2023年新冠核酸檢測(cè)要點(diǎn)總結(jié)（）（完整文檔）

2023年新冠核酸檢測(cè)要點(diǎn)總結(jié)（）（完整文檔）下面是我為大家整理的新冠核酸檢測(cè)要點(diǎn)總結(jié)（2023）（完整文檔）,供大家參考。

XXXX醫(yī)院新冠核酸檢測(cè)要點(diǎn)總結(jié)（2023）

一、SARS-CoV-2核酸檢測(cè)的原理二、核酸檢測(cè)對(duì)于SARS-CoV-2檢測(cè)的意義三、實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行SARS-CoV-2核酸檢測(cè)的條件和要求四、SARS-CoV-2核酸測(cè)定（實(shí)時(shí)熒光RT-PCR）關(guān)鍵環(huán)節(jié)五、SARS-CoV-2核酸測(cè)定（實(shí)時(shí)熒光RT-PCR）結(jié)果判讀六、SARS-CoV-2檢測(cè)出現(xiàn)假陰性的原因七、如何降低SARS-CoV-2核酸檢測(cè)假陰性八、康復(fù)出院患者SARS-CoV-2核酸檢測(cè)復(fù)檢陽性原因九、總結(jié)

嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）可引起新型冠狀病毒肺炎（COVID-19），目前已在全球范圍內(nèi)廣泛流行。

疫情暴發(fā)初期，因發(fā)展迅速，對(duì)疑似患者進(jìn)行快速確診是防治COVID-19的關(guān)鍵，部分獲批的核酸檢測(cè)試劑研發(fā)時(shí)間短，存在性能確認(rèn)倉促、試劑優(yōu)化不充分以及批間差異大等問題；各臨床實(shí)驗(yàn)室在開展核酸檢測(cè)過程的各個(gè)環(huán)節(jié)中存在的問題也可能影響核酸檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文將圍繞目前SARS-CoV-2核酸檢測(cè)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及要點(diǎn)進(jìn)行評(píng)述，并對(duì)實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)與臨床不符假陰性和復(fù)檢陽性的問題進(jìn)行分析。

一、SARS--CoV--22核酸檢測(cè)的原理

SARS-CoV-2是一種RNA病毒，基因組序列約29kb，擁有10個(gè)基因，可有效編碼10個(gè)蛋白。病毒由RNA和蛋白構(gòu)成，最外層是由脂質(zhì)和糖蛋白組成的包膜外衣，里面蛋白衣殼將RNA包裹在其中，從而使容易降解的RNA得到保護(hù)。

病毒通過特定細(xì)胞表面受體入侵細(xì)胞造成感染，并利用宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制。

病毒核酸檢測(cè)的原理就是通過細(xì)胞裂解液，讓病毒的RNA裸露出來，然后用實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)原理最關(guān)鍵的是利用引物和探針來實(shí)現(xiàn)核酸序列的靶向匹配，即尋找SARS-CoV-2約3萬個(gè)堿基中區(qū)別于其他病毒的核酸序列（與其他病毒核酸相似度低的區(qū)域），設(shè)計(jì)引物和探針。

引物和探針與SARS-CoV-2核酸特定區(qū)域高度匹配，即特異性很強(qiáng)，一但待檢樣本實(shí)時(shí)熒光RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果為陽性，則證明該樣本中存在SARS-CoV-2。

二、核酸檢測(cè)對(duì)于SARS--CoV--22檢測(cè)的意義

依據(jù)《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》要求：

疑似病例同時(shí)具備以下病原學(xué)或血清學(xué)證據(jù)之一者：

1.實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)新型冠狀病毒核酸陽性；2.病毒基因測(cè)序，與已知的新型冠狀病毒高度同源；3.新型冠狀病毒特異性IgM抗體和IgG抗體陽性；4.新型冠狀病毒特異性IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性或恢復(fù)期IgG抗體滴度較急性期呈4倍及以上升高。

因此，SARS-CoV-2核酸檢測(cè)（實(shí)時(shí)熒光RT-PCR）結(jié)果陽性是確診感染的重要證據(jù)之一；但如果檢測(cè)結(jié)果為陰性，不能作為判斷患者未被感染的標(biāo)準(zhǔn)。

有研究結(jié)果顯示，1100例COVID-19患者在入院時(shí)接受電子計(jì)算機(jī)

斷層掃描（CT）檢查時(shí)，有76.4%的患者呈現(xiàn)出肺炎表現(xiàn)，主要為毛玻璃樣陰影（50.0%）和雙肺斑片狀陰影（46.4%），絕大多數(shù)重癥患者都能以此確診。而根據(jù)此前專家表述的確診患者中，核酸檢測(cè)的陽性率僅為30%~50%來看，COVID-19患者核酸檢測(cè)假陰性的比例并不低。因此核酸檢測(cè)不能作為確診感染的唯一方法。

三、實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行SARS--CoV--22核酸檢測(cè)的條件和要求

臨床實(shí)驗(yàn)室需要符合國家衛(wèi)生健康委辦公廳頒布的《關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測(cè)有關(guān)要求的通知》的要求：

達(dá)到二級(jí)以上實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)及三級(jí)個(gè)人生物安全防護(hù)規(guī)范并經(jīng)衛(wèi)生行政相關(guān)部門批準(zhǔn)，方可開展SARS-CoV-2核酸檢測(cè)。

核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室為負(fù)壓環(huán)境最為理想，應(yīng)注意壓力監(jiān)測(cè)，保持空氣流動(dòng)，排除氣溶膠。核酸檢測(cè)人員必須具備相應(yīng)資質(zhì)，接受聚合酶鏈反應(yīng)相關(guān)培訓(xùn)并考核合格。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格管理，分區(qū)到位，嚴(yán)格禁止無關(guān)人員進(jìn)入。清潔區(qū)應(yīng)保持通風(fēng)，消毒到位。相關(guān)物品分區(qū)放置，潔污分離，按時(shí)更換，洗消到位。常規(guī)消毒：較大面積以含氯消毒液為主，小面積可以用75%酒精。處理氣溶膠的良好方式是開窗通風(fēng)，也可通過紫外線、過濾、空氣消毒機(jī)等方式進(jìn)行空氣消毒。

四、SARS--CoV--22核酸測(cè)定（實(shí)時(shí)熒光RT--PCR）的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和參數(shù)

盡管實(shí)驗(yàn)室一般會(huì)很關(guān)注核酸檢測(cè)環(huán)節(jié)，但實(shí)際上核酸提取也是檢測(cè)成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，其與病毒樣本的采集和保存密切相關(guān)。

在《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第六版）》中，所提到的樣本類型包含呼吸道樣本、血液樣本、糞便樣本等。對(duì)于高風(fēng)險(xiǎn)的樣本，在

核酸提取和擴(kuò)增前需要對(duì)樣本先行病毒滅活，包括（60~65）℃孵育（20~30）min，或者用試劑盒自帶的采樣液滅活和保存病毒。

目前應(yīng)用最廣泛的呼吸道樣本，如鼻咽拭子等均采用第2種方式，即以核酸提取裂解液為基礎(chǔ)配制的滅活（保存）液。這種病毒保存液一方面可讓病毒的蛋白變性，失去活性，不再有傳染性，提高運(yùn)輸和檢測(cè)階段的安全性；另一方面又可直接裂解病毒釋放核酸，消除核酸分解酶，防止病毒的RNA降解。

以核酸提取裂解液為基礎(chǔ)配制的病毒采樣液，主要成分為平衡鹽類、乙二胺四乙酸螯合劑、胍鹽（異硫氰酸胍、鹽酸胍等）、陰離子表面活性劑（十二烷基硫酸鈉）、陽離子表面活性劑（十四烷基三甲基草酸銨）、苯酚、8-羥基喹啉、二硫蘇糖醇、蛋白酶K等幾種或多種組分。目前，核酸提取的試劑盒種類繁多，采用的核酸提取純化試劑各不相同，即使是采用相同的核酸提取純化試劑，各試劑盒的提取程序也有所不同。

目前國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的核酸檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品均基于SARS-CoV-2基因組中ORF1ab、E和N基因進(jìn)行選擇。不同產(chǎn)品的檢測(cè)原理基本一致，但是其引物、探針設(shè)計(jì)不同，有單靶區(qū)段（ORF1ab）、雙靶區(qū)段（ORF1ab、N或E）、三靶區(qū)段（ORF1ab、N和E）的檢測(cè)和判讀差別，核酸提取和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)體系應(yīng)參考相關(guān)試劑盒說明書，并建議使用者嚴(yán)格按照試劑盒說明書規(guī)定的判讀方式進(jìn)行判讀。

五、SARS--CoV--22核酸測(cè)定（實(shí)時(shí)熒光RT--PCR）

結(jié)果判讀

《新型冠狀病毒感染的肺炎防控方案（第二版）》[7]首次明確了單個(gè)基因擴(kuò)增結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)：

1、無Ct或Ct40為陰性；2、Ctlt;37為陽性；3、Ct值37~40為灰度區(qū)，建議重復(fù)實(shí)驗(yàn)，若重做結(jié)果Ctlt;40，擴(kuò)增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。

之后的第三版指南、第四版指南[9]延續(xù)了上述標(biāo)準(zhǔn)，但是由于商品化試劑盒選用的靶標(biāo)有所不同，上述3版指南并未給出靶標(biāo)的組合判斷標(biāo)準(zhǔn)，強(qiáng)調(diào)以廠家提供的說明書為準(zhǔn)。從第五版指南開始，明確了2個(gè)靶標(biāo)，尤其是比較難判斷的單靶標(biāo)陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)，即實(shí)驗(yàn)室要確認(rèn)某個(gè)病例為SARS-CoV-2核酸檢測(cè)陽性，需滿足以下2個(gè)條件中的1個(gè)：

（1）同一份樣本中SARS-CoV-22個(gè)靶標(biāo)（ORF1ab、N）實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果均為陽性，如果出現(xiàn)單個(gè)靶標(biāo)陽性的檢測(cè)結(jié)果則需要重新采樣并重新檢測(cè)，如果檢測(cè)結(jié)果仍然為單靶標(biāo)陽性，則判定為陽性；（2）2種樣本實(shí)時(shí)熒光RT-PCR同時(shí)出現(xiàn)單靶標(biāo)陽性或同種類型樣本2次采樣檢測(cè)均出現(xiàn)單個(gè)靶標(biāo)陽性的檢測(cè)結(jié)果，可判定為陽性。但是，指南同時(shí)強(qiáng)調(diào)核酸檢測(cè)的陰性結(jié)果不能排除SARS-CoV-2感染，需要排除可能產(chǎn)生假陰性的因素，包括樣本質(zhì)量差（口咽等部位的呼吸道樣本）、樣本收集過早或過晚、沒有正確保存、運(yùn)輸和處理樣本、技術(shù)本身存在問題（病毒變異、PCR抑制）等。

六、SARS--CoV--22檢測(cè)出現(xiàn)假陰性的原因

目前被關(guān)注的核酸檢測(cè)假陰性概念，往往是指核酸檢測(cè)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符的假陰性，即臨床癥狀及影像學(xué)結(jié)果高度疑似COVID-19，但核酸檢測(cè)多次始終為陰性。國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心對(duì)

SARS-CoV-2檢測(cè)假陰性進(jìn)行了解釋。

（1）被感染者的細(xì)胞中有一定量的病毒?，F(xiàn)有數(shù)據(jù)顯示機(jī)體被病毒感染后，病毒通過鼻腔和口腔進(jìn)入到咽喉部，再到氣管和支氣管，進(jìn)而到達(dá)肺泡，感染者會(huì)經(jīng)歷潛伏期、輕度癥狀、再到嚴(yán)重癥狀的過程，不同病程階段以及機(jī)體不同部位存在的病毒量有所不同。

從細(xì)胞種類的病毒載量看，肺泡上皮細(xì)胞（下呼吸道）gt;氣道上皮細(xì)胞（上呼吸道）gt;成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等；從樣本類型來看，肺泡灌洗液（最優(yōu)）gt;深咳痰gt;鼻咽拭子gt;口咽拭子gt;血液。此外，糞便中也能檢出病毒。但是考慮操作的方便性和患者的接受程度，目前臨床常用的樣本順序是口咽部拭子gt;鼻咽部拭子gt;支氣管灌洗液（操作復(fù)雜）和深痰（常為干咳，難得到）。

因此，某些患者口咽部或鼻咽部細(xì)胞中病毒量較少或極低，如果只取口咽部或鼻咽部樣本檢測(cè)，病毒核酸就檢測(cè)不到。

（2）樣本采集時(shí)未采集到含有病毒的細(xì)胞，或未有效保存病毒核酸。

①采集部位不當(dāng)，如采集口咽拭子時(shí)，采集深度不夠，采集鼻咽拭子沒有采到鼻腔深處等，可能采集到的細(xì)胞絕大部分都是不含病毒的細(xì)胞；②采樣拭子使用錯(cuò)誤，如拭子頭的材料推薦使用PE纖維、聚酯纖維、聚丙烯纖維等合成纖維，實(shí)際操作中使用了棉花等天然纖維（對(duì)蛋白質(zhì)的吸附較強(qiáng)，不易洗脫）和尼龍類的纖維（吸水性不佳，導(dǎo)致采樣量不足）；③病毒保存管使用錯(cuò)誤，如誤用了易吸附核酸（DNA/RNA）的聚丙烯

或聚乙烯塑料保存管，導(dǎo)致保存液中核酸濃度下降。實(shí)際操作中推薦使用聚乙烯-丙烯聚合物塑膠與某些特殊處理的聚丙烯塑膠容器儲(chǔ)存病毒核酸。

（3）體外診斷試劑性能不佳。部分品牌的試劑由于研發(fā)時(shí)間短，也沒有使用已知臨床樣本進(jìn)行必要的性能確認(rèn)，可能存在對(duì)試劑優(yōu)化不充分以及試劑批間差異大等問題。此外，國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心2023年3月1624日開展的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，各檢測(cè)試劑均存在與多個(gè)核酸提取試劑搭配使用的情況，這也是導(dǎo)致假陰性結(jié)果的主要原因。即使采用同一核酸檢測(cè)試劑，由于核酸提取試劑的不同，分析敏感性也必然會(huì)存在差異。

（4）臨床實(shí)驗(yàn)室操作不規(guī)范。樣本運(yùn)輸保存條件、臨床實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范操作、結(jié)果判讀和質(zhì)量控制等是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的關(guān)鍵因素。國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心2023年3月1624日開展的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，收到有效結(jié)果的844家實(shí)驗(yàn)室中，701家（83.1%）合格，143家（16.9%）不合格，實(shí)驗(yàn)室總體檢測(cè)情況良好，但不同實(shí)驗(yàn)室在人員操作能力、單靶標(biāo)陽性樣本解讀能力以及質(zhì)量控制方面仍存在差異。

七、如何降低SARS--CoV--22核酸檢測(cè)假陰性

降低核酸檢測(cè)假陰性應(yīng)相對(duì)應(yīng)地從產(chǎn)生假陰性的4個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化。

（1）被感染者的細(xì)胞中有一定量的病毒。疑似感染者不同時(shí)期，在身體不同部位，病毒濃度會(huì)有差異，如咽部沒有，可能支氣管灌洗液或糞便中有，若能同時(shí)或在疾病進(jìn)展的不同階段采集多種類型樣本進(jìn)行檢測(cè)，會(huì)有助于避免假陰性的出現(xiàn)。

（2）樣本采集時(shí)要采集到含有病毒的細(xì)胞。通過加強(qiáng)對(duì)樣本采集人員的培訓(xùn)，可以在很大程度上解決該問題。

（3）可靠的體外診斷試劑。通過從國家層面開展試劑的檢測(cè)性能評(píng)價(jià)研究，探討存在的問題，可以進(jìn)一步改進(jìn)試劑檢測(cè)效能，提高分析敏感性。

（4）臨床實(shí)驗(yàn)室規(guī)范操作。通過加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的培訓(xùn)，不斷完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系、保證合理的分區(qū)、提高人員檢測(cè)的能力，可以減少因?qū)嶒?yàn)室操作不當(dāng)出現(xiàn)的假陰性。

八、康復(fù)出院患者SARS--CoV--22核酸檢測(cè)復(fù)檢陽性的原因

《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》中明確規(guī)定，COVID-19患者治愈出院的標(biāo)準(zhǔn)之一就是連續(xù)兩次呼吸道標(biāo)本核酸檢測(cè)陰性（采樣時(shí)間至少間隔24小時(shí)），但有極少數(shù)出院患者再次出現(xiàn)SARS-CoV-2核酸檢測(cè)陽性，其原因是多樣的。

（1）SARS-CoV-2是一個(gè)新病毒，對(duì)其致病機(jī)制、引發(fā)的疾病全貌和病程特點(diǎn)還需要進(jìn)一步了解，所以一方面要加強(qiáng)對(duì)出院患者的管理，進(jìn)行14d的醫(yī)學(xué)觀察，并進(jìn)行跟蹤隨訪、健康監(jiān)測(cè)和健康指導(dǎo)，以對(duì)疾病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸的全過程加深認(rèn)識(shí)。

（2）患者有再次感染病毒的可能。鐘南山院士說：由于治愈的患者體內(nèi)有抗體，因此SARS-CoV-2再次入侵時(shí)可被抗體消滅，再次感染的幾率不大，但不大并不代表不會(huì)感染，再次感染有多方面的原因，可能是康復(fù)患者自身的原因，也可能與病毒的變異有關(guān)，甚至可能是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的原因。如果是病毒自身的原因，SARS-CoV-2變異可能導(dǎo)致康

復(fù)患者自身產(chǎn)生的抗體對(duì)變異病毒無效，若患者再次感染變異病毒，則核酸檢測(cè)可能再次陽性。

（3）就實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法而言，每種檢測(cè)方法都有其局限性。SARS-CoV-2核酸檢測(cè)