食品添加劑na-da安全性評(píng)價(jià)

食品添加劑na-da安全性評(píng)價(jià)

脫氫乙酸鈉（na-ha）是一種常見的食品添加劑。由于其良好的抗菌性、闡明性和細(xì)菌生長，它經(jīng)常被用作高效的光譜劑和抗菌劑。目前,由于Na-DHA的毒理學(xué)安全性資料國內(nèi)外都很缺乏,有關(guān)國家和國際組織均未提出其每日允許攝入量(ADI)11.1材料表面1.1.1脫氫乙酸鈉食品、飲料與服務(wù)食品添加劑Na-DHA購自南通奧凱生物技術(shù)開發(fā)有限公司,經(jīng)北京匯智泰康醫(yī)藥技術(shù)有限公司檢測(cè),受試樣品符合GB25547—2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑脫氫乙酸鈉》1.1.2動(dòng)物房和生態(tài)環(huán)境材料無特定病原體(SPF級(jí))健康昆明小鼠50只,雌雄各半,體質(zhì)量為25～27g,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2016-0006。使用匯智泰康生物技術(shù)(北京)有限公司動(dòng)物房,級(jí)別:屏障環(huán)境,許可證號(hào):SYXK(京)2018-0009。飼養(yǎng)環(huán)境的溫度為18～25℃,濕度為60%。小鼠維持飼料購自斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2015-0015。1.1.3菌株和菌株的培養(yǎng)方法鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株均購自北京匯智泰康醫(yī)藥技術(shù)有限公司,中國倉鼠卵巢(Chinesehamsterovary,CHO)細(xì)胞購自美國模式培養(yǎng)物集存庫(ATCC,CCL-61)。1.1.4遺傳掃描分析電子天平、低溫高速離心機(jī)、-80℃低溫冰箱、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、生物安全柜、生物光學(xué)顯微鏡、Imager.Z2遺傳掃描分析系統(tǒng)(德國Zeiss)。敵克松[sodiump(dimethylamino)benzenediazosulfonate,SDBS]、2-氨基芴(2-aminofluorene,2-AF)、疊氮鈉(NaN1.2方法1.2.1細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)pmes試驗(yàn)Ames試驗(yàn)參照GB15193.4—20141.2.2胎盤紅細(xì)胞微測(cè)試微核試驗(yàn)參照GB15193.5—20141.2.3體格檢查與母乳細(xì)胞皮膚感染畸形體外哺乳類細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)參照GB15193.23—20141.3統(tǒng)計(jì)分析Ames試驗(yàn)和微核試驗(yàn)的數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差22.1na-1對(duì)ta97a、ta98、ta80、ta132和ta153的直接作用和代謝活化作用如表1所示,在+S9和-S9條件下,1667、556、185、62和21μg/皿劑量組Na-DHA對(duì)TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535的直接作用和代謝活化后的作用與自發(fā)回復(fù)突變組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.2細(xì)胞毒性試驗(yàn)受試物各劑量組PCE/RBC比值不少于陰性對(duì)照組的20%,表明受試物在試驗(yàn)劑量下無細(xì)胞毒性。無論雄性還是雌性小鼠,陽性對(duì)照組的微核發(fā)生率均高于陰性對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.3受試物對(duì)大鼠染色體畸變率的影響如表3所示,在+S9或-S9條件下處理6h后,陰性對(duì)照組、溶劑對(duì)照組和受試物各劑量組的染色體畸變率均小于5%。與陰性對(duì)照組比較,受試物各劑量組的染色體畸變率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(3ames試驗(yàn)和鼠傷寒沙雖然,目前在GB2760—2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》遺傳毒性研究是食品安全毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的重要部分,包含體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)的遺傳毒性試驗(yàn)組合,通過試驗(yàn)?zāi)軌蜃R(shí)別受試物可能導(dǎo)致的DNA損傷、基因突變、染色體損傷等以及潛在的致癌作用。目前,Na-DHA的遺傳毒性研究十分有限,且相關(guān)試驗(yàn)方法與現(xiàn)行國際指南存在較大差距,試驗(yàn)結(jié)果的使用具有局限性。為了解決上述問題,本研究中采用ICH推薦的遺傳毒性試驗(yàn)組合目前,Ames試驗(yàn)已成為初步篩選化學(xué)物潛在致突變作用的首選方法,也是目前國際上檢測(cè)潛在致癌物普遍采用的篩選方法。Ames試驗(yàn)有不同的突變菌株,其檢出能力不一,試驗(yàn)中需配套進(jìn)行,其中TA97a(或TA97、TA1537)、TA98、TA100、TA1535用于檢測(cè)GC類型的突變,TA102(或WP2uvrA、WP2uvrApKM101)用于檢測(cè)AT類型的突變,因此在OECD和GB15193系列標(biāo)準(zhǔn)中均提出需涵蓋以上5種類型菌株的Ames試驗(yàn),才可以檢測(cè)到幾乎所有類型的突變。本研究開展的Ames試驗(yàn)選用國際指南推薦的鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535五株菌株,發(fā)現(xiàn)5000μg/皿存在明顯抑菌作用,故采用1667μg/皿為最高劑量,結(jié)果顯示Na-DHA無致突變性。這與杜玉鋒微核試驗(yàn)是在染色體分析方法基礎(chǔ)上由MATTER和SCHMID于20世紀(jì)70年代初首創(chuàng)的檢測(cè)遺傳損傷的方法,主要檢測(cè)化學(xué)或物理因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體分離異常與染色體完整性異常兩種遺傳學(xué)終點(diǎn),微核率的高低可反映DNA損傷的程度,進(jìn)一步反映致癌的可能性。以往研究中,HAYASHI等體外染色體畸變?cè)囼?yàn)是評(píng)價(jià)化合物潛在致癌作用和致畸作用的重要遺傳毒性評(píng)價(jià)方法,該方法就細(xì)胞染色體具體結(jié)構(gòu)和數(shù)目變化進(jìn)行觀察,在了解受試物對(duì)染色體的作用機(jī)制和特點(diǎn)方面具有不可替代的意義。ISHIDATE等