微生物技術(shù)部分

微生物技術(shù)部分第1頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）無菌技術(shù)無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。1、目的：防止外來雜菌入侵，獲得純凈培養(yǎng)物p152、方面：p15*實驗操作空間、操作者衣著和手，進行清潔和消毒*微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基滅菌*實驗操作在酒精燈火焰附近進行*避免已經(jīng)經(jīng)過滅菌處理的材料與周圍物品接觸第2頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月比較含義常用方法消毒使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物，不包括芽孢和孢子。p15滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。p15高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌干熱滅菌煮沸消毒法；巴氏消毒法；化學藥劑消毒；第3頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月

定義常用方法處理對象消毒使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸玻璃儀器巴氏消毒法不耐高溫的液體紫外線實驗室、操作臺化學藥劑消毒：如酒精溶液手，操作臺等滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子培養(yǎng)基、棉塞、玻璃儀器等接種環(huán)、涂布器玻璃儀器3、滅菌與消毒：高壓蒸汽灼燒干熱第4頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月

定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培中的應用消毒使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸玻璃儀器紫外線實驗室、操作臺、衣物等酒精溶液手、外植體等次氯酸鈉溶液等外植體滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子高壓蒸汽培養(yǎng)基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等灼燒接種環(huán)、涂布器干熱玻璃儀器第5頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月121℃，100kPa，15~30min第6頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月接種用具、試管口、瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進行灼燒滅菌第7頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內(nèi)，160-170℃下加熱1-2h。第8頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種第9頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月配制培養(yǎng)基稱量計算溶化物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL電子天平和稱量紙調(diào)節(jié)PH第10頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月溶化營養(yǎng)→瓊脂（攪拌）→加水定容→調(diào)節(jié)PH第11頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌第12頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種高壓蒸汽第13頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月倒平板60℃左右，酒精棉球擦手，點酒精燈；操作過程第14頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月倒平板第15頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月微生物的接種（純化）單菌落第16頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種高壓蒸汽平板劃線法稀釋涂布平板法第17頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月平板劃線法隨著劃線的進行，接種環(huán)上的微生物細胞的數(shù)量將逐漸減少，并分散開。經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。第18頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月接種：劃線灼燒接種環(huán)→取菌液→劃線分離→燒至暗紅第19頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月接種：劃線第20頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月①④③②劃線分離第21頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月平板劃線的操作方法交叉劃線法連續(xù)劃線法第22頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月劃線方法第23頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第24頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第25頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第27頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第28頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月稀釋涂布平板法第29頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月A.系列稀釋操作P19101102103104105106(1)將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號。(2)用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。(3)從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入第三支試管中，重復步驟2，直至到第六支試管。第30頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月B.涂布平板操作P19第31頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第32頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種高壓蒸汽平板劃線法稀釋涂布平板法恒溫培養(yǎng)箱第33頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月平板和一個未接種的平板，恒溫37℃倒置培養(yǎng)

恒溫箱中培養(yǎng)第34頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月原液稀釋101倍稀釋103倍稀釋102倍第35頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月菌種的保存（1）臨時保藏固體斜面培養(yǎng)基：4℃，3~6月轉(zhuǎn)接新培養(yǎng)基（2）長期保藏甘油管藏：菌液：滅菌甘油=1：1混合，-20℃第36頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月芽孢

A、某些細菌在其生長發(fā)育后期，在細胞內(nèi)形成一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強的休眠體，稱為芽孢第37頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月被埋在琥珀中達2500萬年的芽孢，當放到營養(yǎng)培養(yǎng)基上時仍可萌發(fā)生長。

第38頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2