蝦青素對克氏原螯蝦生長繁殖的影響

蝦青素對克氏原螯蝦生長繁殖的影響

它是世界上分布最廣泛、最具侵略性的蝦。微囊藻毒素被認(rèn)為具有破壞生物體內(nèi)氧化還原平衡的能力,除了抑制磷酸酶致毒外,氧化應(yīng)激以及線粒體通透性轉(zhuǎn)換在MC致毒機制中也起著很重要的作用。MC可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)產(chǎn)生,導(dǎo)致細(xì)胞損傷和脂質(zhì)過氧化,并有可能通過某些通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。有研究表明微囊藻毒素在魚類和其他一些水生生物的器官或組織內(nèi)隨著時間的增加,其含量會逐漸降低蝦青素(Astaxanthin),又名變胞藻黃素或蝦紅素,有著色、促進生長和增強免疫力的生物功能,并且是目前為止發(fā)現(xiàn)的抗氧化能力最強的物質(zhì)之一,能夠有效清除細(xì)胞內(nèi)的氧自由基的作用1材料和方法1.1飼料及蝦青素本次實驗使用的克氏原螯蝦購自江蘇省揚州市市場,原產(chǎn)于揚州寶應(yīng)市,選附肢齊全、健康活潑、規(guī)格一致的個體作為實驗蝦,并將其置于(15±3)℃和自然光照環(huán)境中暫養(yǎng)一個月。飼料是由江蘇富裕達糧食制品有限公司生產(chǎn)的蝦用飼料,飼料成分表見表1。MC-LR購自北京伊普瑞斯科技有限公司,溶于純凈水后保存在冰箱內(nèi),在使用時直接按比例添加到玻璃箱中。蝦青素購自福建日冕科技股份有限公司,為單粒500mg規(guī)格膠囊狀保存(能值34.5kJ/g),每粒含蝦青素60mg,膠囊內(nèi)輔料為大豆油。使用時將膠囊刺破后與飼料混合拌勻。實驗投喂的各組飼料中因蝦青素添加量不同造成的能值差異,通過額外補充等能值的大豆油來平衡。1.2飼養(yǎng)克氏原螯蝦3.本實驗設(shè)計四個蝦青素添加梯度,飼料中蝦青素添加梯度分別為0、5、10、20mg/g,每個處理設(shè)3個重復(fù),實驗共用蝦96只(20.6±7.5)g。每個重復(fù)設(shè)置為8只規(guī)格一致的克氏原螯蝦成蝦(4雌4雄,組間體質(zhì)量無統(tǒng)計學(xué)意義差異),在溫室的玻璃水族箱中飼養(yǎng)(800mm×600mm×400mm),微囊藻毒素的脅迫濃度25μg/L。同時設(shè)置一組水體中無MC-LR添加的空白組,空白組所投喂的飼料中無蝦青素添加。MC-LR購自北京伊普瑞斯科技有限公司,相關(guān)濃度測定使用北京金強環(huán)保公司ELISA試劑盒測定。1.3飼養(yǎng)水溫和飼養(yǎng)確定實驗前測定配制飼料的生化成分和能值。實驗中每天在8:00與18:00分兩次投喂已配置好的餌料。飼養(yǎng)水溫用加熱棒控制在(15±3)℃。每天換水量保持在水族箱容積的1/3,溶氧量保持在4.0mg/L以上。換水時調(diào)節(jié)好不同水族箱中的MC-LR毒素的濃度,使其濃度保持恒定在25μg/L。每天記錄測定攝食和抱卵情況。若有死蝦則及時揀出,實驗結(jié)束時測量蝦體體長、體質(zhì)量和懷卵量。1.4測試指標(biāo)的測量1.4.1離心內(nèi)離心后上清液的制備每個水族箱中隨機抽樣取出4個樣本,取出每個樣本的肝胰腺,將不同重復(fù)組的肝胰腺分別放入研磨器中加入6mL的蒸餾水,按水族箱的編號對每個研磨器進行編號。將先研磨好的待測樣品插在冰盒里保存。取研磨好的樣品1.8mL在型號為Centrifuge5415R的離心機內(nèi)離心后取上清液進行后續(xù)操作。堿性磷酸酶(AlkalinephosphataseAKP)采用微量酶標(biāo)法,超氧化物歧化酶(SuperoxidedismutaseSOD)采用的是WST-1法,所用的酶活測試試劑盒均來自南京建成生物工程研究所,蛋白濃度采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定,測定酶標(biāo)儀型號為IMarkAKP=(測定OD值-空白OD值/標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(0.02mg/mL)÷待測樣品蛋白濃度(gprot/mL)SOD抑制率=((A對照-A對照空白)-(A測定-A測定空白))/(A對照-A對照空白)×100%SOD活力=SOD抑制率÷50%×反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)0.24mL/0.02mL÷待測樣本蛋白濃度(gprot/mL)。1.4.2生長和繁殖的測定(1)繁殖力:實驗結(jié)束時計算克氏原螯蝦的抱卵量。(2)特定生長率(SpecialgrowthrateSGR)SGR=(lnY2結(jié)果與分析2.1蝦青素對脅迫組sod活力的影響由圖1可見,添加蝦青素可顯著提高脅迫組克氏原螯蝦肝臟中SOD的活力,其中5g/kg蝦青素的添加量對SOD的提升最為顯著。10g/kg以下的蝦青素添加量使得脅迫組的SOD活力遠大于未脅迫組并且SOD的活力隨著蝦青素的增加而增強。20g/kg蝦青素的添加量時SOD活力明顯下降。由圖2可見,10g/kg以上蝦青素的添加量對脅迫組AKP活力提升最為明顯,且遠超未脅迫組AKP的活力,總體而言,添加蝦青素的脅迫組AKP活力均大于未脅迫組。2.2蝦青素對微囊藻毒素mc-lr引起的克氏原蝦生長和繁殖的影響由表2可見,脅迫下克氏原螯蝦的繁殖力低于未脅迫組,但隨著蝦青素的添加,脅迫組的平均抱卵量和相對抱卵量都呈持續(xù)上升的態(tài)勢。2.3g/l時g/lgr最大的部位由表3可見蝦青素的添加對脅迫組的特定生長率、成活率影響顯著,添加量在10g/kg時對SGR最大,且10g/kg以上時,脅迫組的SGR大于未脅迫組。同時,蝦青素的添加顯著提高了脅迫組的成活率,由表3可看出20g/kg的添加量時,脅迫組的成活率達到最大,但均未超過未脅迫組,且對餌料系數(shù)的影響不明顯。3討論3.1蝦青素對克氏原錨蝦生長