食品添加劑na-da安全性評價

食品添加劑na-da安全性評價

脫氫乙酸鈉（na-ha）是一種常見的食品添加劑。由于其良好的抗菌性、闡明性和細(xì)菌生長，它經(jīng)常被用作高效的光譜劑和抗菌劑。目前,由于Na-DHA的毒理學(xué)安全性資料國內(nèi)外都很缺乏,有關(guān)國家和國際組織均未提出其每日允許攝入量(ADI)11.1材料表面1.1.1脫氫乙酸鈉食品、飲料與服務(wù)食品添加劑Na-DHA購自南通奧凱生物技術(shù)開發(fā)有限公司,經(jīng)北京匯智泰康醫(yī)藥技術(shù)有限公司檢測,受試樣品符合GB25547—2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑脫氫乙酸鈉》1.1.2動物房和生態(tài)環(huán)境材料無特定病原體(SPF級)健康昆明小鼠50只,雌雄各半,體質(zhì)量為25～27g,購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)許可證號:SCXK(京)2016-0006。使用匯智泰康生物技術(shù)(北京)有限公司動物房,級別:屏障環(huán)境,許可證號:SYXK(京)2018-0009。飼養(yǎng)環(huán)境的溫度為18～25℃,濕度為60%。小鼠維持飼料購自斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)許可證號:SCXK(京)2015-0015。1.1.3菌株和菌株的培養(yǎng)方法鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株均購自北京匯智泰康醫(yī)藥技術(shù)有限公司,中國倉鼠卵巢(Chinesehamsterovary,CHO)細(xì)胞購自美國模式培養(yǎng)物集存庫(ATCC,CCL-61)。1.1.4遺傳掃描分析電子天平、低溫高速離心機(jī)、-80℃低溫冰箱、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、生物安全柜、生物光學(xué)顯微鏡、Imager.Z2遺傳掃描分析系統(tǒng)(德國Zeiss)。敵克松[sodiump(dimethylamino)benzenediazosulfonate,SDBS]、2-氨基芴(2-aminofluorene,2-AF)、疊氮鈉(NaN1.2方法1.2.1細(xì)菌回復(fù)突變試驗pmes試驗Ames試驗參照GB15193.4—20141.2.2胎盤紅細(xì)胞微測試微核試驗參照GB15193.5—20141.2.3體格檢查與母乳細(xì)胞皮膚感染畸形體外哺乳類細(xì)胞染色體畸變試驗參照GB15193.23—20141.3統(tǒng)計分析Ames試驗和微核試驗的數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差22.1na-1對ta97a、ta98、ta80、ta132和ta153的直接作用和代謝活化作用如表1所示,在+S9和-S9條件下,1667、556、185、62和21μg/皿劑量組Na-DHA對TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535的直接作用和代謝活化后的作用與自發(fā)回復(fù)突變組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(2.2細(xì)胞毒性試驗受試物各劑量組PCE/RBC比值不少于陰性對照組的20%,表明受試物在試驗劑量下無細(xì)胞毒性。無論雄性還是雌性小鼠,陽性對照組的微核發(fā)生率均高于陰性對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(2.3受試物對大鼠染色體畸變率的影響如表3所示,在+S9或-S9條件下處理6h后,陰性對照組、溶劑對照組和受試物各劑量組的染色體畸變率均小于5%。與陰性對照組比較,受試物各劑量組的染色體畸變率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(3ames試驗和鼠傷寒沙雖然,目前在GB2760—2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》遺傳毒性研究是食品安全毒理學(xué)評價中的重要部分,包含體內(nèi)試驗和體外試驗的遺傳毒性試驗組合,通過試驗?zāi)軌蜃R別受試物可能導(dǎo)致的DNA損傷、基因突變、染色體損傷等以及潛在的致癌作用。目前,Na-DHA的遺傳毒性研究十分有限,且相關(guān)試驗方法與現(xiàn)行國際指南存在較大差距,試驗結(jié)果的使用具有局限性。為了解決上述問題,本研究中采用ICH推薦的遺傳毒性試驗組合目前,Ames試驗已成為初步篩選化學(xué)物潛在致突變作用的首選方法,也是目前國際上檢測潛在致癌物普遍采用的篩選方法。Ames試驗有不同的突變菌株,其檢出能力不一,試驗中需配套進(jìn)行,其中TA97a(或TA97、TA1537)、TA98、TA100、TA1535用于檢測GC類型的突變,TA102(或WP2uvrA、WP2uvrApKM101)用于檢測AT類型的突變,因此在OECD和GB15193系列標(biāo)準(zhǔn)中均提出需涵蓋以上5種類型菌株的Ames試驗,才可以檢測到幾乎所有類型的突變。本研究開展的Ames試驗選用國際指南推薦的鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535五株菌株,發(fā)現(xiàn)5000μg/皿存在明顯抑菌作用,故采用1667μg/皿為最高劑量,結(jié)果顯示Na-DHA無致突變性。這與杜玉鋒微核試驗是在染色體分析方法基礎(chǔ)上由MATTER和SCHMID于20世紀(jì)70年代初首創(chuàng)的檢測遺傳損傷的方法,主要檢測化學(xué)或物理因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體分離異常與染色體完整性異常兩種遺傳學(xué)終點,微核率的高低可反映DNA損傷的程度,進(jìn)一步反映致癌的可能性。以往研究中,HAYASHI等體外染色體畸變試驗是評價化合物潛在致癌作用和致畸作用的重要遺傳毒性評價方法,該方法就細(xì)胞染色體具體結(jié)構(gòu)和數(shù)目變化進(jìn)行觀察,在了解受試物對染色體的作用機(jī)制和特點方面具有不可替代的意義。ISHIDATE等