第二十四章反義藥物課件

第二十四章反義藥物第二十四章反義藥物反義藥物反義技術(shù)簡(jiǎn)介反義核酸類藥物的特點(diǎn)反義核酸類藥物的功用反義核酸類藥物的作用機(jī)理反義核酸類藥物的通用生產(chǎn)方法與技術(shù)典型反義核酸類藥物生產(chǎn)技術(shù)及工藝反義類藥物的發(fā)展前景與展望結(jié)束反義藥物反義技術(shù)簡(jiǎn)介結(jié)束反義技術(shù)簡(jiǎn)介定義反義核酸技術(shù)的機(jī)理歷史主頁(yè)反義核酸技術(shù)反義技術(shù)簡(jiǎn)介定義反義核酸技術(shù)的機(jī)理歷史主頁(yè)反義核酸技術(shù)反義技術(shù)的定義反義技術(shù)（antisensetechnology）就是采用反義核酸分子抑制、封閉或破壞靶基因的技術(shù)。返回反義技術(shù)的定義反義技術(shù)（antisensetechnolo抑制mRNA翻譯：a：RNA與核糖體作用的空間位阻；b：阻礙mRNA從核內(nèi)到細(xì)胞質(zhì)的通道；c：與目標(biāo)序列結(jié)合；d：RNaseH酶裂解目標(biāo)mRNA反義核酸作用機(jī)理返回

mRNA

翻譯蛋白質(zhì)mRNA

翻譯

蛋白質(zhì)前體-mRNADNA轉(zhuǎn)錄反義寡脫氧核苷酸抑制mRNA翻譯：反義核酸作用機(jī)理返回反義核酸技術(shù)的歷史返回時(shí)間/年事件人或機(jī)構(gòu)1953首次提出“反義”定義Watson1957三螺旋核酸概念的提出Davies1969第一代反義核酸藥物（福米韋生，F(xiàn)omivirsen）誕生Isis制藥公司1978首次應(yīng)用合成的寡核苷酸成功的抑制基因的表達(dá)Zamenick和Stephenson1980ColE1DNA復(fù)制研究中發(fā)現(xiàn)反義調(diào)節(jié)機(jī)制Itoh和Tomizawa1981第二代反義核酸藥物Hybridon公司1984首次提出反義核酸可用于下調(diào)原核生物與真核生物基因的表達(dá)Coleman等1987首次報(bào)道反義鏈下調(diào)一種細(xì)菌基因的表達(dá)Rothstein1988首次報(bào)道反義基因下調(diào)一種植物基因的表達(dá)VanderKrol1988一段27bp的三鏈結(jié)構(gòu)寡核苷酸序列特異性抑制c-myc的轉(zhuǎn)錄Cooey1990首次報(bào)道正義基因下調(diào)植物基因的表達(dá)Napoli和VanderKrol1997反義P120抑制MIAPaCa-2細(xì)胞Freeman反義核酸技術(shù)的歷史返回時(shí)間/年事件人或機(jī)構(gòu)1953首次提反義核酸技術(shù)的歷史1978年已第一次成功地應(yīng)用合成的寡核苷酸來(lái)調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。隨著反義技術(shù)的發(fā)展和成熟，其已被逐漸應(yīng)用于治療各種疾病的研究。第一個(gè)反義寡核苷酸藥物福米韋新已經(jīng)在美國(guó)和歐洲獲準(zhǔn)上市，該藥物主要用于治療一些艾滋病患者的巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎，這些患者往往對(duì)其它治療方案不能耐受，或是有禁忌癥或普通藥物沒(méi)有明顯效果等。返回反義核酸技術(shù)的歷史1978年已第一次成功地應(yīng)用合成的寡核苷酸反義核酸技術(shù)的歷史Itoh和Tomizawa（1980）在研究ColE1的實(shí)驗(yàn)中，最先發(fā)現(xiàn)自然界存在“天然”反義RNA。上述發(fā)現(xiàn)不僅從一個(gè)角度證實(shí)了“天然”的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型中反義鏈在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的指導(dǎo)作用，而且它就像掀去一層又一層薄薄的面紗，展示給人們一個(gè)朦朧神奇、奧妙無(wú)窮的新的研究領(lǐng)域，從而曾強(qiáng)了人們深入研究反義基因、反義寡核苷酸的信心。此后，寡核苷酸合成技術(shù)的發(fā)展、DNA合成儀的出現(xiàn)，如此種種新技術(shù)的推波助瀾使反義領(lǐng)域里的研究碩果累累，樹(shù)立起了一個(gè)個(gè)里程碑。返回反義核酸技術(shù)的歷史Itoh和Tomizawa（1980）在研反義核酸技術(shù)反義RNA根據(jù)其作用機(jī)制可將其分為3類①反義RNA直接作用于靶mRNA的SD序列和（或）部分編碼區(qū)，直接抑制翻譯，或與靶mRNA結(jié)合形成雙鏈RNA，從而易被RNA酶Ⅲ降解；②反義RNA與mRNA的非編碼區(qū)結(jié)合，引起mRNA的象變化，抑制降解；③反義RNA直接抑制靶mRNA的轉(zhuǎn)錄。返回反義核酸技術(shù)反義RNA返回反義核酸技術(shù)反義DNA

反義DNA是指一段能與特定的DNA或RNA以堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式結(jié)合，并阻止其轉(zhuǎn)錄和翻譯的短核酸片段，主要指反義寡核苷酸，因具重要應(yīng)用價(jià)值而備受重視。返回反義核酸技術(shù)反義DNA返回反義核酸技術(shù)核酶（ribozyme）是具有酶活性的RNA，主要參加RNA的加工與成熟。天然核酶可分為四類：①異體催化剪切型，如RNaseP；②自主催化剪切型，如植物類病毒，擬病毒和衛(wèi)星RNA；③第一組內(nèi)含子自我剪接型；如四膜蟲(chóng)大核26SrRNA；④第二組內(nèi)含子剪接型。返回反義核酸技術(shù)核酶（ribozyme）是具有酶活性的RNA，主反義核酸技術(shù)的歷史反義寡核苷酸與靶序列結(jié)合是其發(fā)揮效應(yīng)的第一步，研究?jī)烧呓Y(jié)合的理論機(jī)制包括親和性、特異性、核酸選擇性及核酸空間結(jié)構(gòu)等問(wèn)題。反義核酸（寡核苷酸）抑制基因表達(dá)的機(jī)理是關(guān)鍵性理論問(wèn)題，人們也已提出種種理論模型（學(xué)說(shuō)）：占位抑制、轉(zhuǎn)錄抑制、拼接抑制、翻譯抑制、占位失衡及空間結(jié)構(gòu)學(xué)說(shuō)、5’端加帽阻抑、3’多腺嘌呤核苷酸化抑制、RNA酶H激活等。天然反義寡核苷酸的作用弱而短暫，如何進(jìn)行結(jié)構(gòu)上的化學(xué)修飾使其透膜性增強(qiáng)、防止被酶水解、提高其抑制效應(yīng)具有重要意義，目前已找到一些有效的修飾方法，如硫代、甲基化等。返回反義核酸技術(shù)的歷史反義寡核苷酸與靶序列結(jié)合是其發(fā)揮效應(yīng)的第一反義核酸技術(shù)的歷史既然存在反義核酸，核酸指導(dǎo)編碼合成的蛋白質(zhì)是否也存在反義呢？這當(dāng)然是一種科學(xué)的假設(shè)，研究業(yè)已證實(shí)不僅存在反義蛋白質(zhì)，而且它與反義核酸一起在世界上已形成一門(mén)獨(dú)特的新技術(shù)----反義技術(shù)（antisensetechnology）。當(dāng)前反義藥物治療肺癌大規(guī)模臨床試驗(yàn)失敗。返回反義核酸技術(shù)的歷史既然存在反義核酸，核酸指導(dǎo)編碼合成的蛋白質(zhì)反義核酸技術(shù)的應(yīng)用在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究領(lǐng)域中的應(yīng)用在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用目前唯一被美國(guó)食品與藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)上市的反義ODN藥物是Isis制藥公司生產(chǎn)的福米韋生（ISIS2922），此藥由21個(gè)硫代磷酸酯寡聚脫氧核苷酸組成，核苷酸序列為5’-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGC-3’，主要用于治療艾滋病患者并發(fā)的巨細(xì)胞病毒（CMV）性視網(wǎng)膜炎。在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用返回反義核酸技術(shù)的應(yīng)用在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究領(lǐng)域中的應(yīng)用返回反義核酸類藥物的特點(diǎn)反義核酸藥物的優(yōu)點(diǎn)反義藥物的體內(nèi)穩(wěn)定性和副作用反義核酸類藥物必須符合的條件主頁(yè)反義核酸類藥物的特點(diǎn)反義核酸藥物的優(yōu)點(diǎn)反義藥物的體內(nèi)穩(wěn)定性和反義核酸藥物的優(yōu)點(diǎn)高度特異性原則上，反義技術(shù)可以針對(duì)任何已知序列的基因設(shè)計(jì)藥物來(lái)特異地抑制其表達(dá)。高效最優(yōu)化藥物設(shè)計(jì)安全低毒反義寡核苷酸尚未發(fā)現(xiàn)顯著毒性，盡管它在生物體內(nèi)的存留時(shí)間有長(zhǎng)有短，但最終都將被降解清除，這避免了如轉(zhuǎn)基因療法中外源基因整合到宿主染色體上的危險(xiǎn)性。經(jīng)濟(jì)方便反義藥物的合成是相對(duì)容易的返回反義核酸藥物的優(yōu)點(diǎn)高度特異性返回反義藥物的體內(nèi)穩(wěn)定性和副作用根據(jù)現(xiàn)有的臨床結(jié)果，無(wú)論是從療效、短期毒性、藥代動(dòng)力學(xué)，還是從應(yīng)用的廣泛性來(lái)看，反義藥物都有望成為常規(guī)藥物。穩(wěn)定性反義藥物在細(xì)胞內(nèi)常常被內(nèi)源性核酸酶降解，其穩(wěn)定性一直是反義基因治療的瓶頸之一。一種新近發(fā)展起來(lái)的技術(shù)是選擇功能強(qiáng)大的啟動(dòng)子構(gòu)建真核表達(dá)載體，在細(xì)胞內(nèi)源源不斷地轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生反義片段，不失為反義給藥的一種新途徑。副作用反義藥物的主要副作用根據(jù)毒發(fā)原因可分為兩類：一類是以藥效學(xué)為基礎(chǔ)的毒性，是其反義作用過(guò)強(qiáng)或與非靶基因產(chǎn)生反義作用而導(dǎo)致的毒性；另一類毒性是寡核苷酸與其它分子（如蛋白質(zhì)）非特異性相互作用的結(jié)果，主要有補(bǔ)體激活、免疫刺激、凝血時(shí)間長(zhǎng)、肝腎毒性、致死性的血液動(dòng)力學(xué)改變等。為克服這些缺陷，常對(duì)藥物分子進(jìn)行修飾（如封閉硫代磷酸鏈中的多陰離子），采用局部給藥方式，或選擇合適而專一的作用靶點(diǎn)，以提高藥物治療的選擇性。長(zhǎng)期毒性返回反義藥物的體內(nèi)穩(wěn)定性和副作用根據(jù)現(xiàn)有的臨床結(jié)果，無(wú)論是從療效反義核酸類藥物必須符合的條件選擇性一般而言，只要人工設(shè)計(jì)合成12個(gè)堿基以上基因序列的反義DNA或反義RNA（即反義寡脫氧核苷酸或反義寡核苷酸），就足以使此反義核酸與靶mRNA形成結(jié)合作用，且這種結(jié)合調(diào)節(jié)是非常特異性的。穩(wěn)定性人們需對(duì)反義核酸的結(jié)構(gòu)進(jìn)行化學(xué)修飾以提高其穩(wěn)定性，增加對(duì)核酸酶的抗性。溶解性由于ASON帶負(fù)電荷且有較強(qiáng)的親水性，因此不易與帶同樣電荷的靶細(xì)胞接觸，更不易透過(guò)由磷酯質(zhì)雙分子層構(gòu)成的細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。返回反義核酸類藥物必須符合的條件選擇性返回化學(xué)修飾堿基修飾在胞嘧啶的5號(hào)位點(diǎn)進(jìn)行甲基化是最常用的堿基修飾手法骨架修飾核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵連接成核酸或ASODN，磷酸二酯鍵是受核酸酶作用（水解）的敏感位點(diǎn)，在體內(nèi)生理?xiàng)l件下半衰期僅數(shù)分鐘。可將此骨架換成聚酰胺(nylon)、嗎啡啉(mophilin)、碳胺酯(carbamate)或肽骨架(peptide)，它們不僅非常穩(wěn)定，而且也有相當(dāng)?shù)目共《净钚?。研究得最多的化學(xué)修飾即是磷原子，如硫代、甲基化、胺化和酯化等。α-構(gòu)型修飾主頁(yè)化學(xué)修飾堿基修飾主頁(yè)反義核酸類藥物的功用在癌癥治療方面在抗病毒方面在心血管疾病方面在神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面主頁(yè)反義核酸類藥物的功用在癌癥治療方面在抗病毒方面在心血管疾病方在癌癥治療方面對(duì)反義藥物特異性抑制癌基因的表達(dá)，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖的研究已取得成功，已完成二期臨床的PKC-α（蛋白激酶-C）反義化合物，可使卵巢癌患者的盆腔腫塊消退，使結(jié)腸癌的癌胚抗原（CEA）維持穩(wěn)定。返回在癌癥治療方面對(duì)反義藥物特異性抑制癌基因的表達(dá)，進(jìn)而抑制腫瘤在抗病毒方面Abdou等又驗(yàn)證了在人腸癌細(xì)胞含腸冠狀病毒基因間同感序列的峰形蛋白mRNA起始編碼區(qū)完全互補(bǔ)的18聚反義ODN的抗病毒活性，磷酸二酯ODN病毒抑制率為12%-34%，而經(jīng)修飾的硫代磷酸以p-環(huán)糊精衍生物為載體的磷酸二酯ODN病毒抑制率為56%-90%。返回在抗病毒方面Abdou等又驗(yàn)證了在心血管疾病方面1988年，SuganoM研究了以去唾液酸糖蛋白（A-SOR）載體分子偶合的反義ODN與膽固醇喂養(yǎng)的兔子動(dòng)脈粥樣硬化間的關(guān)系。

結(jié)果表明，注射反義ODN與對(duì)照組和正義ODN(SenseODN)相比較，不僅膽甾型酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）mRNA減少和低密度脂蛋白（LDL）受體mRNA增加，而且主動(dòng)脈膽固醇含量及主動(dòng)脈表面積病變百分率顯著降低，有效抑制主動(dòng)脈粥樣硬化和發(fā)展。返回在心血管疾病方面1988年，SuganoM研在神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面有文獻(xiàn)報(bào)道反義ODN在治療阿爾茨海默病和腦獲得性免疫缺陷綜合癥的效果。

隨著神經(jīng)細(xì)胞和器官培養(yǎng)技術(shù)的進(jìn)展，反義ODN在腦研究和神經(jīng)性疾病治療方面也將取得廣泛的應(yīng)用。返回在神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面有文獻(xiàn)報(bào)道反義ODN在治療阿爾茨反義核酸類藥物的作用機(jī)理反義核酸的作用靶點(diǎn)反義核酸的作用機(jī)制主頁(yè)反義核酸類藥物的作用機(jī)理反義核酸的作用靶點(diǎn)反義核酸的作用機(jī)制反義核酸的作用靶點(diǎn)反義核酸通過(guò)Watson-Crick堿基配對(duì)或通過(guò)與基因上特定序列形成三股螺旋來(lái)下調(diào)某一特定基因的表達(dá)，已確定反義核酸可在mRNA的轉(zhuǎn)錄、剪接、加工、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯及降解等各個(gè)環(huán)節(jié)起作用。DNA復(fù)制水平DNA復(fù)制時(shí)需要一段適當(dāng)?shù)腞NA引物，而反義核酸可以和引物互補(bǔ)結(jié)合，使引物不能以適當(dāng)?shù)臉?gòu)象結(jié)合到DNA模板上，從而使復(fù)制受到抑制。轉(zhuǎn)錄水平三鏈寡核苷酸（triplex-formingoligonucletide，TFO）可與基因DNA雙螺旋的調(diào)控區(qū)特異結(jié)合形成DNA三螺旋結(jié)構(gòu)，抑制基因的轉(zhuǎn)錄。反義DNA可與基因組DNA結(jié)合反義核酸與靶mRNA形成的DNA-RNA復(fù)合物反義核酸的另一作用方式是與靶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA前體的特殊序列形成雙鏈，阻礙mRNA前體的加帽、拼接、加polyA尾及向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。返回反義核酸的作用靶點(diǎn)反義核酸通反義核酸的作用靶點(diǎn)抑制轉(zhuǎn)錄后mRNA的剪接和成熟如5’端加帽、3’端加尾（polyA）和pre-RNA的剪接等。阻止mRNA由細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)運(yùn)輸寡核苷酸可進(jìn)入細(xì)胞核，在核內(nèi)與靶mRNA或pre-mRNA結(jié)合，阻止它們由細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)的運(yùn)輸。翻譯水平反義核酸一方面可以通過(guò)與靶mRNA結(jié)合形成空間位阻效應(yīng)，阻止核糖體與mRNA結(jié)合或核糖體在mRNA上的移動(dòng)（翻譯捕獲）；另一方面在與mRNA結(jié)合后可激活內(nèi)源性RNase或核酶，降解mRNA。返回反義核酸的作用靶點(diǎn)抑制轉(zhuǎn)錄后mRNA的剪接和成熟返回反義核酸的作用靶點(diǎn)占位介導(dǎo)的機(jī)制傳統(tǒng)的受體-拮抗劑理論是指通過(guò)阻止受體的天然激動(dòng)劑的結(jié)合來(lái)改變其生物學(xué)活性。占位激活的降解降解機(jī)制是指通過(guò)激活RNase來(lái)降解靶mRNA，如激活RNaseH，也可激活其它RNase如RNaseⅢ、RNaseL、RNaseP等。另一方面可利用RNA分子調(diào)節(jié)自身代謝的能力來(lái)影響其穩(wěn)定性，如阻止mRNA的5’加帽、3’polyA加尾，結(jié)合在mRNA5’和3’非翻譯區(qū)來(lái)降低mRNA的穩(wěn)定性。反義作用也可以通過(guò)不同的機(jī)制共同起作用。另外，骨架的修飾也會(huì)影響寡核苷酸激活RNaseH的能力，如甲基磷酸酯化合物不能激活RNaseH，硫代磷酸化合物（PS-ODN）卻是RNaseH很好的底物。返回反義核酸的作用靶點(diǎn)占位介導(dǎo)的機(jī)制返回反義核酸類藥物的通用生產(chǎn)方法與技術(shù)反義核酸藥物的設(shè)計(jì)反義核酸藥物的生產(chǎn)方法核酶轉(zhuǎn)錄單位反義核酸藥物的給藥途徑主頁(yè)反義核酸類藥物的通用生產(chǎn)方法與技術(shù)反義核酸藥物的設(shè)計(jì)反義核酸反義核酸藥物的設(shè)計(jì)靶位點(diǎn)的選擇非Watson-Crick堿基對(duì)的應(yīng)用核酶轉(zhuǎn)錄單位反義核酸藥物的給藥途徑主頁(yè)反義核酸藥物的設(shè)計(jì)靶位點(diǎn)的選擇非Watson-Crick堿基靶位點(diǎn)的選擇準(zhǔn)確地選擇反義藥物的作用位點(diǎn)至今仍很困難。最近提出了一個(gè)比較理想的“二步走”方案：①RNA酶H掃描作圖粗篩，針對(duì)mRNA目標(biāo)部位構(gòu)建反義ON分子庫(kù)，與mRNA雜交后，以RNA酶H降解來(lái)掃描結(jié)合位點(diǎn)；②序列點(diǎn)陣技術(shù)優(yōu)化最佳結(jié)合位點(diǎn)，用組合化學(xué)技術(shù)合成針對(duì)某個(gè)區(qū)域的所有可能的反義ON，與標(biāo)記的mRNA雜交，測(cè)出其中特異性最強(qiáng)、親和力最高的反義ON。返回靶位點(diǎn)的選擇準(zhǔn)確地選擇反義藥物的作用位點(diǎn)至今仍很困難。返非Watson-Crick堿基對(duì)的應(yīng)用天然mRNA分子如tRNA、5SRNA和錘頭核酶等都存在著多種形式的非Watson-Crick堿基對(duì)；一些能形成分子間RNA/RNA二聚體的天然反義RNA也并不與目標(biāo)RNA完全互補(bǔ)。這種現(xiàn)象為反義藥物的設(shè)計(jì)提供了有益的啟示：非Watson-Crick堿基對(duì)有可能增加核酸分子雜交的特異性和穩(wěn)定性。返回非Watson-Crick堿基對(duì)的應(yīng)用天然mRNA分子如tR核酶轉(zhuǎn)錄單位天然mRNA分子如tRNA、5SRNA和錘頭核酶等都存在著多種形式的非Watson-Crick堿基對(duì)；一些能形成分子間RNA/RNA二聚體的天然反義RNA也并不與目標(biāo)RNA完全互補(bǔ)。這種現(xiàn)象為反義藥物的設(shè)計(jì)提供了有益的啟示：非Watson-Crick堿基對(duì)有可能增加核酸分子雜交的特異性和穩(wěn)定性。返回核酶轉(zhuǎn)錄單位天然mRNA分子如tRNA、5SRNA和錘頭核酶反義核酸藥物的給藥途徑ASODN通過(guò)胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，主要分布于細(xì)胞器中，如溶酶體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，的但ASODN真正的作用位點(diǎn)在胞漿和胞核內(nèi)，所以起不到真正的作用；另一方面ASODN易受到核酸酶等物質(zhì)的分解，而造成穩(wěn)定性差。反義藥物是聚陰離子的大分子物質(zhì)，不能通過(guò)生物屏障，因此必須尋找一種有效的給藥方式。返回反義核酸藥物的給藥途徑ASODN通過(guò)胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，主要反義核酸藥物的給藥途徑反義藥物在體內(nèi)和體外研究工作中的主要區(qū)別在于給藥的方法：以聚合物微球?yàn)檩d體輸送系統(tǒng)樹(shù)枝狀高聚物樹(shù)枝狀高聚物（dendrimers,DEN）是一種新的超分子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)脂質(zhì)體、脂質(zhì)復(fù)合物和兩性陽(yáng)離子受體介導(dǎo)將核酶與抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體(TEA)結(jié)合，可使其細(xì)胞攝取效率提高3倍載體肽介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了多種具有蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)的蛋白質(zhì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的給藥已有許多不同的靶基因被成功的抑制，如營(yíng)養(yǎng)因子口服給藥返回反義核酸藥物的給藥途徑反義藥物在體內(nèi)和體外研究工作中的主要區(qū)反義核酸藥物的生產(chǎn)方法設(shè)計(jì)合成反義序列化學(xué)修飾水溶性與脂溶性的平衡主頁(yè)反義核酸藥物的生產(chǎn)方法設(shè)計(jì)合成反義序列化學(xué)修飾水溶性與脂溶性設(shè)計(jì)合成反義序列反義核酸類藥物生產(chǎn)目前主要是采用化學(xué)合成法進(jìn)行。一般而言，只要人工設(shè)計(jì)合成12個(gè)堿基以上基因序列的反義DNA或反義RNA（即反義寡脫氧核苷酸或反義寡核苷酸），就足以使此反義核酸與靶mRNA形成結(jié)合作用，且這種結(jié)合調(diào)節(jié)是非常特異性的。返回設(shè)計(jì)合成反義序列反義核酸類藥物生產(chǎn)目前主要是化學(xué)修飾人們需對(duì)反義核酸的結(jié)構(gòu)進(jìn)行化學(xué)修飾以提高其穩(wěn)定性，增加對(duì)核酸酶的抗性。核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵連接成核酸或ASODN，磷酸二酯鍵是受核酸酶作用（水解）的敏感位點(diǎn)，在體內(nèi)生理?xiàng)l件下半衰期僅數(shù)分鐘。可將此骨架換成聚酰胺(nylon)、嗎啡啉(mophilin)、碳胺酯(carbamate)或肽骨架(peptide)，它們不僅非常穩(wěn)定，而且也有相當(dāng)?shù)目共《净钚?。返回化學(xué)修飾人們需對(duì)反義核酸的結(jié)構(gòu)進(jìn)行化學(xué)修飾以提高其穩(wěn)定性，增水溶性與脂溶性的平衡

由于ASON帶負(fù)電荷且有較強(qiáng)的親水性，因此不易與帶同樣電荷的靶細(xì)胞接觸，更不易透過(guò)由磷酯質(zhì)雙分子層構(gòu)成的細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。返回水溶性與脂溶性的平衡由于ASON帶負(fù)電荷且有典型反義核酸類藥物生產(chǎn)技術(shù)及工藝混合反義核酸的生產(chǎn)方法及工藝混合反義藥物合成工藝規(guī)?；a(chǎn)主頁(yè)典型反義核酸類藥物生產(chǎn)技術(shù)及工藝混合反義核酸的生產(chǎn)方法及工藝反義核酸藥物的給藥途徑一種治療癌癥的混合反義核酸的生產(chǎn)方法及工藝，該反義核酸由三種反義寡核苷酸等質(zhì)量構(gòu)成。這三種反義寡核苷酸的序列如下：①c-myc反義核苷5’-CACCGAGGGGTCGATGCACT3’.②c-myb反義核苷5’-AGGTAGCAGCTTCAGGGGAC3’.③bcr-abl反義核苷5’-CTGAAGGGCTTCTTCCTTAT3’.返回反義核酸藥物的給藥途徑一種治療癌癥的混合反義核酸的生產(chǎn)方法及混合反義藥物合成工藝應(yīng)用全自動(dòng)DNA合成儀自動(dòng)合成和色譜分離制備該混合反義核酸藥物的工藝如下：應(yīng)用美國(guó)AppliedBiosystems公司出品的ABI392全自動(dòng)DNA合成儀自動(dòng)合成，合成條件嚴(yán)格按照該機(jī)的操作手冊(cè)進(jìn)行，所得粗產(chǎn)品，收集于4ml的玻璃瓶中。合成粗產(chǎn)品用真空離心方法（42℃）使氫氧化銨揮發(fā)，并用酒精萃取兩次，干燥后溶于10mmol/LTris-HCl、0.4mmol/LEDTA(pH7.6)的混