基因工程疫苗

第六章基因工程疫苗

第一節(jié)疫苗概述一、疫苗的起源與發(fā)展疫苗的起源可以追溯到我國(guó)古代。早在4世紀(jì)初，東晉葛洪所著《肘后方》中，已有關(guān)于防治狂犬病的記載：“殺所咬犬，取腦敷之，后不復(fù)發(fā)”。在宋真宗時(shí)代（公元1000年左右）宰相王達(dá)之子患了天花，四處請(qǐng)醫(yī)無效，最后請(qǐng)來了峨眉山的道人，取其患處的結(jié)痂，處理后進(jìn)行自體接種而治愈，這當(dāng)是最早的自身免疫治療（self-Vaccine）

。

逐漸發(fā)展成了預(yù)防天花的人痘接種法，即從感染天花后的恢復(fù)期病人或癥狀比較輕的病人身上，挑取水泡、膿皰和痘痂內(nèi)容物并保存1個(gè)月左右待其干燥，然后將其研磨成粉末，給健康人的鼻腔吸入，以預(yù)防天花，取得了很好的保護(hù)效果。這是人類史上最早使用疫苗來預(yù)防疾病的記錄，較英國(guó)醫(yī)生琴納（Jenner）發(fā)明牛痘苗早了幾百年。

15世紀(jì)中期我國(guó)的人痘苗接種法傳至中東，后經(jīng)改革進(jìn)行皮下接種。1721年英駐土耳其的大使夫人，將此法又傳至英與歐洲各國(guó)。人痘的發(fā)明是中國(guó)人民對(duì)世界醫(yī)學(xué)的一大貢獻(xiàn)。2000年，美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心（CentersforDiseaseControlandPrevention，CDC）出版了《疫苗可預(yù)防疾病的流行病學(xué)與預(yù)防學(xué)》第6版，在這本被譽(yù)為疫苗學(xué)權(quán)威手冊(cè)首頁的“疫苗接種的里程碑”中，第一項(xiàng)即是“12世紀(jì)中國(guó)開始用人痘接種預(yù)防天花”（見表6-1）。這是對(duì)中國(guó)首先開始使用人痘接種預(yù)防天花是最早的免疫接種形式的肯定。

表5-1疫苗發(fā)展史上的里程碑事件

時(shí)間事件12世紀(jì)中國(guó)開始用人逗接種預(yù)防天花1721年人逗接種傳入英國(guó)1796年E.Jenner為JamesPhipps接種牛痘，疫苗接種正式開始1870L.Pasteur發(fā)明了第一個(gè)細(xì)菌減毒活疫苗——雞霍亂疫苗1884年L.Pasteur發(fā)明了第一個(gè)病毒減毒活疫苗——狂犬病疫苗1885年L.Pasteu第一次把狂犬病疫苗接種于人體1901年VonBehring發(fā)現(xiàn)了白喉抗毒素，獲得第一個(gè)醫(yī)學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)1909年Smith發(fā)明了滅活白喉毒素的方法1909年Calmette和Guerin發(fā)明了第一個(gè)用于人的細(xì)菌減毒活疫苗BCG1933年GoodPasture發(fā)明了雞胚病毒培養(yǎng)法1949年Enders及其同事從人細(xì)胞系中分離出脊髓灰質(zhì)炎Ⅱ型Lancing株1954年Enders分離出麻疹病毒1955年脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)時(shí)間事件1961年人二倍體細(xì)胞株建立1963年麻疹疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)1966年世界衛(wèi)生聯(lián)盟呼吁全球消滅天花1977年索馬里發(fā)現(xiàn)最后一例本土天花1979年美國(guó)報(bào)道最后一例野毒傳播型脊髓灰質(zhì)炎1986年第一個(gè)重組疫苗——重組乙型肝炎疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)1989年推薦使用二劑型麻疹疫苗1990年第一個(gè)多糖結(jié)合疫苗——B型流感嗜血桿菌疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)1991年西半球報(bào)道最后一例野毒株脊髓灰質(zhì)炎病例乙型肝炎免疫納入全球計(jì)劃免疫1994年美國(guó)消滅脊髓灰質(zhì)炎得到證實(shí)1995年水痘疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)1996年用于嬰兒的無細(xì)胞型百日咳疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)1997年推薦進(jìn)行掃蕩式脊髓灰質(zhì)炎免疫1999年推薦單一使用脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗2000年用于嬰兒的結(jié)合肺炎球菌疫苗獲準(zhǔn)生產(chǎn)引自：CDC：EpidemiologyandPreventionofVaccine-preventableDisease.6Edition，200017965.14英國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)生愛德華·琴納（EdwardJenner）進(jìn)行了人類歷史上的第一次疫苗接種試驗(yàn)。Jenner從一位感染了牛痘的年輕擠奶農(nóng)婦的手上挑取了痘苗接種到一名8歲男孩的手臂上。經(jīng)過幾個(gè)月的嚴(yán)密觀察，發(fā)現(xiàn)小男孩獲得了免疫保護(hù)，一直沒有感染天花。1798年9月，Jenner發(fā)表了接種“牛痘”預(yù)防天花的論文，雖然當(dāng)時(shí)全然不知天花是由天花病毒感染所致，但這一劃時(shí)代的發(fā)明，開創(chuàng)了人工自動(dòng)免疫的先河。隨后，種痘技術(shù)傳遍了歐洲，后又傳到北美和亞洲。為紀(jì)念Jenner的這一偉大貢獻(xiàn)，巴斯德（Pasteur）將疫苗稱為Vaccine（拉丁文vacc是“牛”的意思）。由于長(zhǎng)期和廣泛地使用牛痘苗，全世界從1977年以后再也沒有發(fā)現(xiàn)過天花病人。世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization，WHO）于1979年10月26日莊嚴(yán)宣布，天花已在全球絕跡。這是人類歷史上第一個(gè)使用疫苗消滅的傳染病。19世紀(jì)70年代，法國(guó)科學(xué)家路易斯·巴斯德（LouisPasteur）有關(guān)減毒雞霍亂菌的研究，是繼琴納之后的重大進(jìn)步。他認(rèn)為使用減毒的病原體來預(yù)防其導(dǎo)致的疾病，比使用相關(guān)的動(dòng)物病原體來預(yù)防人類疾病理當(dāng)更加有效。巴斯德建立了現(xiàn)代意義上的預(yù)防接種，即通過實(shí)驗(yàn)室內(nèi)研制的疫苗來預(yù)防傳染病。隨后的羊炭疽減毒活疫苗的試驗(yàn)成功，尤其是1885年首次在人體使用減毒狂犬病疫苗的成功，標(biāo)志人類進(jìn)入了一個(gè)預(yù)防接種的科學(xué)新紀(jì)元?；诎踩?，正式生產(chǎn)的均為狂犬病滅活疫苗，質(zhì)量上也在不斷的改進(jìn)。Pasteur在疫苗研制領(lǐng)域的先鋒作用和卓越貢獻(xiàn)引起了第一次疫苗革命。到19世紀(jì)末，人類在疫苗學(xué)領(lǐng)域里已經(jīng)取得了輝煌的成就，包括2個(gè)人用病毒減毒活疫苗（琴納的牛痘，巴斯德的狂犬?。?個(gè)人用細(xì)菌滅活疫苗（美國(guó)Salmon和Smith、法國(guó)Chamberlai和Roux的傷寒、霍亂和鼠疫），以及疫苗學(xué)的一些基礎(chǔ)概念，如Metchnikoff的的細(xì)胞免疫（1884年），Ehrlich的受體理論（1897年）及毒素-抗毒素作用。進(jìn)入20世紀(jì)前30年，疫苗學(xué)在三個(gè)方面取得了重大進(jìn)展：首先，法國(guó)科學(xué)家Calmette和Guerin在1906年從牛體分離到1株結(jié)核菌，經(jīng)過13年在牛膽汁中傳遞230代，獲得1株減毒株，制成疫苗，于1927年上市，即所謂卡介苗（BCG）。其次，在20年代，巴斯德研究所的Ramon應(yīng)用化學(xué)滅活方法獲得白喉和破傷風(fēng)類毒素并研制成疫苗。第三，WilsonSmith和ThomasFrancis分別在禽胚中研制成功2種滅活甲型流行性感冒（流感）疫苗。二次大戰(zhàn)后，疫苗研究進(jìn)入了突飛猛進(jìn)的發(fā)展階段。波士頓的Enders及其同事發(fā)展了病毒的體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，促進(jìn)了多種減毒和滅活病毒疫苗的研制。50年代，先有Salk的3價(jià)滅活脊髓灰質(zhì)炎（脊灰）疫苗（IPV），后有Sabin的3價(jià)減毒脊灰疫苗（OPV），為人類渴望在地球上消滅脊灰提供了有力武器。同一時(shí)期還研制了在雞胚細(xì)胞中培養(yǎng)減毒的麻疹疫苗。60年代研制了在雞胚中減毒的流行性腮腺炎疫苗。70年代研制了在細(xì)胞中培養(yǎng)的風(fēng)疹疫苗。細(xì)菌疫苗方面，70年代細(xì)菌夾膜多糖的純化技術(shù)促進(jìn)了多個(gè)侵襲性細(xì)菌疫苗的研制成功。同一時(shí)期的病毒蛋白純化技術(shù)也促進(jìn)了血源性乙型病毒性肝炎（乙肝）疫苗的研制成功。20世紀(jì)80年代，現(xiàn)代分子技術(shù)的應(yīng)用推動(dòng)了又一代疫苗的研制，引發(fā)了疫苗發(fā)展史上的第二次革命，其首要成果是基因重組乙肝疫苗，為人類在地球上消除乙肝提供了希望。與此同時(shí)，化學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展在很大程度上為新疫苗的研制和舊疫苗的改進(jìn)提供了新技術(shù)和新方法（表5-2）。表5-2新技術(shù)對(duì)疫苗研制和開發(fā)的作用及影響

學(xué)科領(lǐng)域生物技術(shù)作用和影響遺傳學(xué)基因工程和DNA重組（包括基因克隆和表達(dá)，DNA測(cè)序，DNA合成，核酸內(nèi)切酶和工具酶，PCR，全基因圖譜）抗原鑒定和抗原分離測(cè)定抗原的可變性蛋白質(zhì)抗原的基因工程基因突變和減毒重組微生物作為載體化學(xué)多肽合成鑒定抗原表位研制多肽疫苗蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)計(jì)數(shù)及估測(cè)T和B細(xì)胞表位糖結(jié)構(gòu)多糖疫苗基礎(chǔ)研究佐劑，多糖和蛋白質(zhì)偶聯(lián)疫苗免疫學(xué)單克隆抗體抗原鑒定和抗原分離鑒定抗原表位抗同種異型模擬非蛋白質(zhì)表位免疫調(diào)控新型佐劑基礎(chǔ)研究細(xì)胞和分子免疫機(jī)理粘膜免疫至今已有30余種疫苗成功的用于人類疾病的預(yù)防（表5-3）。其中一半以上是病毒疫苗。如天花（poxvirus）、小兒麻痹（poliovirus）、麻疹（Measles）等曾嚴(yán)重危害人類生命與健康的疾病的流行得到了有效的控制。其中天花已被根除，創(chuàng)造了使用疫苗在自然界中徹底消滅一種病原微生物的醫(yī)學(xué)奇跡。人類消滅脊髓灰質(zhì)炎的目標(biāo)也即將實(shí)現(xiàn)。表6-3人用疫苗發(fā)展年表應(yīng)用年份疾病名稱疫苗類型1721天花“人痘”活天花病毒1796天花“天然減毒”痘苗病毒1885狂犬病“不同程度”減毒的滅活病毒1936黃熱病活減毒病毒1936流感滅活全病毒1943流感滅活完整（whole）病毒1955小兒麻痹滅活病毒1957狂犬病滅活病毒、鴨胚培養(yǎng)1961小兒麻痹活減毒病毒1963麻疹滅活病毒和減毒活病毒1967腮腺炎活減毒病毒1969風(fēng)疹活減毒病毒表6-3人用疫苗發(fā)展年表應(yīng)用年份疾病名稱疫苗類型1972流腦純化多糖A和C型1974日本腦炎（乙腦）滅活病毒1976狂犬病滅活病毒、人二倍體細(xì)胞培養(yǎng)1981乙型肝炎滅活、血源苗1982腦膜炎球菌腦膜炎純化A、C、Y、W135型多糖1983日本腦炎（乙腦）活減毒病毒1983水痘活減毒病毒1986乙型肝炎基因重組蛋白質(zhì)疫苗1991甲型肝炎活減毒病毒和滅活病毒1998輪狀病毒腹瀉活減毒病毒1998回歸熱純化蛋白質(zhì)疫苗我國(guó)自1919年開始建立專門的機(jī)構(gòu)（中央防疫處，北京生物制品研究所前身）從事生物制品的研究、生產(chǎn)，這是我國(guó)第一所生物制品研究所。建國(guó)后，我國(guó)政府重新組建和新建了北京、上海、武漢、長(zhǎng)春、蘭州、成都等六個(gè)生物制品研究所。中國(guó)現(xiàn)有疫苗產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)約30家，是世界上疫苗產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)最多的國(guó)家（表5-4）。中國(guó)的疫苗產(chǎn)品年產(chǎn)量已經(jīng)超過10億個(gè)劑量單位，疫苗的種類和數(shù)量也達(dá)到世界之最，其中用于預(yù)防乙肝、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、百日咳、白喉、破傷風(fēng)的兒科常見病的疫苗生產(chǎn)量達(dá)到5億人份，已經(jīng)全部實(shí)現(xiàn)計(jì)劃免疫接種。中國(guó)生產(chǎn)的疫苗產(chǎn)品已經(jīng)能夠滿足防病、滅病的需要。表6-4中國(guó)主要疫苗種類和生產(chǎn)廠家

種類制品名稱用途生產(chǎn)廠家病毒類重組酵母基因工程乙肝疫苗用于預(yù)防所有已知亞型的乙肝病毒的感染。北京天壇生物、深圳康泰重組（CHO）乙型肝炎疫苗預(yù)防乙型肝炎病毒感染長(zhǎng)春所、蘭州所、華北制藥甲型肝炎純化滅活疫苗（VAQTA）VAQTA適用于接觸前的主動(dòng)免疫，以預(yù)防甲型肝炎病毒引起的肝炎，但不能預(yù)防由非甲型肝炎病毒引起的肝炎。首次免疫應(yīng)在預(yù)計(jì)接觸前至少2周進(jìn)行。巴斯德-梅里厄-康納公司、北京科興甲型肝炎減毒疫苗用于預(yù)防甲型肝炎史克必成公司、長(zhǎng)春所、長(zhǎng)春高新種類制品名稱用途生產(chǎn)廠家風(fēng)疹減毒活疫苗年齡為8個(gè)月以上的風(fēng)疹易感者巴斯德-梅里厄-康納公司、蘭州所、天壇生物、上海所麻疹減毒活疫苗預(yù)防麻疹病蘭州所、長(zhǎng)春所、上海所森林腦炎滅活疫苗用于預(yù)防森林腦炎長(zhǎng)春所乙型腦炎滅活疫苗本疫苗免疫接種后，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗乙型腦炎病毒的免疫力，用于預(yù)防乙型腦炎。蘭州所、長(zhǎng)春所、天壇生物、上海所Ⅰ型腎綜合征出血熱純化疫苗預(yù)防流行性出血熱蘭州所、上海所Ⅱ型腎綜合征出血熱純化疫苗預(yù)防Ⅱ型出血熱長(zhǎng)春所流行性感冒滅活疫苗6歲以上所有希望預(yù)防流感的健康人群巴斯德-梅里厄-康納公司、史克必成公司、蘭州所、長(zhǎng)春所、長(zhǎng)春高新腮腺炎減毒活疫苗8月齡以上的腮腺炎易感者蘭州所、上海所種類制品名稱用途生產(chǎn)廠家口服脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗預(yù)防脊髓灰質(zhì)炎天壇生物口服輪狀病毒活疫苗預(yù)防小兒秋季腹瀉蘭州所水痘減毒活疫苗12月齡以上的水痘易感者長(zhǎng)春生物制品研究所、史克必成公司、長(zhǎng)春所、上海所人用狂犬病純化疫苗用于預(yù)防狂犬病巴斯德-梅里厄-康納公司、蘭州所、長(zhǎng)春所、成都所黃熱減毒活疫苗預(yù)防黃熱病天壇生物聯(lián)合疫苗吸附白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎疫苗該聯(lián)合疫苗適用于兒童預(yù)防白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎的基礎(chǔ)免疫及加強(qiáng)免疫。巴斯德—梅里厄—康納公司麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹疫苗預(yù)防麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹默沙東公司、史克必成公司甲乙肝聯(lián)合疫苗預(yù)防甲肝和乙肝史克必成公司、北京科興二、疫苗與基因工程疫苗

傳統(tǒng)疫苗（TraditionalVaccine）用人工變異或從自然界篩選獲得的減毒或無毒的活的病原微生物制成的制劑或者用理化方法將病原微生物殺死制備的生物制劑，用于人工自動(dòng)免疫以保護(hù)人或動(dòng)物產(chǎn)生免疫力，這些制劑被稱為疫苗（多用于預(yù)防），即疫苗是由病原體制成的。國(guó)內(nèi)常將細(xì)菌制作的人工主動(dòng)免疫生物制品稱為菌苗。將病毒（Virus）、立克次氏體（Rickettia）、螺旋體（Spiralcoil）等微生物制成的生物制品稱為疫苗?，F(xiàn)在國(guó)際上一般將細(xì)菌性制劑、病毒性制劑以及類毒素統(tǒng)稱為疫苗（vaccine）?；蚬こ桃呙纾荷鲜霆M義的疫苗被稱做傳統(tǒng)疫苗（traditionalvaccine），即完整的病原體為主制成的疫苗；而基因工程疫苗則屬于新一代疫苗（NewgenerationVaccine）或高技術(shù)疫苗范疇（High-techVaccine）。主要包括基因工程亞單位疫苗、基因工程載體疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗、蛋白工程疫苗等等，廣義的還包括遺傳重組疫苗、合成肽疫苗、抗獨(dú)特型抗體疫苗以及微膠囊可控緩釋疫苗等?，F(xiàn)代疫苗（Modernvaccine）：是一種利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)使用Ag通過誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)以予防和治療疾病或達(dá)到某種特定的醫(yī)學(xué)目的生物制劑。

三、傳統(tǒng)疫苗與新型疫苗的區(qū)別：傳統(tǒng)疫苗①疫苗的研制則主要是通過人體實(shí)驗(yàn)從經(jīng)驗(yàn)與失敗中獲得。②20世紀(jì)以來，隨著病原學(xué)、流行病學(xué)、免疫學(xué)，特別是病毒組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，大量傳統(tǒng)疫苗相繼問世。③免疫學(xué)的進(jìn)展，使人們可以通過是否產(chǎn)生中和抗體判定疫苗成功與否。幾乎所有免疫保護(hù)機(jī)制明確，可以產(chǎn)生中和抗體，又易于培養(yǎng)的疫苗都已獲得成功。甚至一些新出現(xiàn)的疾病，主要具備上述特點(diǎn)，也可以使用傳統(tǒng)疫苗技術(shù)迅速研制成功（表5-5）。④對(duì)于免疫保護(hù)機(jī)制不明確，有潛在致癌性或免疫病理作用，以及病原不能或難于培養(yǎng)的疫苗，使用傳統(tǒng)疫苗技術(shù)就很難研制成功。新型疫苗①新型疫苗則是在分子生物、分子免疫學(xué)、蛋白化學(xué)以及相應(yīng)的生物高技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的（Woodrow，1997）。②重組DNA技術(shù)包括促進(jìn)了疫苗生產(chǎn)技術(shù)的發(fā)展。

③從現(xiàn)代的觀點(diǎn)來看，我們可以把疫苗定義為：一種使用抗原通過誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異免疫反應(yīng)以預(yù)防和治療疾病或達(dá)到特定醫(yī)學(xué)目的的生物制劑。④目前新型疫苗的研究主要集中在改進(jìn)傳統(tǒng)疫苗和研制傳統(tǒng)技術(shù)不能解決的新疫苗兩個(gè)方面，包括腫瘤疫苗、避孕疫苗及其它非感染性疾病疫苗的研究，其中發(fā)展治療性疫苗已成為新型疫苗研究的重要組成部分。疫苗類型國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)狀況國(guó)內(nèi)國(guó)外1小兒麻痹（OPV）減毒活疫苗（I-III型聯(lián)合）+-小兒麻痹（IVP）滅活疫苗（I-III型聯(lián)合）+-2麻疹減毒活疫苗++3卡介苗（BCG）減毒活疫苗++4白喉-百日咳-破傷風(fēng)（DPT）亞單位疫苗（聯(lián)合）++亞單位疫苗（基因工程P）-+5

乙型肝炎亞單位疫苗（血源）++亞單位疫苗（基因工程CHO）+（S）+（S2）亞單位疫苗（基因工程酵母）+（引進(jìn)）+6乙腦減毒活疫苗+-滅活疫苗++7流腦亞單位疫苗（多糖）++8甲肝減毒活疫苗++滅活疫苗-+9流感滅活疫苗++減毒活疫苗（遺傳重配）-+10狂犬滅活疫苗++11風(fēng)疹減毒活疫苗++12腮腺炎減毒活疫苗++麻疹-風(fēng)疹-腮腺炎（MMR）減毒活疫苗（三種聯(lián)合）-+13出血熱滅活疫苗++14腺病毒（Ad4，Ad7）減毒活疫苗-+15水痘減毒活疫苗-+16黃熱病減毒活疫苗++17輪狀病毒腹瀉減毒活疫苗（人猴遺傳重配）-+減毒活疫苗（人羊遺傳重配）+-18傷寒滅活疫苗++減毒活疫苗（Ty21a）-+19鉤端螺旋體滅活疫苗+-20霍亂亞單位+滅活（CTB+WC）-+亞單位+滅活（基因工程CTB+WC）++減毒活疫苗（基因工程CBV-HgR）-+21鼠疫減毒活疫苗++22斑疹傷寒滅活疫苗++23布氏桿菌減毒活疫苗++24炭疽桿菌減毒活疫苗++25痢疾減毒活疫苗（基因工程FS）+-26鏈球菌肺炎亞單位疫苗（多糖）-+27噬血桿菌流感亞單位疫苗（多糖）-+28痘苗（天花）減毒活疫苗+*+*注：“+”為已投入生產(chǎn)，“-”為未生產(chǎn)，“*”為已停止生產(chǎn)第二節(jié)病毒疫苗的種類一、傳統(tǒng)病毒疫苗

又稱常規(guī)疫苗或第一代疫苗，是長(zhǎng)期以來用于傳染病預(yù)防的主要生物制品。1、滅活疫苗（deadVaccine）

滅活疫苗又稱死疫苗，是指利用加熱或甲醛等理化方法將人工大量培養(yǎng)的完整的病原微生物殺死，使其喪失感染性和毒性而保持其免疫原性，并結(jié)合相應(yīng)的佐劑而制成的疫苗。疫苗液中除含有滅活的病毒顆粒外，還含有細(xì)胞成分和培養(yǎng)病毒時(shí)加入的牛血清等蛋白類物質(zhì)，多次接種疫苗容易發(fā)生過敏反應(yīng)。優(yōu)點(diǎn)制造工藝簡(jiǎn)單免疫原性的穩(wěn)定性高易于制備多價(jià)疫苗缺點(diǎn)：1）需要嚴(yán)格的滅活操作，保證疫苗中不含有滅活不完全的顆粒。2）滅活疫苗所提供的免疫力較短暫，為完成免疫程序，需要進(jìn)行多次接種，由于機(jī)體反復(fù)接受疫苗中的異性蛋白質(zhì)的刺激，而可能出現(xiàn)不良的過敏反應(yīng)。3）有些滅活疫苗，如早年制備的麻疹滅活疫苗，可使有些受接種者在以后自然接觸麻疹病毒時(shí)，引起嚴(yán)重的麻疹感染過敏性反應(yīng)。4）滅活疫苗雖可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgM和IgG抗體，但有時(shí)卻得不到滿意的保護(hù)效果。2、減毒活疫苗（attenuatedvaccine）減毒活疫苗又稱弱毒疫苗，是指將微生物的自然強(qiáng)毒株通過物理、化學(xué)和生物學(xué)的方法，連續(xù)傳代，使其對(duì)原宿主喪失致病力，或只引起亞臨床感染，但仍保持良好的免疫原性、遺傳特性，用這種毒株制備的疫苗就叫減毒活疫苗。當(dāng)前使用的病毒疫苗多數(shù)是減毒活疫苗?；钜呙缇哂锌烧T發(fā)全面的免疫應(yīng)答反應(yīng)（體液免疫和細(xì)胞免疫）、免疫力持久等優(yōu)點(diǎn)。常用的減毒方法有以下幾種：1）體外減毒即體外連續(xù)傳代減毒。在異源宿主中連續(xù)傳代；在單一宿主中反復(fù)連續(xù)傳代。2）冷適應(yīng)篩選溫度可以改變病毒的特性，得到冷適應(yīng)株。病毒冷適應(yīng)株常伴有毒力減弱和各種特征性標(biāo)志。冷適應(yīng)篩選穩(wěn)定的減毒突變株是在傳統(tǒng)疫苗設(shè)計(jì)中較早采用的方法，而且也是最為行之有效的思路。減毒活疫苗與滅活疫苗各有優(yōu)缺點(diǎn)。前者優(yōu)于后者。減毒活疫苗可使機(jī)體產(chǎn)生亞臨床感染，特別當(dāng)以自然途徑，如口服或噴鼻免疫時(shí)，可產(chǎn)生廣譜的免疫應(yīng)答，即除循環(huán)性抗體IgM和IgG外，在病毒侵入的門戶如呼吸道和消化道也可誘生局部抗體IgA。

3、亞單位疫苗（subunitvaccine）亞單位疫苗是指提取或合成細(xì)菌、病毒外殼的特殊蛋白結(jié)構(gòu)，即抗原決定簇制成的疫苗，這類疫苗不是完整的病毒，是病毒的一部分物質(zhì)，故稱亞單位疫苗。亞單位疫苗僅有幾種主要表面蛋白，因而能消除病毒（或細(xì)菌）的許多無關(guān)抗原決定簇和粗制或半提純的病毒（或細(xì)菌）制劑誘發(fā)的不良反應(yīng)。表5-6滅活疫苗、減毒活疫苗和亞單位疫苗三類疫苗的比較滅活疫苗減毒活疫苗亞單位疫苗制備方法通過化學(xué)或物理方法使病原體失活通過非正常培養(yǎng)選擇減毒株或無毒株以化學(xué)方法獲得病原體的某些具有免疫原性的成分免疫機(jī)理病原體失去毒力但保持免疫原性，接種后產(chǎn)生特異抗體或致敏淋巴細(xì)胞接種后病原體在體內(nèi)有一定生長(zhǎng)繁殖能力，類似隱性感染，產(chǎn)生細(xì)胞、體液和局部免疫接種后能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫疫苗穩(wěn)定性相對(duì)穩(wěn)定相對(duì)不穩(wěn)定穩(wěn)定毒力回升不可能有可能不可能免疫接種多次免疫接種一般為一次性多次免疫接種安全性較安全對(duì)免疫缺陷者有危險(xiǎn)安全性好常用疫苗乙腦、脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗麻疹、脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗白喉、破傷風(fēng)類毒素，A群腦膜炎球菌多糖疫苗二、新一代病毒疫苗新一代病毒疫苗（新型疫苗）主要指利用基因工程技術(shù)研制的疫苗?；蚬こ虂唵挝灰呙?、基因工程載體疫苗、核酸疫苗、基缺失活疫苗，通常也習(xí)慣地將遺傳重組疫苗、合成肽疫苗和抗獨(dú)特型抗體疫苗包括在新型疫苗范疇。

1.NewGenerationvaccineorHigh-techVaccine（高技術(shù)疫苗）①基因工程亞單位疫苗（geneengineeringsubunitvaccine)②基因工程載體疫苗(geneengineeringvectorvaccine)③核酸疫苗(nucleicacidvaccine)④基因缺失活疫苗(genedeletedlivevaccine)⑤蛋白工程疫苗(proteinengineeringvaccine)2.遺傳重組疫苗(geneticrecombinantvaccine)

3.合成肽疫苗(synthticpeptidevaccine)4.抗獨(dú)特型Ab疫苗(anti-idiotypeAbvaccine)5.微膠囊可控緩釋疫苗(controllablereleasedmicro-capsulevaccine)（一）基因工程疫苗geneengineeringvaccine基因工程疫苗，也稱遺傳工程疫苗（geneticengineeringvaccine），指使用重組DNA技術(shù)克隆并表達(dá)保護(hù)性抗原基因，利用表達(dá)的抗原產(chǎn)物，或重組體本身制成的疫苗。主要包括基因工程亞單位疫苗，基因工程載體疫苗，核酸疫苗，基因缺失活疫苗，及蛋白工程疫苗等五種。

1、基因工程亞單位疫苗(geneengineeringsubunitvaccine)基因工程亞單位疫苗，主要是指將基因工程表達(dá)的蛋白抗原純化后制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：①產(chǎn)量高；②純度高；③安全性高；④用于病原體難于培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。缺點(diǎn)：與傳統(tǒng)亞單位疫苗相比，免疫效果較差。增強(qiáng)其免疫原性的方法：①調(diào)整基因組合使之表達(dá)成顆粒性結(jié)構(gòu)②是在體外加以聚團(tuán)化，包入脂質(zhì)體或膠囊微球③加入有免疫增強(qiáng)作用的化合物作為佐劑（adjuvant）。

2、基因工程載體疫苗（geneengineeringvectorvaccine）基因工程載體疫苗是指利用微生物做載體，將保護(hù)性抗原基因重組到微生物體中，使用能表達(dá)保護(hù)性抗原基因的重組微生物制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：疫苗多為活疫苗，重組體用量少，抗原不需純化，載體本身可發(fā)揮佐劑效應(yīng)增強(qiáng)免疫效果缺點(diǎn)：曾感染過腺病毒或者接種過痘苗的人，對(duì)載體微生物已具有免疫力，使之接種后不易繁殖，因而影響免疫效果。

3、核酸疫苗（nucleicacidvaccine）核酸疫苗或稱基因疫苗（genevaccine），指使用能夠表達(dá)抗原的基因本身，即核酸制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：①易于制備；②便于保存；③可多次免疫并且容易制成多聯(lián)多價(jià)疫苗。缺點(diǎn)：①外源核酸是否會(huì)整合到染色體中引起癌變；②能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產(chǎn)生，免疫耐受等。4、基因缺失活疫苗（genedeletedlivevaccine）基因缺失活疫苗使用分子生物學(xué)技術(shù)去除與毒力有關(guān)的基因獲得的缺失突變毒株制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：①有突變性狀明確、穩(wěn)定；②不易返祖、毒力恢復(fù)；③是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。5、蛋白工程疫苗（proteinengineeringvaccine）蛋白工程疫苗是指將抗原基因加以改造，使之發(fā)生點(diǎn)突變、插入、缺失、構(gòu)型改變，甚至進(jìn)行不同基因或部分結(jié)構(gòu)域的人工組合，以期達(dá)到增強(qiáng)其產(chǎn)物的免疫原性，擴(kuò)大反應(yīng)譜，去除有害作用或副反應(yīng)的一類疫苗。（二）遺傳重組疫苗（geneticrecombinantvaccine）遺傳重組疫苗是指使用經(jīng)遺傳重組方法（geneticrecombination）獲得的重組微生物制成的疫苗。通常是將對(duì)人體無致病性的弱毒株與強(qiáng)毒株（野毒株）混合感染，弱毒株與野毒株間發(fā)生基因組片段交換造成重組，然后使用特異方法篩選出對(duì)人體不致病的但又含有野毒株強(qiáng)免疫原性基因片段的重組毒株。（三）合成肽疫苗（Syntheticpeptidevaccine）合成肽疫苗是指使用化學(xué)方法合成能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)的多肽制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：①純度和安全性高；②副作用??；③可長(zhǎng)期在常溫下保存；缺點(diǎn)：①其抗原性單一；②免疫原性弱。因此須用幾種合成肽抗原聯(lián)合使用，還須用多種方法提高合成肽的免疫原性。（四）抗獨(dú)特型抗體疫苗（anti-idiotypevaccine）抗獨(dú)特型抗體疫苗是指使用與特定抗原的免疫原性相近的抗體（ab2）做抗原制成的疫苗。目前此疫苗尚處于理論性研究階段。（五）微膠囊可控緩釋疫苗(controllablereleasedmicro-capsulevaccine)微膠囊可控緩釋疫苗，指使用微膠囊技術(shù)將特定抗原包裹后制成的疫苗。特點(diǎn)①小于10μm的微膠囊在注射部位可被巨噬細(xì)胞吞噬并攜帶至淋巴結(jié)附近和免疫系統(tǒng)其他部位，具有更強(qiáng)的免疫效果。②大于30μm的微膠囊，更適于做可控緩釋。由于微膠囊的保護(hù)作用，母體抗體不能使抗原失活，可用于嬰幼兒免疫接種。③微膠囊在腸道內(nèi)不受酸或酶的影響，可用于口服。

第三節(jié)基因工程病毒疫苗的開發(fā)現(xiàn)狀一、急需研制的基因工程病毒疫苗急需研制的基因工程病毒疫苗主要有十幾種疾病-預(yù)防性疫苗治療性疫苗艾滋病+（需要）+乙型肝炎++丙型肝炎++戊型肝炎+-（不需要）EBV肝炎++表4-2需要研制的基因工程病毒疫苗人乳頭瘤病毒感染（宮頸癌）++單純皰疹病毒感染（Ⅰ、Ⅱ型）++巨細(xì)胞病毒感染++呼吸道和細(xì)胞病毒感染+-輪狀病毒感染+-登革熱病毒感染+-埃博拉病毒感染+-注：“+”表示需要，“-”表示不需要

二、值得使用基因工程技術(shù)進(jìn)行改造的傳統(tǒng)病毒疫苗對(duì)那些免疫保護(hù)效果差，或副反應(yīng)較大，或成本較高，或使用不方便的傳統(tǒng)疫苗，使用基因工程技術(shù)對(duì)其改造，或用基因工程疫苗取而代之，將具有極大的市場(chǎng)前景。傳統(tǒng)疫苗可能使用的基因工程疫苗類型流感基因缺失活疫苗，遺傳重組活疫苗甲型肝炎重組活疫苗，亞單位疫苗（病毒樣顆粒）乙型腦炎基因缺失活疫苗水痘重組活疫苗，基因缺失活疫苗麻疹重組活疫苗，基因工程亞單位疫苗黃熱重組活疫苗狂犬（人和獸）重組活疫苗，亞單位疫苗（病毒樣顆粒）出血熱基因缺失活疫苗腺病毒遺傳重配活疫苗，重組活疫苗輪狀病毒亞單位疫苗（病毒樣顆粒）聯(lián)合疫苗重組多價(jià)活疫苗，亞單位聯(lián)合疫苗表5-3值得使用基因工程技術(shù)進(jìn)行改造的傳統(tǒng)病毒疫苗

三、重要病毒性疾病基因工程疫苗研究進(jìn)展目前，病毒基因工程疫苗主要集中在研制常規(guī)技術(shù)不能或很難解決的新疫苗和改造免疫保護(hù)效果差，負(fù)反應(yīng)較大，或成本較高，或使用不方便的傳統(tǒng)疫苗上，有的疫苗兼有預(yù)防和治療兩種功能現(xiàn)將我國(guó)重要的病毒病基因工程疫苗研究狀況概述如下（參見表5-4）。疫苗及靶抗原疫苗類型研究開發(fā)現(xiàn)狀國(guó)內(nèi)國(guó)外1艾滋病毒苗—env.gag.pol.nef.v3亞單位多肽（細(xì)胞）亞單位多肽（酵母）亞單位多肽（昆蟲）亞單位多肽（痘苗）亞單位多肽（昆蟲）亞單位多肽（細(xì)胞）載體活疫苗（痘苗）載體活疫苗（ALVAC）研究研究研究研究研究研究研究——Ⅱ期Ⅱ期Ⅱ期Ⅰ期研究研究Ⅰ期Ⅰ期表5-4我國(guó)重要病毒病基因工程疫苗研究開發(fā)狀況完整病毒顆粒減毒活疫苗（SIV）滅活疫苗（SIV）減毒活疫苗（HIV）減毒活疫苗（HLIV）DNA疫苗————研究——研究Ⅰ期Ⅰ期（動(dòng)物）研究研究Ⅰ期聯(lián)合免疫多肽+痘病毒DNA+痘病毒研究研究Ⅰ期研究2乙肝疫苗—S亞單位顆粒（酵母）亞單位顆粒（CHO）亞單位顆粒（痘苗）載體活疫苗（痘苗）載體活疫苗（Ad）亞單位顆粒（植物）DNA疫苗引進(jìn)生產(chǎn)生產(chǎn)Ⅰ期研究研究研究生產(chǎn)研究研究研究Ⅰ期Ⅰ期研究—S2+S亞單位顆粒（CHO）載體活疫苗（痘苗）DNA疫苗研究研究研究生產(chǎn)研究研究—S1+S2+S亞單位顆粒（CHO）亞單位顆粒（酵母）載體活疫苗（痘苗）DNA疫苗研究研究研究研究I期Ⅲ期研究研究—Epitop(S1,S2,S)載體活疫苗（沙門菌）研究I期—C亞單位顆粒（大腸）載體活疫苗（痘苗）DNA疫苗研究研究研究研究研究研究3丙肝疫苗——C+E1+E2亞單位多肽（CHO）DNA疫苗研究研究研究研究4戊肝疫苗——ORF2,3亞單位多肽（大腸）亞單位多肽（酵母）亞單位多肽（昆蟲）DNA疫苗研究研究研究研究研究研究研究研究5呼吸道合胞病毒疫苗—F+G載體活疫苗（痘苗）載體活疫羈（Ad4）研究研究研究研究—F亞單位多肽（大腸）研究Ⅱ期6巨細(xì)胞病毒疫苗——完整病毒顆粒減毒活疫苗（Towne）基因缺失活疫苗————II期研究7單純皰疹病毒疫苗——完整病毒顆粒基因缺失活疫苗——I期——gD,gB載體活疫苗（痘苗）DNA疫苗研究研究研究研究8登革熱病毒疫苗——Dengnel,2,3,4E,Prem-E,NS1,NS2減毒活疫苗分子減毒活疫苗亞單位多肽（痘苗）亞單位多肽（昆蟲）亞單位多肽（原核）亞單位顆粒（痘苗）亞單位顆粒（昆蟲）載體活疫苗（痘苗）DNA疫苗研究研究研究研究研究研究研究研究研究Ⅱ期研究研究研究研究研究研究研究研究9乳頭瘤病毒疫苗——L1、L2、E6、E7載體活疫苗（痘苗）亞單位顆粒（酵母）亞單位顆粒（昆蟲）亞單位顆粒（原核）DNA疫苗研究研究研究研究研究研究研究II期研究研究——E6、E7載體活疫苗（痘苗）研究I期10EB病毒疫苗——gp350,LMP1,LM2,C—Epitop載體活疫苗（痘苗）業(yè)單位多肽（合成）亞單位多肽（CHO）亞單位多肽（昆蟲）免疫細(xì)胞苗（樹突）DNA疫苗I期研究研究研究研究研究研究研究研究研究研究研究11甲肝疫苗——ORF載體活疫苗（痘苗）亞單位顆粒（昆蟲）I期研究研究研究——VP1，VP3亞單位多肽（大腸）載體活疫苗（polio）研究研究研究研究12麻疹疫苗—HA+F載體活疫苗（ALVAC）載體活疫苗（痘苗）DNA疫苗——I期研究I期研究研究—完整病毒基因缺失活疫苗研究研究13出血熱疫苗—G1，G2，NP載體活疫苗（痘苗）載體活疫苗（Ad）亞單位顆粒（痘苗）亞單位顆粒（昆蟲）研究研究研究研究I期——研究研究14小兒輪狀病毒疫苗—人/猴病毒重組減毒活疫苗（重配）——IV期—人/牛病毒重組減毒活疫苗（重配）——III期—人/羊病毒重組減毒活疫苗（重配）IV期———VP4，VP7，VP6亞單位顆粒（昆蟲）載體活疫苗（原核）載體活疫苗（痘苗）載體活疫苗（Ad）研究——研究研究研究研究研究研究15狂犬病疫苗—外膜糖蛋白載體活疫苗（痘病毒）研究IV期（動(dòng)物）載體活疫苗（Ad）研究研究多價(jià)疫苗—DTP+HBV，DTP+IVP，DTP+IVP+HBVDTP+HBV+HAV聯(lián)合疫苗（傳統(tǒng)技術(shù)+基因工程）研究II期16—甲肝、乙肝、麻疹、RSV載體活疫苗（痘苗）多價(jià)DNA疫苗研究研究研究研究1、艾滋?。ˋIDS）疫苗（1）研究的三階段：①最早使用其膜抗原gp120（Glucoseprotein120）②膜抗原加其他能誘發(fā)細(xì)胞免疫抗原的多抗原疫苗的復(fù)雜設(shè)計(jì)；③在泰國(guó)使用gp120亞單位疫苗數(shù)千人免疫接苗無效后，改為先用重組痘病毒ALVA（疫苗注射后），再使用gp120亞單位疫苗加強(qiáng)，80%以上的人產(chǎn)生了特異的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。（2）HIV感染特點(diǎn)：①HIV直接感染破壞免疫細(xì)胞；②HIV變異極快。（3）AIDS疫苗研究方向：①能誘發(fā)有效的中和抗體，阻止或大部阻止HIV感染免疫細(xì)胞；②能誘發(fā)強(qiáng)細(xì)胞免疫；③中和抗體屏障被部分突破時(shí)能有效清除被感染細(xì)胞，是研究中應(yīng)統(tǒng)籌考慮的。2、乙型肝炎病毒（HBV）疫苗（1）目前存在的問題：人群中約10%左右對(duì)現(xiàn)有乙肝疫苗（僅含S抗原的疫苗）無反應(yīng)；（2）研制方向：使用含前S（主要是前SI）的新一代乙肝基因工程疫苗，可使對(duì)現(xiàn)有S乙肝疫苗無反應(yīng)的人群產(chǎn)生良好的免疫反應(yīng)。目前，含前S的疫苗，新佐劑乙肝疫苗，乙肝抗原抗體復(fù)合物疫苗，治療性乙肝研究的熱點(diǎn)。（3）丙型肝炎病毒（HCV）疫苗

丙型肝炎感染約占人群2%左右，也就是有2000多萬感染者，大部分都會(huì)轉(zhuǎn)為慢性，并導(dǎo)致肝硬化和肝癌，危害遠(yuǎn)大于乙肝。研究方向；①多數(shù)實(shí)驗(yàn)集中于使用病毒外膜蛋白E1+E2研制病毒樣顆粒的亞單位疫苗和②使用載體進(jìn)行重組活疫苗研究。③由于丙肝病毒變異快，極易沖破已有中和抗體的屏障，④選擇變異不大且能誘發(fā)細(xì)胞免疫的抗原是目前研究的重要的方向之一。4、戊型肝炎病毒（HEV）疫苗戊型肝炎病毒屬杯狀病毒科，單股正鏈RNA病毒，基因組全長(zhǎng)約7.4kb。經(jīng)消化道傳播，暴發(fā)流行和散發(fā)兩種，戊型肝炎的臨床表現(xiàn)比甲型肝炎重。選擇基因工程的手段研制戊型肝炎疫苗唯一的方法?；蚬こ桃呙缰饕捎迷思?xì)胞、酵母細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞三種表達(dá)體系。

我國(guó)目前以原核細(xì)胞和酵母細(xì)胞對(duì)戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白均表達(dá)成功（張明程，1999）抗原性在世界范圍內(nèi)穩(wěn)定，表明戊型肝炎病毒基因工程疫苗將對(duì)該病的預(yù)防具有良好的效果。

5、呼吸道合胞病毒（RSV）疫苗

呼吸道合胞病毒屬單股副鏈RNA病毒，是引起嬰幼兒肺炎的主要病因。RSV保護(hù)性抗原主要是其糖蛋白F和G，高度糖化蛋白，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，屬結(jié)構(gòu)依賴性抗原，產(chǎn)生中和抗體的能力都很差，給研制RSV蛋白亞單位疫苗帶來了一定困難。

研制方向：目前研制的高度減毒的非復(fù)制型載體是研制該疫苗的重要途徑；制備減毒活疫苗是RSV疫苗研制的另一個(gè)重要途徑，負(fù)鏈RNA病毒cDNA轉(zhuǎn)染技術(shù)的成功給使用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)制備RSV的分子減毒活疫苗帶來了希望，也是目前RSV疫苗研制重要途徑。6、人巨細(xì)胞病毒（HMV）疫苗（1）危害：HMV屬皰疹病毒科，通常為隱性感染，無明顯臨床癥狀。然而HMV的潛伏感染將對(duì)人體健康造成極大威脅。（2）問題：該疫苗株雖能誘發(fā)體液和細(xì)胞免疫，但保護(hù)作用不強(qiáng)，且其潛在的致癌性，以及尚未能最終排除的潛伏感染性，使該類活疫苗尚未能廣泛使用。（3）研制方向：

目前使用分子生物學(xué)技術(shù)，有目的地去除與與毒力、潛伏及腫瘤相關(guān)基因的分子減毒疫苗株正在研制中?；蚬こ碳夹g(shù)表達(dá)的gB做亞單位疫苗或重組活疫苗的研究已成為目前HMV疫苗研究的一個(gè)重要方向。7、單純皰疹病毒（HSV）疫苗（1）危害：?jiǎn)渭儼捳畈《居袃煞N類型（HSVI和HSVII），在人群中感染相當(dāng)廣泛。HSVI人群感染率高到50%-90%，多為隱性潛伏性感染。母嬰傳播中皰疹性角膜炎視力障礙新生兒死亡率高達(dá)60%。在病毒性腦炎中，HSVI型感染引起的占10%。HSVII主要經(jīng)過性傳播，病毒檢出率可達(dá)5%-12%。HSVII感染是宮頸癌的重要誘因之一。（2）方向：

病毒糖蛋白gD和gB是主要的保護(hù)性抗原，與gC、gE、gI聯(lián)合使用可誘生體液和細(xì)胞免疫，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，HSVIIgD的核酸疫苗可以保護(hù)動(dòng)物免受感染及隨后的潛伏感染，這些研究為單純皰疹病毒疫苗的研究提供了有力的證據(jù)。8、登革熱病毒疫苗（Denguefevervirusvaccine）（1）危害：登革熱病毒屬黃病毒科，為單股正鏈RNA病毒，有4個(gè)血清型，蚊子叮咬傳播給人，在我國(guó)南方熱帶亞熱帶地區(qū)發(fā)生過多次登革熱流行。（2）方向：

①通過表達(dá)prM-E形成病毒樣顆粒的亞單位疫苗顯示了較好安全性和免疫保護(hù)性，是該疫苗研究的重要方向。②使用該病毒感染性cDNA進(jìn)行的分子減毒活疫及多種亞型嵌合的減毒活疫苗研究也取得了較好效果，是另一個(gè)重要途徑。

9、人乳頭瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）疫苗人乳頭瘤病毒是環(huán)型雙鏈dsDNA病毒，其中與宮頸癌密切相關(guān)的有HPV16、18、33、58等亞型。外殼蛋白L1和L2能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液和細(xì)胞免疫，預(yù)防乳頭瘤病毒感染；E6和E7是與細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)的蛋白，表達(dá)E6和E7的重組痘病毒疫苗能有效阻止HPV陽性的宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。表達(dá)HPV16和HPV18兩型E6和E7的重組痘苗病毒已進(jìn)行了小量人體觀察，證明產(chǎn)生了部分抑制腫瘤生長(zhǎng)的結(jié)果（1996）。L1和L2可在細(xì)菌、酵母及痘苗病毒載體中很好表達(dá)，并形成病毒樣顆粒，有很好的安全性和免疫效果。治療性疫苗以E6和E7為主，加上L1和L2可增強(qiáng)治療性疫苗免疫效果。10、Epstein-Barr病毒（EB）疫苗（1）危害：EB病毒為皰疹病毒科，嗜淋巴細(xì)胞病毒屬，感染廣泛，90%以上成人都感染過此病毒。（2）方向：①阻斷其原發(fā)感染；②清除鼻咽癌細(xì)胞。

（3）方法：前者主要以EBV的MA（如gp350）為免疫原，gp350亞單位疫苗和表達(dá)gp350的重組痘苗病毒活疫苗顯示了一定抗瘤作用；后者主要以EBV的潛伏膜蛋白LMP1和LMP2為免疫原，進(jìn)行了多肽、重組活疫苗、DNA疫苗免疫細(xì)胞疫苗等多種嘗試。11、埃博拉病毒（EBV）疫苗vaccine）

埃博拉病毒是單股負(fù)鏈RNA病毒，屬絲狀病毒，致死率極高。致病機(jī)制尚不清楚，曾試用過滅活疫苗，效果不好，減毒疫苗存在危險(xiǎn)性，至今尚未成功。

第四節(jié)疫苗生產(chǎn)工藝流程

菌（毒）種培養(yǎng)物（培養(yǎng)基、動(dòng)物、禽胚或細(xì)胞等）收獲抗原（培養(yǎng)液、含毒組織、胚液或細(xì)胞液等）配苗

分裝凍干成活疫苗或滅活后制成滅活疫苗。病毒性細(xì)胞疫苗的制造工藝流程健康動(dòng)物（或胚胎）組織原料細(xì)胞懸液生長(zhǎng)細(xì)胞病毒液配苗分裝凍干、扎蓋帖簽活疫苗基礎(chǔ)種毒生產(chǎn)用種毒原料保護(hù)劑配制滅菌細(xì)胞培養(yǎng)液傳代細(xì)胞滅活病毒液配苗（混勻、乳化）分扎蓋帖簽裝滅活疫苗檢驗(yàn)原料佐劑配制滅菌滅活檢驗(yàn)配制培養(yǎng)收獲病毒性組織疫苗的制造工藝流程感染動(dòng)物或胚胎分裝、扎蓋、貼簽健康動(dòng)物或SPF雞胚等健康動(dòng)物或SPF雞胚等動(dòng)物或SPF雞胚等基礎(chǔ)種毒生產(chǎn)用種毒收獲感染組織或胚液純化配制成含毒懸液配苗分裝凍干活疫苗保護(hù)劑原料配制檢驗(yàn)滅活病毒液配苗、乳化滅活疫苗原料佐劑配制滅活檢驗(yàn)十萬級(jí)潔凈走道以馬立克CVI988/Rispens為例，簡(jiǎn)述細(xì)胞苗生產(chǎn)工藝細(xì)胞制作1、選擇孵育10天、發(fā)育良好的SPF雞胚；2、胚體去頭及內(nèi)臟；3、加入胰蛋白酶，采取磁力攪拌的方法將雞胚組織消化成單個(gè)的細(xì)胞；4、冷凍離心后，取細(xì)胞；5、將細(xì)胞加入培養(yǎng)液(進(jìn)口試劑)，制成細(xì)胞懸液(加入進(jìn)口血清)；6、將細(xì)胞懸液加入轉(zhuǎn)瓶，置37℃培養(yǎng)；工藝介紹工藝介紹工藝介紹工藝介紹工藝介紹工藝介紹接毒1、細(xì)胞經(jīng)37℃培養(yǎng)24小時(shí)，即可長(zhǎng)成細(xì)胞單層；2、將種毒接入細(xì)胞單層（必要時(shí)需吸附30分鐘左右）；3、加入培養(yǎng)液，置37℃培養(yǎng)。工藝介紹工藝介紹工藝介紹收獲1、含毒細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)60-72小時(shí)，病變達(dá)80%以上時(shí)即可收獲；2、將轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)液棄去；3、加入胰酶-EDTA消化液（使細(xì)胞間結(jié)構(gòu)疏松），將細(xì)胞單層消化成單個(gè)細(xì)胞；4、加入停消液終止消化；5、冷凍離心后取細(xì)胞，用凍存液懸浮。工藝介紹工藝介紹工藝介紹工藝介紹分裝、凍存1、使用進(jìn)口分裝機(jī)，將含毒細(xì)胞的凍存液準(zhǔn)確地分入安瓿瓶（懸液瓶置于磁力攪拌器上，確保均勻），裝夾；2、將安瓿瓶放入液氮程序降溫儀，采取特殊工藝使其降溫至-70℃；3、將安瓿（夾）移入液氮（-196℃）保存。工藝介紹德國(guó)引進(jìn)R921全自動(dòng)安瓿灌封機(jī)從美國(guó)CBS公司引進(jìn)程序降溫儀液氮苗存放間全景以新城疫活疫苗（ZM10）為例簡(jiǎn)述組織苗生產(chǎn)工藝10萬級(jí)凈化條件下的雞胚前孵化廠房(3)1、種毒選擇必須選擇SPF蛋制作種毒；種毒分為原始種毒、基礎(chǔ)種毒、種毒批；胚體符合新城疫典型特征：頭、肢、腹有出血點(diǎn)；心臟腫大，心尖有出點(diǎn)；胚液HA達(dá)512以上；效價(jià)達(dá)108.5EID50/0.1ml；無細(xì)菌、霉菌、支原體和外源病毒。2、選擇雞胚必須選擇SPF蛋；產(chǎn)蛋日齡最好控制在２６周～５６周內(nèi)；盡量采購３天以內(nèi)的新鮮種蛋，最遲不超過七天；種蛋產(chǎn)出后４小時(shí)內(nèi)進(jìn)行熏蒸消毒，種蛋在１４～１８℃，相對(duì)濕度６５％左右最適；單枚蛋重４８～６０g之間，雞蛋大小均勻一致；蛋殼質(zhì)量：應(yīng)選擇表面致密，鈣質(zhì)分布均勻的種蛋，剔除沙殼，畸形，破殼及表面不清潔的種蛋．操作時(shí)要輕拿輕放；入孵前進(jìn)行熏蒸消毒；孵化溫度３７．５～３８．５℃，相對(duì)濕度５５～７０％；翻蛋次數(shù)一次／２小時(shí)；孵化至５～７日齡須照蛋，剔除不受精和死胚；孵化至10日齡備用。3、接種種毒將種毒作數(shù)萬倍稀釋；通過自動(dòng)接種機(jī)，將種毒由雞胚氣室部位接入到尿囊腔內(nèi)；用膠液將接種孔封閉；后孵化：溫度36.5-37℃，相對(duì)濕度在60%左右；后孵化不翻蛋。4、收獲將后孵至72-96小時(shí)的雞胚置4℃冷卻6小時(shí)；檢查胚體是否符合新城疫典型特征：頭、肢、腹有出血點(diǎn)；心臟腫大，心尖有出點(diǎn)；胚液HA達(dá)512以上；通過自動(dòng)收獲機(jī)收獲雞胚的尿囊液；收獲的尿液經(jīng)病毒濃縮設(shè)備進(jìn)行4-10倍濃縮（產(chǎn)品的均一與穩(wěn)定）；濃縮抗原再經(jīng)除菌設(shè)備進(jìn)行除菌。美國(guó)引進(jìn)MILLIPORE病毒濃縮器5、中間檢測(cè)效價(jià)檢測(cè)：抗原效價(jià)必須達(dá)08.5EID50/0.1ml×濃縮倍數(shù)。無細(xì)菌、霉菌、支原體和外源病毒。6、配苗、分裝、凍干、軋蓋、貼標(biāo)根據(jù)濃縮倍數(shù)、檢測(cè)的效價(jià)和設(shè)計(jì)羽份確定配苗比例，以期產(chǎn)品的均一與穩(wěn)定；用自動(dòng)分裝機(jī)進(jìn)行定量分裝（半加塞）；進(jìn)入凍干機(jī)進(jìn)行程序凍干（自由水和結(jié)合水）；凍干結(jié)束后，進(jìn)行軋蓋、貼標(biāo)（先確定羽份）、包裝（即時(shí)包裝）。德國(guó)STERIS公司引進(jìn)LYOVAC凍干機(jī)(1)德國(guó)引進(jìn)BOSCH全自動(dòng)疫苗分裝線(1)德國(guó)引進(jìn)BOSCH全自動(dòng)疫苗分裝線(2)德國(guó)引進(jìn)BOSCH全自動(dòng)疫苗分裝線(3)7、成品檢驗(yàn)物理性狀檢測(cè)剩余水分測(cè)定無菌檢驗(yàn)支原體檢驗(yàn)鑒別檢驗(yàn)安全檢驗(yàn)效力檢驗(yàn)真空度檢測(cè)耐老化檢驗(yàn)外源病毒檢驗(yàn)

第五節(jié)我國(guó)基因工程病毒疫苗的開發(fā)戰(zhàn)略研究（Developmentstrategyofgeneengineeringvaccineinchina)一、首先要明確基因工程病毒疫苗在整個(gè)病毒疫苗研究開發(fā)中的地位和任務(wù)(Statusandtask)1主要常規(guī)技術(shù)不能或很難解決的新疫苗(Newgenerationvaccine)

①不能或難于培養(yǎng)的病原體；②有潛在致癌性或免疫病理作用的病原體。2、傳統(tǒng)疫苗的改造（(Reconstructionoftraditionalvaccine）主要針對(duì)免疫效果差，負(fù)反應(yīng)大，成本較高和使用不方便的傳統(tǒng)疫苗進(jìn)行改造。3、加強(qiáng)治療性疫苗研究

（Intensificationofcurevaccineresearch)近年來，使用疫苗進(jìn)行疾病治療的研究發(fā)展迅速，對(duì)引起慢性或持續(xù)性感染或與誘發(fā)腫瘤十分相關(guān)的病毒病，治療性疫苗的研究將具有重要性。4、發(fā)展多價(jià)疫苗

多價(jià)疫苗成本低，免疫程序簡(jiǎn)單，是疫苗研究的發(fā)展方向。其發(fā)展方向?yàn)椋?/p>

①使用基因工程技術(shù)對(duì)傳統(tǒng)疫苗進(jìn)行改造，獲得聯(lián)合疫苗；②發(fā)展具有高導(dǎo)入、高表達(dá)、強(qiáng)免疫、可加強(qiáng)的新型載體。二、目標(biāo)的選擇要以社會(huì)和市場(chǎng)需求為導(dǎo)向

1、研制預(yù)防我國(guó)嚴(yán)重病毒病的疫苗放在重點(diǎn)位置2、大力發(fā)展有市場(chǎng)前景新型疫苗

三、加強(qiáng)新型疫苗的基礎(chǔ)研究

1、加強(qiáng)疾病免疫保護(hù)機(jī)制的研究（Intensifytheresearchofimmunityprotectionmechanism）(1)選取病原體的某些抗原或某些抗原表位，或刪除某些無用甚至有害的組分而構(gòu)成的，因而必須了解這些抗原、表位或組分在病原體致病和免疫中的作用和機(jī)體對(duì)它們的應(yīng)答。(2)一些發(fā)病和免疫機(jī)制比較簡(jiǎn)單的疾病已用常規(guī)疫苗解決了，留下的是一些比較復(fù)雜和較難解決的疾病或問題，例如呼吸道、腸道和生殖系統(tǒng)黏膜感染，其病原體常多型善變；易于產(chǎn)生持續(xù)感染基因整合的病毒；免疫病理機(jī)制不清的病毒；病原體結(jié)構(gòu)復(fù)雜，發(fā)育階段多，免疫保護(hù)作用不強(qiáng)；常規(guī)疫苗由于反應(yīng)大，效果差或引起個(gè)別嚴(yán)重并發(fā)癥，需用新型疫苗來代替。

2、加強(qiáng)新型疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制的研究（Intensifytheresearchofimmunityprotectionmechanismofnovelvaccine）新型疫苗抗原的免疫保護(hù)效果是新型疫苗研究的首要問題。活疫苗（包括基因工程活疫苗）最近似地模擬了感染后免疫，因而基因工程多肽疫苗和合成寡肽往往是用單一或少數(shù)幾種保護(hù)性抗原，甚至單一個(gè)主要抗原表位代替完整的菌體或病毒顆粒。產(chǎn)生的兩個(gè)問題：

第一，分子越小，其免疫原性越弱。因此多肽疫苗常需要用強(qiáng)有力的佐劑，以增強(qiáng)其免疫原性，合成寡肽則除了強(qiáng)佐劑以外，還要求偶聯(lián)于一種載體蛋白上。

第二，產(chǎn)生的免疫僅針對(duì)一種抗原，甚至一個(gè)抗原表位，在免疫的綜合性方面就與感染后免疫相差甚遠(yuǎn)，其有效保護(hù)程度和時(shí)間還需通過實(shí)踐加以檢驗(yàn)。

基因工程疫苗類型和表達(dá)系統(tǒng)的選擇對(duì)獲得有效的免疫保護(hù)常用關(guān)鍵性意義。新型疫苗的作用方式對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生重要影響。任何疫苗的作用機(jī)體的方式都不會(huì)與病原自然作用方式完全相同，因此必然產(chǎn)生新的免疫特點(diǎn)。在載體疫苗，特別是核酸疫苗中，這個(gè)問題尤為明顯。在甲型流感的自然感染中，不同亞型間的共同抗原核蛋白無中和活性，也不能產(chǎn)生亞型間交叉保護(hù)。3、提高新型疫苗免疫效果(Enhancetheimmuneeffectofnewvaccine)基因工程多肽或寡肽疫苗成敗的關(guān)鍵是如何克服免疫原性弱、免疫綜合性差的問題。（1）多抗原表達(dá)（Multi-antigenexpression)新型疫苗的一個(gè)趨向是應(yīng)用二個(gè)以上抗原。第一類都是表面抗原（2種以上）；第二類是同時(shí)用表面與內(nèi)部抗原誘生中和抗體；第三類是用表面抗原與非結(jié)構(gòu)蛋白。（2）顆粒性抗原(Granularantigen)①在體外將多肽聚團(tuán)化可形成100nm左右顆粒，如加入皂角糖苷（QuilA）可形成“免疫刺激復(fù)合物”（Immunostimulatingcomplex，ISCOM）；②將抗原包入脂質(zhì)體內(nèi)可形成免疫脂質(zhì)體。

③應(yīng)用基因工程或化學(xué)交聯(lián)方法將B細(xì)胞表位結(jié)合到HbsAg,核心Ag或輪狀病毒核心表面，以增強(qiáng)免疫原性，特別是HbcAg具有T細(xì)胞依賴性和非依賴性免疫作用，是較為理想的顆粒型載體。④有些病原結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)可產(chǎn)生不含核酸的病毒樣顆粒，人類細(xì)小病毒B19株的殼蛋白可形成空心外殼；在痘苗中同時(shí)表達(dá)HIV的gag和env基因可形成類似病毒的顆粒。（3）蛋白質(zhì)工程抗原

①多個(gè)寡肽串聯(lián)成“雞尾酒式疫苗”是首先針對(duì)惡性瘧原蟲而提出的，是將多個(gè)不同的B細(xì)胞表位和多個(gè)TH細(xì)胞表位串聯(lián)起來，同時(shí)刪除可能存在的抑制性T細(xì)胞（suppressorTcell，Ts）表位。②另一個(gè)也屬于蛋白質(zhì)工程范疇，是將本來在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的抗原加以改造，使之表達(dá)于細(xì)胞膜表面，以增強(qiáng)其免疫原性。此外，將RSV的兩個(gè)表面抗原G和F組合成一個(gè)蛋白質(zhì)的研究也相當(dāng)深入，組合似不影響到它們各自的抗原特異性。（4）載體疫苗系統(tǒng)(Vectorvaccinesystem)

①基于病毒的載體活疫苗；②基于質(zhì)粒DNA的非病毒載體疫苗。前者方向是“非復(fù)制型”載體，需克服不安全性和不易加強(qiáng)使用的缺點(diǎn)；后者方向是改進(jìn)導(dǎo)入效率、提高抗原表達(dá)、增強(qiáng)免疫反應(yīng)強(qiáng)度、克服潛在的致癌及免疫病理作用。其優(yōu)點(diǎn)是：廉價(jià)、高效、易于組合成多價(jià)疫苗，是新型疫苗的重要組成部分。其缺點(diǎn)是：①盡管用于載體研究的這些微生物都是疫苗株，但做為活疫苗載體，可能產(chǎn)生接種副反應(yīng)。②機(jī)體內(nèi)針對(duì)載體的抗體，不論是免疫前存在的，或是免疫后產(chǎn)生的，都會(huì)對(duì)相應(yīng)載體疫苗的再次使用產(chǎn)生一定影響，從而影響其免疫效果。（5）免疫佐劑與聯(lián)合免疫

①強(qiáng)有力大都胞壁二肽的衍化物，如Syntex佐劑對(duì)多肽和寡肽都有很強(qiáng)的佐劑作用，能誘生抗體和細(xì)胞介導(dǎo)免疫，甚至超過了福氏完全佐劑，且無熱源性，不引起肉芽腫、關(guān)節(jié)炎或其他組織損害。在用HCG-的37肽作為避孕疫苗進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)時(shí)使用了這類佐劑。②淋巴因子如胸腺肽、白細(xì)胞介素-2、γ-干擾素等均曾用于免疫增強(qiáng)目的。IL-2似乎只對(duì)某些抗原有佐劑作用，且須每天注射。

③緩慢釋放抗原的微膠囊（microsphere），雖不是佐劑，卻能增強(qiáng)免疫效果。例如丙交酯與乙交酯共聚物，顆?？蛇_(dá)至3mm，小至1μm。④Al（OH）3依然獨(dú)占鰲頭。佐劑不但是亞單位疫苗成功的關(guān)鍵，而且還可通過選擇不同的佐劑改變疫苗免疫反應(yīng)類型，增加疫苗用途，提高新的免疫接種途徑。

不同類型疫苗聯(lián)合應(yīng)用，以達(dá)互補(bǔ)效果，是近年一些難度較大疫苗研制的新途徑。

第三節(jié)分析文體特征和表現(xiàn)手法2大考點(diǎn)書法大家啟功自傳賞析中學(xué)生，副教授。博不精，專不透。名雖揚(yáng)，實(shí)不夠。高不成，低不就。癱偏‘左’，派曾‘右’。面微圓，皮欠厚。妻已亡，并無后。喪猶新，病照舊。六十六，非不壽。八寶山，漸相湊。計(jì)平生，謚曰陋。身與名，一起臭?！举p析】寓幽默于“三字經(jīng)”，名利淡薄，人生灑脫，真乃大師心態(tài)。1.實(shí)用類文本都有其鮮明的文體特征，傳記的文體特征體現(xiàn)為作品的真實(shí)性和生動(dòng)性。傳記的表現(xiàn)手法主要有以下幾個(gè)方面：人物表現(xiàn)的手法、結(jié)構(gòu)技巧、語言藝術(shù)和修辭手法。2.在實(shí)際考查中，對(duì)傳記中段落作用、細(xì)節(jié)描寫、人物陪襯以及環(huán)境描寫設(shè)題較多，對(duì)于材料的選擇與組織也常有涉及。3.考生復(fù)習(xí)時(shí)要善于借鑒小說和散文的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，同時(shí)抓住傳記的主旨、構(gòu)思以及語言特征來解答問題。傳記的文體特點(diǎn)是真實(shí)性和文學(xué)性。其中，真實(shí)性是傳記的第一特征，寫作時(shí)不允許任意虛構(gòu)。但傳記不同于一般的枯燥的歷史記錄，它具有文學(xué)性，它通過作者的選擇、剪輯、組接，傾注了愛憎的情感；它需要用藝術(shù)的手法加以表現(xiàn)，以達(dá)到傳神的目的?？键c(diǎn)一分析文體特征從哪些方面分析傳記的文體特征？一、選材方面1.人物的時(shí)代性和代表性。傳記里的人物都是某時(shí)代某領(lǐng)域較

突出的人物。2.選材的真實(shí)性和典型性。傳記的材料比較翔實(shí)，作者從傳主

的繁雜經(jīng)歷中選取典型的事例，來表現(xiàn)傳主的人格特點(diǎn)，有

較強(qiáng)的說服力。3.傳記的材料可以是重大事件，也可以是日常生活小事。[知能構(gòu)建]二、組材方面1.從時(shí)序角度思考。通過抓時(shí)間詞語，可以迅速理清文章脈絡(luò)，

把握人物的生活經(jīng)歷及思想演變過程。2.從詳略方面思考。組材是與主題密切相關(guān)的。對(duì)中心有用的，

與主題特別密切的材料，是主要內(nèi)容，則需濃墨重彩地渲染，

要詳細(xì)寫；與主題關(guān)系不很密切的材料，是次要內(nèi)容，則輕

描淡寫，甚至一筆帶過。三、句段作用和標(biāo)題效果類別作用或效果開頭段內(nèi)容：開篇點(diǎn)題，渲染氣氛，奠定基調(diào)，表明情感。結(jié)構(gòu)：總領(lǐng)下文，統(tǒng)攝全篇；與下文某處文字呼應(yīng)，為下文做鋪墊或埋下伏筆；與結(jié)尾呼應(yīng)。中間段內(nèi)容：如果比較短，它的作用一般是總結(jié)上文，照應(yīng)下文；如果比較長(zhǎng)，它的作用一般是擴(kuò)展思路，豐富內(nèi)涵，具體展示，深化主題。結(jié)構(gòu)：過渡，承上啟下，為下文埋下伏筆、鋪墊蓄勢(shì)。結(jié)尾段內(nèi)容：點(diǎn)明中心，深化主題，畫龍點(diǎn)睛，升華感情、卒章顯志，啟發(fā)思考。結(jié)構(gòu)：照應(yīng)開頭；呼應(yīng)前文；使結(jié)構(gòu)首尾圓合。標(biāo)題①突出了敘述評(píng)議的對(duì)象。②設(shè)置懸念，激發(fā)讀者的閱讀興趣。③表現(xiàn)了傳主的精神或品質(zhì)。④點(diǎn)明了主旨，表達(dá)了作者的情感。⑤運(yùn)用修辭，使文章內(nèi)涵豐富，意蘊(yùn)深刻，增加了文章的厚度與深度。四、語言特色角度分析鑒賞傳記的類別自傳采用第一人稱，語言或幽默調(diào)侃或自然親切；他傳采用第三人稱，語言或樸實(shí)自然或文采斐然。語意和句式句子中的關(guān)鍵詞所包含的情感、態(tài)度等，整句與散句、推測(cè)與肯定、議論與抒情、祈使與反問等特殊句式，往往有著不同一般的表現(xiàn)力。這些都是分析語言的切入點(diǎn)。修辭的角度修辭一般是用來加強(qiáng)語言的表現(xiàn)力的。抓住修辭特點(diǎn)，就能從語言的表達(dá)效果上加以體味。語言風(fēng)格含蓄與明快、文雅與通俗、生動(dòng)與樸實(shí)、富麗與素淡、簡(jiǎn)潔與繁復(fù)等。1.(2015·新課標(biāo)全國(guó)卷Ⅰ)閱讀下面的文字，完成后面的題目。[即學(xué)即練]朱東潤(rùn)自傳1896年我出生在江蘇泰興一個(gè)失業(yè)店員的家庭，早年生活艱苦，所受的教育也存在著一定的波折。21歲我到梧州擔(dān)任廣西第二中學(xué)的外語教師，23歲調(diào)任南通師范學(xué)校教師。1929年4月間，我到武漢大學(xué)擔(dān)任外語講師，從此我就成為大學(xué)教師。那時(shí)武漢大學(xué)的文學(xué)院長(zhǎng)是聞一多教授，他看到中文系的教師實(shí)在太復(fù)雜，總想來一些變動(dòng)。用近年的說法，這叫作摻沙子。我的命運(yùn)是作為沙子而到中文系開課的。大約是1939年吧，一所內(nèi)遷的大學(xué)的中文系在學(xué)年開始，出現(xiàn)了傳記研究這一個(gè)課，其下注明本年開韓柳文。傳記文學(xué)也好，韓柳文學(xué)也不妨，但是怎么會(huì)在傳記研究這個(gè)總題下面開韓柳文呢？在當(dāng)時(shí)的大學(xué)里，出現(xiàn)的怪事不少，可是這一項(xiàng)多少和我的興趣有關(guān)，這就決定了我對(duì)于傳記文學(xué)獻(xiàn)身的意圖?！端膸烊珪偰俊酚袀饔涱?，指出《晏子春秋》為傳之祖，《孔子三朝記》為記之祖，這是三百年前的看法，現(xiàn)在用不上了。有人說《史記》《漢書》為傳記之祖，這個(gè)也用不上?！妒贰贰稘h》有互見法，對(duì)于一個(gè)人的評(píng)價(jià)，常常需要通讀全書多卷，才能得其大略?？墒窃趥饔浳膶W(xué)里，一個(gè)傳主只有一本書，必須在這本書里把對(duì)他的評(píng)價(jià)全部交代。是不是古人所作的傳、行狀、神道碑這一類的作品對(duì)于近代傳記文學(xué)的寫作有什么幫助呢？也不盡然。古代文人的這類作品，主要是對(duì)于死者的歌頌，對(duì)于近代傳記文學(xué)是沒有什么用處的。這些作品，畢竟不是傳記文學(xué)。除了史家和文人的作品以外，是不是還有值得提出的呢？有的，這便是所謂別傳。別傳的名稱，可能不是作者的自稱而是后人認(rèn)為有別于正史，因此稱為“別傳”。有些簡(jiǎn)單一些，也可稱為傳敘。這類作品寫得都很生動(dòng)，沒有那些阿諛奉承之辭，而且是信筆直書，對(duì)于傳主的錯(cuò)誤和缺陷，都是全部奉陳。是不是可以從國(guó)外吸收傳記文學(xué)的寫作方法呢？當(dāng)然可以，而且有此必要。但是不能沒有一個(gè)抉擇。羅馬時(shí)代的勃路塔克是最好的了，但是他的時(shí)代和我們相去太遠(yuǎn)，而且他的那部大作，所著重的是相互比較而很少對(duì)于傳主的刻畫，因此我們只能看到一個(gè)大略而看不到入情入理的細(xì)致的分析。英國(guó)的《約翰遜博士傳》是傳記文學(xué)中的不朽名作，英國(guó)人把它推重到極高的地位。這部書的細(xì)致是到了一個(gè)登峰造極的地位，但是的確也難免有些瑣碎。而且由于約翰遜并不處于當(dāng)時(shí)的政治中心，其人也并不能代表英國(guó)的一般人物，所以這部作品不是我們必須模仿的范本。是不是我國(guó)已經(jīng)翻譯過來的《維多利亞女王傳》可以作為范本呢？應(yīng)當(dāng)說是可以，由于作者著墨無多，處處顯得“頰上三毫”的風(fēng)神?？墒侵袊?guó)文人相傳的做法，正是走的一樣的道路，所以無論近代人怎么推崇這部作品，總還不免令人有“穿新鞋走老路”的戒心。國(guó)內(nèi)外的作品讀過一些，也讀過法國(guó)評(píng)論家莫洛亞的傳記文學(xué)理論，是不是對(duì)于傳記文學(xué)就算有些認(rèn)識(shí)呢？不算，在自己沒有動(dòng)手創(chuàng)作之前，就不能算是認(rèn)識(shí)。這時(shí)是1940年左右，中國(guó)正在艱苦抗戰(zhàn)，我只身獨(dú)處，住在四川樂山的郊區(qū)，每周得進(jìn)城到學(xué)校上課，生活也很艱苦。家鄉(xiāng)已經(jīng)陷落了，妻室兒女，一家八口，正在死亡線上掙扎。我決心把研讀的各種傳記作為范本，自己也寫出一本來。我寫誰呢？我考慮了好久，最后決定寫明代的張居正。第一，因?yàn)樗馨岩粋€(gè)充滿內(nèi)憂外患的國(guó)家拯救出來，為垂亡的明王朝延長(zhǎng)了七十年的壽命。第二，因?yàn)樗活檪€(gè)人的安危和世人的唾罵，終于完成歷史賦予他的使命。他不是沒有缺點(diǎn)的，但是無論他有多大的缺點(diǎn)，他是唯一能夠拯救那個(gè)時(shí)代的人物。(有刪改)【相關(guān)鏈接】①自傳和傳人，本是性質(zhì)類似的著述，除了因?yàn)樽髡吡?chǎng)的不同，因而有必要的區(qū)別以外，原來沒有很大的差異。但是在西洋文學(xué)里，常會(huì)發(fā)生分類的麻煩。我們則傳敘二字連用指明同類的文學(xué)。同時(shí)因?yàn)楣糯挠梅?，傳人曰傳，自敘曰敘，這種分別的觀念，是一種原有的觀念，所以傳敘文學(xué)，包括敘、傳在內(nèi)，絲毫不感覺牽強(qiáng)。(朱東潤(rùn)《關(guān)于傳敘文學(xué)的幾個(gè)名詞》)②朱先生確是有儒家風(fēng)度的學(xué)者，一身正氣，因此他所選擇的傳主對(duì)象，差不多都是關(guān)心國(guó)計(jì)民生的有為之士。他強(qiáng)調(diào)關(guān)切現(xiàn)實(shí)，拯救危亡，尊崇氣節(jié)與品格。這都是可以理解的。(傅璇琮《理性的思索和情感的傾注——讀朱東潤(rùn)先生史傳文學(xué)隨想》)★作為帶有學(xué)術(shù)性質(zhì)的自傳，本文有什么特點(diǎn)？請(qǐng)簡(jiǎn)要回答。答：________________________________________________解析本題考查分析文本的文體基本特征和語言特色。解答時(shí)，要在閱讀的基礎(chǔ)上，了解文章的文體特征、內(nèi)容的側(cè)重點(diǎn)、內(nèi)容表達(dá)的特征。本文作為一篇帶有學(xué)術(shù)性質(zhì)的自傳，突出特點(diǎn)之一就是偏重學(xué)術(shù)經(jīng)歷，介紹了自己的傳記文學(xué)觀及其形成過程。文章的開頭與結(jié)尾，將自己的生平與學(xué)術(shù)結(jié)合起來，尤其是為張居正寫傳原因的解說，結(jié)合當(dāng)時(shí)的社會(huì)背景和自己家庭的情況，更是呈現(xiàn)出學(xué)術(shù)背后的家國(guó)情懷。在行文方面，語言平易自然，穿插“怎么會(huì)在傳記研究這個(gè)總題下面開韓柳文呢？”“我寫誰呢？”等口語，語言平白如話，就像面對(duì)面閑談一樣。答案①偏重學(xué)術(shù)經(jīng)歷，主要寫自己的傳記文學(xué)觀及其形成過程；②寫生平與寫學(xué)術(shù)二者交融，呈現(xiàn)學(xué)術(shù)背后的家國(guó)情懷；③行文平易自然，穿插使用口語，就像和老朋友閑談一樣。1.一般和具體結(jié)合我們?cè)趯?duì)文本的一般性特征進(jìn)行分析的同時(shí)，也應(yīng)該注意到富有個(gè)性的“具體”的特征。[思維建模]分析文體特征2要領(lǐng)2.注意效果解讀

分析文體特征時(shí)，不能僅僅停留在辨別認(rèn)知的層面上，而必須懂得去對(duì)它們做“效果”分析。對(duì)“效果”的分析不外乎從這樣的兩個(gè)方面去考慮：一是從表達(dá)者的表達(dá)這個(gè)方面去考慮，看他采用這樣的方式會(huì)給他的表達(dá)帶來怎樣的好處；二是從閱讀者這個(gè)方面考慮，看他這樣做可以對(duì)讀者的閱讀產(chǎn)生什么樣的積極的效果。分析傳記的文體特征?咀嚼經(jīng)典高考題目提升審題答題技能高考曾經(jīng)這樣考品答案，悟技巧，不丟分1.(2014·遼寧卷)本文第一自然段有何作用？請(qǐng)簡(jiǎn)要分析。(6分)(《侯仁之：城市的知音》)①交代侯仁之選擇歷史專業(yè)的原因；②寫出了侯仁之對(duì)國(guó)家民族命運(yùn)的關(guān)注，使傳主形象更加豐滿；③體現(xiàn)了傳記的真實(shí)性；④為下文介紹侯仁之的學(xué)術(shù)研究及成就做鋪墊。(答出1點(diǎn)給1分，2點(diǎn)給3分，3點(diǎn)給5分，4點(diǎn)給6分)2.(2013·福建卷)文章已有“《夢(mèng)里京華》”一例，為何還要例舉“委曲求全”？請(qǐng)簡(jiǎn)要分析。(4分)(《那一種遙遠(yuǎn)的幽默》)①增強(qiáng)說服力，進(jìn)一步突出王文顯劇作別有一番幽默，肯定他喜劇創(chuàng)作的能力和影響。②引出下文對(duì)王文顯任代理校長(zhǎng)時(shí)行事風(fēng)格的敘寫，形成對(duì)比，以突出王文顯治校的持重務(wù)實(shí)，一絲不茍。(每點(diǎn)2分，意思對(duì)即可。)3.(2012·新課標(biāo)全國(guó)卷)12(1)選項(xiàng)E：本文擷取謝希德人生的若干片斷，描寫她熱愛祖國(guó)、獻(xiàn)身科學(xué)、關(guān)愛親人的事跡，表現(xiàn)了一位杰出女性的偉大人格。(√)(《謝希德的誠(chéng)與真》)本選項(xiàng)考查對(duì)文體特征的理解，涉及文章的選材、文本的主要內(nèi)容與主題等內(nèi)容。(正確選項(xiàng)，3分)因傳記是記載人物生平或事跡的一類記敘文體，它的表達(dá)技巧比較接近于小說和散文，可以說文學(xué)類文本的表現(xiàn)手法都與傳記相通。由于傳記的文體特征，需要格外注意其他人物對(duì)傳主的映襯、細(xì)節(jié)描寫、引用和議論等方面?？键c(diǎn)二分析表現(xiàn)手法3題型(一)敘述1.順敘的作用(效果)：思路清晰，結(jié)構(gòu)條理。2.倒敘的作用(效果)[知能構(gòu)建](1)能增強(qiáng)文章的生動(dòng)性，使文章產(chǎn)生懸念，更能引人入勝。(2)強(qiáng)調(diào)作用，這一段主要寫了……放到開頭強(qiáng)調(diào)了傳主的……(與傳主精神、品質(zhì)等的關(guān)系)。(3)表達(dá)了作者對(duì)傳主怎樣的情感(與作者情感的關(guān)系)。(4)深化了主旨(與主旨的關(guān)系)。(5)使文章結(jié)構(gòu)富于變化，避免了敘述的平淡和結(jié)構(gòu)的單調(diào)。3.插敘的作用(效果)(1)內(nèi)容上：①(如果是引述他人的話，或是傳主自己的話、書信等)突出了傳記的真實(shí)性，使文章內(nèi)容更充實(shí)。②深化了文章主題。③使人物形象更加鮮明。④(如果是引述他人的話等就屬于側(cè)面描寫)側(cè)面烘托了傳主的……⑤(如果插敘的語段拿傳主和其他人對(duì)比)通過對(duì)比，襯托出了傳主的……(2)結(jié)構(gòu)上：①避免了結(jié)構(gòu)的平鋪直敘，使行文起伏多變，使結(jié)構(gòu)更加緊湊集中。②對(duì)……做了必要的鋪墊照應(yīng)，補(bǔ)充說明。(二)描寫(主要是細(xì)節(jié)描寫)1.描寫的三種作用(1)讓傳主形象更全面完整，更立體化。傳主形象是由多個(gè)側(cè)面組成的，只表現(xiàn)其偉大的一面，而不展現(xiàn)其普通的一面，人物就不能立體化。

(2)讓人物真實(shí)可信。要把人物寫好，就要寫其普通的一面，因?yàn)樽x者是普通的公民，他愿意接受偉人身上普通的一面。這樣的人物會(huì)讓讀者覺得真實(shí)親切，易于接受。(3)符合讀者心理需要。對(duì)于大人物諸如政治家、藝術(shù)家、影視明星等，讀者已經(jīng)從媒體中了解了一些他們?cè)诒拘袠I(yè)內(nèi)的成就、事跡。對(duì)于傳記作品，讀者更渴望了解一些花絮。因此，一些細(xì)節(jié)正能解決這一問題。2.兩種答題方式(1)如果是寫人物的細(xì)節(jié)，可以這樣：①思維趨向：寫人物的細(xì)節(jié)＝細(xì)節(jié)內(nèi)容＋獨(dú)特形象＋表現(xiàn)主題＋讀者心理。②答題方式：通過描寫…