng)絡(luò)穴“內(nèi)關(guān)”、手少陰心經(jīng)原穴“神門”、手太陰肺經(jīng)原穴“太淵”對(duì)心肌缺血模型大鼠下丘腦室旁核區(qū)單胺類遞質(zhì)NE含量的影響,探索下丘腦在針刺抗心肌缺血過(guò)程中的作用機(jī)制及其物質(zhì)基礎(chǔ),研究經(jīng)脈臟腑相關(guān)與腦聯(lián)系的中樞調(diào)控機(jī)制。1材料表面1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物健康清潔級(jí)SD大鼠80只,雌雄各半,體質(zhì)量(200±20)g,由江蘇省南京安立默實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,合格證號(hào)SCXK蘇(2006-005)。同等條件適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。1.2elisa試劑盒大鼠去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)試劑盒,RB公司產(chǎn)品,批號(hào)08090412;氨基甲酸乙酯(烏來(lái)糖),中國(guó)上海曹楊第二中學(xué)化工廠生產(chǎn),批號(hào)050708;實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。1.3儀器、試劑和儀器Powerlab16導(dǎo)生理記錄儀,澳大利亞AD公司;PCE-A型程控電針治療儀,安徽天恒科技實(shí)業(yè)有限公司;ALLEGRA64R冷凍離心機(jī),美國(guó)BECKMAN公司;ELX800UV酶標(biāo)儀,美國(guó)BIOTEK公司;CM1900型切片機(jī),德國(guó)LEICA公司;針灸針,蘇州醫(yī)療用品廠。2方法2.1模型大鼠的分組按照《衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)》中的隨機(jī)數(shù)字表法從80只大鼠中隨機(jī)選取10只作為正常對(duì)照組,其余大鼠進(jìn)行模型復(fù)制。將模型復(fù)制成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、電針“神門”組(簡(jiǎn)稱“神門”組)、電針“內(nèi)關(guān)”組(簡(jiǎn)稱“內(nèi)關(guān)”組)、電針“太淵”組(簡(jiǎn)稱“太淵”組),每組10只,剩余模型大鼠在同等條件下飼養(yǎng),以備補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。存在心電圖異常、實(shí)驗(yàn)手術(shù)或記錄失敗、麻醉過(guò)量死亡、功能狀態(tài)不良或術(shù)中死亡者,均未列為實(shí)驗(yàn)分析對(duì)象。2.2心肌缺血模型的復(fù)制模型復(fù)制前記錄正常心電圖,心電圖異常者剔除不用。參照文獻(xiàn)的改良方法復(fù)制模型。大鼠乙醚麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上,左胸部備皮,常規(guī)無(wú)菌操作。沿胸骨左緣剪開(kāi)皮膚,用止血鉗游離大鼠左側(cè)的胸大肌,暴露左側(cè)第2~4肋,以便清晰地觀察到心臟暗影,用彎頭止血鉗沿胸骨左緣第3、第4肋間撐開(kāi)肋骨,擠出心臟,充分暴露心臟及其表面的血管,用4/0醫(yī)用縫合線在冠狀動(dòng)脈左前降支下1/3處快速結(jié)扎,心臟復(fù)位后立刻關(guān)閉胸腔。根據(jù)模型復(fù)制前后心電圖變化情況,評(píng)判心肌缺血模型復(fù)制成功與否。心電圖記錄采用針形電極插入大鼠四肢皮下,常規(guī)連接Powerlab16導(dǎo)生理記錄儀,記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖,觀察分析T波、J點(diǎn)的變化。以心電圖出現(xiàn)J點(diǎn)抬高、T波高聳或倒置為模型復(fù)制成功的標(biāo)志。2.3模型電針治療在各電針組大鼠左側(cè)“內(nèi)關(guān)”“神門”和“太淵”穴區(qū)用不銹鋼28號(hào)0.5寸毫針直刺入穴位,均在無(wú)菌操作下完成,針柄連接PCE-A型程控電針治療儀輸出端,參考電極置于穴區(qū)沿經(jīng)脈縱向近端約2mm處,接電針儀的另一輸出端。電針刺激,刺激電壓5V,電流強(qiáng)度1.1mA,頻率為2Hz,波寬300ms,正負(fù)向交替方波刺激,每次刺激10min,模型復(fù)制后第3d開(kāi)始電針治療,每天1次,電針3d。模型組大鼠只固定不電針。穴位定位參照林文注《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》。2.4動(dòng)物腦剖面觀察針刺治療結(jié)束后在大鼠麻醉狀態(tài)下活體取材,距第1次針刺時(shí)間50h左右。予30mg/L水合氯醛腹腔麻醉,活體開(kāi)顱取出完整腦組織,參照Paxinos和Watson大鼠腦解剖圖譜,在冰盤上用無(wú)菌刀片切取下丘腦室旁核區(qū)2mm×2mm×2mm腦組織,稱質(zhì)量后立即標(biāo)記置于3mL凍存管,液氮冷藏保存,每只動(dòng)物取材時(shí)間不超過(guò)2min。正常對(duì)照組、模型組取材時(shí)間,范圍和方法與針刺組相同。標(biāo)本檢測(cè)嚴(yán)格按照ELISA實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明進(jìn)行。2.5系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)分析連續(xù)型變量用表示,使用SPSS17.0forWindows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,其中P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)意義,P<0.01為差異具有高度統(tǒng)計(jì)意義。3結(jié)果3.1心肌缺血模型復(fù)制根據(jù)模型復(fù)制前后心電圖變化情況判斷、評(píng)價(jià)心肌缺血大鼠模型復(fù)制成功與否,見(jiàn)圖1~8。圖2,3,5,7與圖1對(duì)比,結(jié)扎后大鼠心電圖出現(xiàn)了明顯改變,可見(jiàn)T波倒置,J點(diǎn)抬高,證明心肌缺血模型復(fù)制成功;圖4,6,8分別與各組模型復(fù)制后心電圖對(duì)比,“內(nèi)關(guān)”組、“神門”組大鼠心電圖顯著改善,J點(diǎn)抬高和異常T波出現(xiàn)率降低,“太淵”組略有改善。3.2內(nèi)關(guān)、神門、太淵、腦室旁核區(qū)控制顯著提高見(jiàn)表1。結(jié)果表明,與正常對(duì)照組比較,模型組NE含量顯著降低,2組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)意義(P<0.01);與模型組比較,各電針組NE含量顯著升高(P<0.01或P<0.05),提示電針“內(nèi)關(guān)”“神門”“太淵”穴都有升高心肌缺血大鼠下丘腦室旁核區(qū)NE含量的作用;各電針組之間比較,“神門”組NE含量顯著高于“內(nèi)關(guān)”組和“太淵”組(P<0.05或P<0.01),“內(nèi)關(guān)”組NE含量顯著高于“太淵”組(P<0.05),提示電針“神門”穴促進(jìn)NE含量恢復(fù)的作用顯著優(yōu)于“內(nèi)關(guān)”穴及“太淵”穴。4針刺輔助治療的作用中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE與心血管活動(dòng)有著極為密切的聯(lián)系。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),NE作用于中樞α受體可引起血壓下降和心率減慢,興奮中樞β受體則出現(xiàn)相反的效應(yīng),使血壓升高和心率加快。劉俊嶺等采用家兔急性心肌缺血模型,在胸髓蛛網(wǎng)膜下腔微量注射NE,發(fā)現(xiàn)NE能顯著加強(qiáng)電針“內(nèi)關(guān)”穴促進(jìn)ST段、T波恢復(fù)的作用。李伊為等實(shí)驗(yàn)證實(shí),NE參與電針促進(jìn)急性心肌缺血的恢復(fù),電針可能通過(guò)興奮α受體、抑制β受體起作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,針刺不同經(jīng)穴對(duì)心肌缺血大鼠下丘腦室旁核區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE含量變化的影響不同。其中,電針手少陰心經(jīng)穴“神門”、手厥陰心包經(jīng)穴“內(nèi)關(guān)”促進(jìn)NE含量的恢復(fù)作用顯著優(yōu)于手太陰肺經(jīng)穴“太淵”。提示下丘腦室旁核區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE可能