紅酵母胞內(nèi)蝦青素提取工藝的研究

紅酵母胞內(nèi)蝦青素提取工藝的研究

蝦青素在水產(chǎn)養(yǎng)殖、家禽養(yǎng)殖、食品、保健、保健品、護理等方面具有廣闊的應用前景。目前,獲取蝦青素的主要方式有從水產(chǎn)加工廢棄物中提取蝦青素,利用藻類生產(chǎn)蝦青素,化學合成法生產(chǎn)蝦青素,利用細菌生產(chǎn)蝦青素,利用法夫酵母菌生產(chǎn)蝦青素以及還有利用紅酵母菌生產(chǎn)蝦青素,其中利用法夫酵母和紅酵母被認為是最具有工業(yè)化生產(chǎn)潛力1材料和方法1.1儀器和檢測設備紅酵母菌株(本實驗室保存);丙酮、二甲亞砜、無水乙醇等提取試劑:分析純;蝦青素標準品;LXJ2IIB型低速大容量多管離心機、722S型可見分光光度計:上海青浦滬西儀器;HH4型數(shù)顯恒溫水浴鍋、10123B型電熱鼓風干燥器:國華電器有限公司;RE52AA旋轉蒸發(fā)器:上海亞龍生化儀器廠;FA1104型電子天平:上海精密科學儀器有限公司。1.2實驗方法1.2.1紅葡萄菌的培養(yǎng)1.2.2濕菌體的制備取4mL發(fā)酵液于4000r/min離心10min,棄上清,用蒸餾水洗滌2~3次后再次離心,即得濕菌體。然后加入2mL二甲亞砜溶液,在45℃下破壁30min。再加入2mL提取劑無水乙醇,二甲亞砜-乙醇提取至無色,在4000r/min離心10min,取上清液測其在波長為500nm處的吸光值(簡稱OD1.2.3不同破壁溫度和時間紅酵母破壁效果的測定(1)二甲亞砜對紅酵母破壁效果的影響在相同條件下,使用20%、40%、60%、80%、100%的二甲亞砜(蒸餾水配制,v/v)對紅酵母進行破壁,然后測定蝦青素提取液的OD(2)溫度對紅酵母破壁效果的影響在相同條件下,破壁溫度為20、30、40、50、60℃,測定蝦青素提取液的OD(3)破壁時間對紅酵母破壁效果的影響在相同條件下,破壁時間為10、30、60、90、120min,測定蝦青素提取液的OD1.2.4紅酵母蝦青素的提取實驗(1)提取溶劑(乙醇:二甲基亞砜)對紅酵母蝦青素提取的影響紅酵母細胞破壁后,采用二甲基亞砜:乙醇比例分別為2:3,2.5:2.5,3:2,4:1,4.5:0.5提取紅酵母蝦青素,測定蝦青素提取液的OD(2)提取溫度對紅酵母蝦青素提取的影響紅酵母細胞破壁后,分別置于20、30、40、50、60℃條件下提取蝦青素,測定蝦青素提取液的OD(3)提取時間對紅酵母蝦青素提取的影響紅酵母細胞破壁后,蝦青素提取時間分別為10、30、60、90、120min,測定蝦青素提取液的OD(4)提取pH對紅酵母蝦青素提取的影響紅酵母細胞破壁后,提取溶劑pH分別設置為1、3、6、7、9、11的pH梯度,測定蝦青素提取液的OD2結果與分析2.1二甲基化合物對紅葡萄破壁效果的影響由圖1可知,二甲亞砜濃度為100%,作用30min后,破壁效果較好。2.2破壁溫度對蝦青素提取量的影響由圖2可知,二甲基亞砜破壁最佳溫度為40℃。在40℃之內(nèi),蝦青素提取量隨破壁溫度的升高而增大,當溫度超過40℃之后,蝦青素提取量減少,可能是受溫度影響而部分降解。2.3破壁時間對蝦青素提取量的影響由圖3可知,二甲基亞砜法破壁最佳時間為60min。在60min之內(nèi),蝦青素提取量隨破壁時間的延長而增大,當時間超過60min之后,蝦青素提取量隨破壁時間的增加而減少。2.4溶劑濃度對蝦青素提取效果的影響蝦青素不溶于水,在極性弱的有機溶劑中溶解度較大,溶劑濃度的選擇對于提取蝦青素的提取是非常重要的。由表1可以看出,蝦青素的提取溶劑DMSO:乙醇3:2時,提取液吸光度值最大,蝦青素提取率最大。2.5提取溫度對蝦青素提取率的影響由表2可以看出知,溫度對蝦青素的提取有一定的影響,在20~40℃范圍內(nèi),蝦青素的提取率隨著溫度的升高而增大,在40℃時達到最高,隨著溫度的進一步提高,吸光值有所下降,可能是由于較高的溫度會使色素的分解造成的,40℃是最適的提取溫度。2.6蝦青素提取時間對蝦青素提取率的影響由表3可知,在10~60min范圍內(nèi)蝦青素提取量隨提取時間的延長而增大,提取時間超過60min之后,提取時間的延長并不能提高蝦青素的提取率,相反,蝦青素提取率反而下降了,其原因可能是由于蝦青素不穩(wěn)定,提取時間過長,使得部分蝦青素降解,最適蝦青素提取時間應為60min。2.7ph對從紅棕色酪氨酸提取的影響由表4可知,過酸過堿均不利于蝦青素的提取,最適pH應為6。2.8實驗中，紅葡萄素提取方法由表5、表6可知,在A3壁方法的影響提取細胞內(nèi)產(chǎn)物的關鍵步驟就是