高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用

高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第1頁序言中藥是中國醫(yī)藥學(xué)瑰寶，對中華民族繁衍興盛做出了偉大貢獻(xiàn)。為了確保中藥安全性和有效性，數(shù)千年來中醫(yī)藥一直處于不停標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化進(jìn)程中，《神農(nóng)本草經(jīng)》則是最早中藥材標(biāo)準(zhǔn)。李時(shí)珍《本草綱目》是中藥材標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范深化。歷史發(fā)展到今天，總結(jié)前人經(jīng)驗(yàn)，補(bǔ)充完善、制訂中藥系列標(biāo)準(zhǔn)是中藥當(dāng)代化需要，也是中藥國際化，造福全人類需要。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第2頁一、本省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)情況1、個(gè)別中藥材無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

廣東是一個(gè)中藥材生產(chǎn)、銷售、使用大省，本省用于生產(chǎn)中藥成方制劑及臨床配方中藥材有上千種，《中國藥典》年版收載中藥材有551種；現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中藥材遠(yuǎn)不能滿足本省中藥材需求和使用，還有數(shù)百種經(jīng)常使用、療效很好廣東地產(chǎn)中藥材，既無國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也無省級藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第3頁2、與藥典同名異物

廣東是“川、廣、云、貴地道藥材”主產(chǎn)地之一，“南藥”是廣東特產(chǎn)。有些特產(chǎn)藥材已收入《中國藥典》如陳皮、廣藿香、廣金錢草、廣防己、廣棗、砂仁、巴戟天、沉香、地龍、化橘紅、何首烏、佛手、丁公藤……等。但還有大個(gè)別廣東常見中藥材未被《中國藥典》收載，有其習(xí)用名稱卻與《藥典》收載名稱相同，為同名異物中藥材.高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第4頁3、已經(jīng)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)偏低。

《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載119個(gè)品種，建立了定量測定方法有13個(gè)，其中高效液相色譜法5個(gè)。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第5頁二、高效液相色譜法在國家藥品

標(biāo)準(zhǔn)中利用

高效液相色譜法因?yàn)閮x器化程度高、分離效能高、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好，更適合中藥復(fù)雜成份分離分析和標(biāo)準(zhǔn)色譜圖庫建立，成為中藥含量測定主導(dǎo)方法。

高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第6頁（一）、HPLC在部標(biāo)中藥成方制劑應(yīng)用

《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》“中藥成方制劑”分20冊，共4052種，建立量化指標(biāo)項(xiàng)目標(biāo)占11%，其中采取高效液相色譜分析方法有４２項(xiàng)，占１.１２％，見表1。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第7頁表1部頒品種量化指標(biāo)方法分析含測方法揮發(fā)油測定容量法、重量法分光光度法液相色譜法氣相色譜法薄層掃描法其它浸出物累計(jì)項(xiàng)目18981254218302956416高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第8頁（二）、HPLC在《中國藥典》應(yīng)用

HPLC在《中國藥典》應(yīng)用，在我國藥學(xué)工作者努力下，經(jīng)歷了一個(gè)從無到有、從少到多過程。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第9頁表２近3版版藥典品含量測定方法分析年份總收載數(shù)薄層掃描法氣相色譜法高效液相色譜法百分比（%）1995920173111.2992601110510.61146454751845.2高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第10頁三、利用高效液相色譜法進(jìn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)定量個(gè)別提升工作中藥是各種成份混合物，其化學(xué)成份可有幾十種甚至上百種，即使中藥藥效是多成份綜合作用結(jié)果已漸成共識，但由此認(rèn)為中藥全成份均為有效成份觀點(diǎn)則是片面，以咱們當(dāng)前技術(shù)及試驗(yàn)條件要想對全部成份進(jìn)行測定也是不可能，選擇1~

2個(gè)有效成份作為中藥質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，即使這種方法不夠充分、客觀，但卻是當(dāng)前咱們技術(shù)及試驗(yàn)條件所能做到。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第11頁（一）、指導(dǎo)思想１、在制訂中藥標(biāo)準(zhǔn)中突出中醫(yī)理論指導(dǎo)作用，反應(yīng)中醫(yī)用藥與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)在關(guān)系。２、在檢測成份上也要注意以中醫(yī)臨床功效主治與當(dāng)代藥理學(xué)相結(jié)合進(jìn)行研究。３、如所測成份含量低，應(yīng)制訂浸出物或增加一味藥含量測定。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第12頁表3多指標(biāo)測定品種與項(xiàng)目序號品名檢測成份1西紅花羥基紅花黃色素、山奈素2山楂葉總黃酮、金絲桃苷3馬錢子馬錢子堿、士寧4丹參丹參酮IIA、丹酚酸B5甘草甘草酸、甘草苷6半枝蓮總黃酮、野黃芩苷7肉桂揮發(fā)油、桂皮醛8紅花羥基紅花黃色素、山奈素9蘆薈庫拉素蘆薈、好望角蘆薈10沙棘總黃酮、異鼠李素11虎杖大黃素、虎杖苷高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第13頁12金銀花綠原酸、木犀草素13銀杏總黃酮醇苷、萜類內(nèi)酯14淫羊藿總黃酮、淫羊藿苷15紫草羥基萘醌總色素、?-?’-二甲基丙酰阿卡寧16槐花總黃酮、無水蘆丁17蜂膠白揚(yáng)素、高良姜素18六味地黃丸牡丹皮中丹皮酚、山茱萸中馬錢苷19六味地黃顆粒牡丹皮中丹皮酚、山茱萸中馬錢苷20注射用雙黃連金銀花中綠原酸、黃芩中黃芩苷、連翹中連翹苷21獨(dú)一味膠囊總黃酮、正丁醇提取物、木犀草素22清開靈口服液黃芩中黃芩苷、總氮量23清開靈注射液含氮量、膽酸、梔子中梔子苷、黃芩中黃芩苷24鼻竇炎口服液正丁醇提取物、黃芩中黃芩苷高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第14頁表4要求含量程度為多成份之和序號品名檢測成份測定方法含量程度（%）1人參人參皂苷Rg1和Re、總量；Rb1HPLC≥0.30；0.22人參葉人參皂苷Rg1、Re總量HPLC≥2.253兒茶兒茶素和表兒茶素總量HPLC≥21.04三七人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1總量HPLC≥5.05木香木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯HPLC≥1.86木通齊墩果酸、常春藤皂苷元HPLC≥0.157瓦松槲皮素、山奈素HPLC≥0.028西紅花西紅花苷-I、西紅花苷-II≥10.09西洋參人參皂苷Rg1、Re、Rb1總量HPLC≥2.010大黃蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚總量HPLC≥1.511防己粉防己堿、防己諾林HPLC≥1.612防風(fēng)升麻甙和5-O-甲基維斯阿米醇苷總量HPLC≥0.24高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第15頁13紅參人參皂苷Rg1和Re、總量；Rb1HPLC≥0.25；0.2014吳茱萸吳茱萸堿和吳茱萸次堿總量HPLC≥0.1515補(bǔ)骨酯補(bǔ)骨酯素、異補(bǔ)骨酯素HPLC≥0.716苦參苦參堿、氧化苦參堿HPLC≥1.217金錢草槲皮素、山奈素HPLC≥0.1018胡黃連胡黃連苷-I、胡黃連苷-IIHPLC≥9.019厚樸厚樸酚與和厚樸酚總量HPLC≥2.020厚樸花厚樸酚與和厚樸酚總量HPLC≥0.2021牽牛子咖啡酸、咖啡酸乙酯HPLC≥0.2022香薷麝香草酚、香荊芥酚HPLC≥0.1623重樓重樓皂苷I、重樓皂苷IIHPLC≥0.8024穿心蓮穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯總量HPLC≥0.8025蟾酥華蟾蜍次素和脂蟾毒配基總量HPLC≥6.0高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第16頁（二）、提升程度１、以中國藥典２００５年版一部為基準(zhǔn)。２、中國藥典２００５年版一部，成方制劑和單味制劑共收載５６4個(gè)品種，其中有３２５個(gè)項(xiàng)目采取了高效液相色譜法進(jìn)行定量分析，占５７.6％。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第17頁３、在３２５個(gè)分析項(xiàng)目中測定芍藥苷有４５項(xiàng)，占１３.８％，測定黃芩苷４３項(xiàng)，占１３.２％，測定鹽酸小檗堿１８項(xiàng)，占５.５％，測定大黃素２０項(xiàng)，占６.２％。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第18頁類別被測成份所屬藥材測定條件芍藥苷白芍、赤勺乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87）乙腈-水（17：83）；230nm生物堿鹽酸小檗堿黃連、黃柏乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀溶液（35：65）；424nm鹽酸麻黃堿麻黃乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺）磷酸調(diào)pH至2.7（4：10）；210nm苦參堿苦參乙腈-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH8.0）；220氫溴酸東莨菪堿洋金花乙腈-0.07mol/L磷酸鈉溶液（含0.0175mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào)整pH至6.0）（50：100）；216nm荷葉堿荷葉乙腈-三乙胺-冰醋酸-水（27：1.8：0.78：70.6）；270馬錢子堿士寧馬錢子乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉溶液與0.02mol/磷酸二氫鉀等量混合,用磷酸調(diào)整pH至2.8）（21：79）；260nm原阿片堿夏天無乙腈-三乙胺醋酸溶液（1000ml水中加冰醋酸30ml，三三乙胺8ml）（18：82）；289nm高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第19頁黃酮類黃芩苷黃芩甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；280nm葛根素葛根乙腈-0.1%磷酸溶液（11：89）；250nm柚皮苷化橘紅甲醇-冰醋酸-水（30：4：60）；283nm橙皮苷陳皮、青皮甲醇-醋酸-水（42：4：54）；283淫洋藿苷淫洋藿乙腈-0.05%磷酸（26：74）；270nm蘆丁槐花甲醇-水-冰醋酸（45：54：1）；257nm金絲桃苷山楂葉甲醇-乙腈-四氫呋喃-0.5%冰醋酸（1：1：19.4：78.6）；363nm槲皮素山奈素異鼠李素銀杏甲醇-0.4%磷酸（50：50）；360nm木犀草素獨(dú)一味甲醇－0.4%磷酸溶液（50：50）；350nm高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第20頁皂苷類甘草酸（單銨鹽）甘草甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67：33：1）；250nm人參皂苷類人參、三七乙腈A；水B，梯度洗脫；203nm黃芪甲苷黃芪乙腈-水（32：68）；蒸發(fā)光散射檢測器蒽醌類大黃素、大黃酚大黃甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）；254nm丹參酮IIA丹參甲醇-水（75：25）；270nm丹酚酸B丹參甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；286nm馬錢苷山茱萸乙腈-水（15：85）；240nm綠原酸金銀花乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；327nm高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第21頁高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第22頁（三）、高效液相色譜分析方法建立普通步驟：

一個(gè)高效液相色譜分析方法建立，是由各種原因來決定，除了了解樣品性質(zhì)及試驗(yàn)室具備條件外，對液相色譜分離理論了解，對前人從事過相近工作借鑒以及分析工作者本身實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，都對分析方法建立起著主要影響。通常在確定被分析樣品以后，要建立一個(gè)高效液相分析方法必須處理以下問題：高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第23頁（1）依據(jù)所測成份性質(zhì)，制訂其分析純化方法。（2）依據(jù)被分析樣品特征，選擇適合用于樣品分析高效液相色譜分析方法。（3）由取得色譜圖進(jìn)行定性或定量分析。

高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第24頁（四）、高效液相色譜圖存在問題、原因及處理方法

液相色譜系統(tǒng)許多問題都能在譜圖上反應(yīng)出來。其中有一些問題能夠經(jīng)過改變設(shè)備參數(shù)得到處理；而其它問題必須經(jīng)過修改操作程序來處理。對于色譜柱和流動相正確選擇是得到好色譜圖關(guān)鍵。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第25頁峰拖尾高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第26頁原因1、流動相PH選擇不妥2、干擾峰3、樣品與填料表面殘留硅羥基發(fā)生反應(yīng)處理方法調(diào)整PH值。a、使用更長色譜柱。b、改變流動相或更換色譜柱。a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更換色譜柱高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第27頁峰前延高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第28頁原因1、樣品過載2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)3、柱溫低處理方法降低樣品含量。a、使用流動相作為樣品溶劑。升高柱溫高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第29頁高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第30頁

峰分叉高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第31頁原因1、保護(hù)柱或分析柱污染2、樣品溶劑不溶于流動相處理方法1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。改變樣品溶劑。高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第32頁保留時(shí)間波動高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用第33頁原