逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)中的細節(jié)問題課件

逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)中的細節(jié)問題41、俯仰終宇宙，不樂復(fù)何如。42、夏日長抱饑，寒夜無被眠。43、不戚戚于貧賤，不汲汲于富貴。44、欲言無予和，揮杯勸孤影。45、盛年不重來，一日難再晨。及時當(dāng)勉勵，歲月不待人。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)中的細節(jié)問題逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)中的細節(jié)問題41、俯仰終宇宙，不樂復(fù)何如。42、夏日長抱饑，寒夜無被眠。43、不戚戚于貧賤，不汲汲于富貴。44、欲言無予和，揮杯勸孤影。45、盛年不重來，一日難再晨。及時當(dāng)勉勵，歲月不待人。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)中的細節(jié)問題RT-PCR原理AMMANMMA(AYRNAIsolation/tAMMAn)CellsorTissueCDNAsynthesisoligo(di)armingAAAA周A10ie0iAAMMIAGSPMMMMMAMA(AhAAMANIPCRAmplification信息技術(shù)課教學(xué)的主要目的就是讓學(xué)生去了解計算機文化、初步掌握一些計算機基本知識及技能，進一步激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，增強信息意識和創(chuàng)新意識，有效地培養(yǎng)學(xué)生對信息的收集、處理、應(yīng)用和傳輸?shù)哪芰σ约白詫W(xué)能力和創(chuàng)新能力。我認為，在教學(xué)中要把計算機作為一種工具，來提高學(xué)生的信息素養(yǎng)，培養(yǎng)他們使用信息技術(shù)解決問題的各種能力。信息技術(shù)學(xué)科由于其實踐性及應(yīng)用性強的特點決定了在教學(xué)中必須采取相應(yīng)的、靈活多樣的評價方式，才能有助于培養(yǎng)學(xué)生的實踐創(chuàng)新精神。一、課堂演示，講解為主近年來，大多數(shù)學(xué)校都陸續(xù)建成了新的電腦室，這主要是以TCL公司生產(chǎn)為主的電腦設(shè)備，同時配備了幾十臺多媒體電腦，從而形成了一個功能較為強大的多媒體網(wǎng)絡(luò)教室。我們教師在上課期間，可以借助多媒體網(wǎng)絡(luò)教室的廣播系統(tǒng)，對計算機的基本知識作出適當(dāng)?shù)难菔静⒓右栽敿毜闹v解，使學(xué)生獲得大量的感性知識，從而加深對知識的理解。例如：在講授Windows98系統(tǒng)操作時，我是這樣做的：先讓學(xué)生上機實踐（當(dāng)然上該節(jié)課前已安排學(xué)生進行預(yù)習(xí)），因為各個學(xué)生的理解能力不一樣，在他們預(yù)習(xí)后自己再在無老師的指導(dǎo)下進行實踐，看自己的自學(xué)能力有多強，從而證實自己的理論理解與實踐是否一致。然后我運用了"躍龍門"多媒體教學(xué)軟件，將正確的操作過程通過教師機演示給學(xué)生，并一邊進行適當(dāng)講解，使學(xué)生們看到完整的操作過程。這樣做就進一步證實了學(xué)生們對自己預(yù)習(xí)后自行上機實踐是否全部正確。再讓學(xué)生們上機實踐一次，這樣就收到了很好的教與學(xué)效果。同時，為了配合演示式的教學(xué)，我又根據(jù)課程內(nèi)容及學(xué)生的接受能力，制作有針對性的課件，使課程內(nèi)容生動形象，變難為易。二、強化練習(xí)學(xué)生要熟練使用計算機，僅靠教師的講授和演示是遠遠不夠的，必須通過大量的實踐練習(xí)，才能掌握操作技能和技巧。練習(xí)的方式要多種多樣，如課堂問答，上機操作，課內(nèi)外作業(yè)演示等。在進行上機操作練習(xí)時，一般給學(xué)生布置有針對性的練習(xí)內(nèi)容。例如，在講完“Word”軟件中的文字錄入及排版知識后，要求學(xué)生課后準(zhǔn)備一篇50字左右的短文，在下一節(jié)上課時使用Word軟件進行錄入、排版，并對排版提出合理的要求；又如在講完IE瀏覽器的使用后，就讓每位學(xué)生運用IE瀏覽器瀏覽本市的網(wǎng)站和其他教育網(wǎng)站。這樣，每教學(xué)一項新內(nèi)容，就及時讓學(xué)生進行定量的練習(xí)，這樣有利于激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，鞏固所學(xué)的新課內(nèi)容，熟練掌握操作要點，提高學(xué)習(xí)效果。三、進行網(wǎng)絡(luò)教學(xué)自從學(xué)校多媒體網(wǎng)絡(luò)教室的出現(xiàn)，上級領(lǐng)導(dǎo)對培養(yǎng)學(xué)生的上網(wǎng)操作能力非常重視，因此，我們學(xué)校也少不了增加上網(wǎng)這項功能。在計算機教學(xué)中，網(wǎng)絡(luò)為學(xué)生提供了更為廣闊的信息知識環(huán)境。學(xué)生可以通過上網(wǎng)獲得豐富的信息知識。我們教師還可指導(dǎo)學(xué)生從網(wǎng)上下載學(xué)習(xí)軟件，收集各類學(xué)習(xí)網(wǎng)站以及學(xué)習(xí)資源，不僅滿足了他們的好奇心和求知欲，還培養(yǎng)了他們的信息惦集、處理、吸收能力；讓學(xué)生在節(jié)日時，發(fā)送電子郵件給親戚同學(xué)問好、祝福；讓學(xué)生在因特網(wǎng)上閱讀新聞、參加K12網(wǎng)站的BBS、收發(fā)電子郵件等。采取各種方式設(shè)計教學(xué)模式，可以滿足學(xué)生個性化發(fā)展的要求。四、采用任務(wù)驅(qū)動教學(xué)“任務(wù)驅(qū)動”的教學(xué)方法指在整個教學(xué)過程，以完成一個個具體的任務(wù)為線索，把教學(xué)內(nèi)容巧妙地隱含在每個任務(wù)之中。學(xué)生在教師的引導(dǎo)下，通過完成一個個任務(wù)逐步掌握所學(xué)的知識與技能。為學(xué)生營造一個建構(gòu)知識、寓學(xué)于實踐的環(huán)境，讓他們在這個環(huán)境里，充滿興趣愉快地進行學(xué)習(xí)，突出了在“做”中“學(xué)”的思想。例如，我在因特網(wǎng)的教學(xué)中，我可以分為這樣幾個大任務(wù)：在因特網(wǎng)上瀏覽信息、在因特網(wǎng)上查找信息、從因特網(wǎng)上下載信息、在因特網(wǎng)上收發(fā)電子郵件、閱讀網(wǎng)絡(luò)新聞、參加BBS、在因特網(wǎng)上進行實時交流等等。對于"在因特網(wǎng)上收發(fā)電子郵件"這個大任務(wù)又可以分為：寫信與發(fā)信、收信與讀信、回信與轉(zhuǎn)信、信件的分類和整理、訂閱電子雜志、加入郵件討論組等子任務(wù)；針對“寫信與發(fā)信”這個子任務(wù)，又可以劃分為：寫信、發(fā)信、在信中夾一張照片、發(fā)送一個或多個文件、發(fā)送一段錄音、發(fā)送一個影像、把同一個文件發(fā)送給多個接收者、成批發(fā)送信件等子任務(wù)。五、實現(xiàn)分組教學(xué)，提高學(xué)習(xí)興趣在計算機上機操作時，學(xué)生會經(jīng)常遇到這樣或那樣的問題，如果教師一一解答操作，不僅教師感到忙碌、時間緊迫，而且還限制了學(xué)生學(xué)習(xí)的主動性和積極性，得不到良好的教學(xué)效果。分組教學(xué)可以避免諸多弊端，提高學(xué)習(xí)主動性和積極性。教師根據(jù)上課班級學(xué)生人數(shù)進行分組，每組人數(shù)不要太多（控制6―8名），每個小組有固定的機位并設(shè)兩名小組長，上課前先進行培訓(xùn)。當(dāng)本組同學(xué)遇到問題時，由小組長充當(dāng)小老師進行輔導(dǎo)。當(dāng)有些問題較難時，教師要鼓勵全組成員一起研究解決。如果處理得當(dāng)，教師要及時表揚，使學(xué)生充分體會到成功帶來的喜悅。這樣一來能夠極大地激發(fā)小組成員的動手能力。如果小組解決不了，可由其它小組提出方案或由教師進行指導(dǎo)。六、實現(xiàn)課堂教學(xué)與其它課程的整合利用信息技術(shù)學(xué)科工具性的特點，可以加強與其它學(xué)科的橫向聯(lián)系，不僅能使學(xué)生更扎實的掌握課堂所學(xué)內(nèi)容，而且還能讓學(xué)生對信息技術(shù)課有更完整的認識。例如：我讓初中二年級學(xué)生運用所掌握的信息技術(shù)知識和上網(wǎng)技能，到因特網(wǎng)上查找文字、圖片、照片等資料，制作一個以“環(huán)境保護”為主題的PowerPoint幻燈片。學(xué)生們興致勃勃的查找有關(guān)環(huán)保資料，精心制作出一套集知識性、趣味性于一身的幻燈片。這樣，讓學(xué)生完成了課堂學(xué)習(xí)內(nèi)容的同時，還增長了課外知識，實現(xiàn)了與其它課程的整合，使學(xué)生親身體會到信息采集、處理、加工的全過程，大大提高了學(xué)生的信息素質(zhì)和信息實踐能力。列寧作為無產(chǎn)階級革命的領(lǐng)袖和導(dǎo)師，實現(xiàn)了科學(xué)社會主義從理論到實踐的發(fā)展，領(lǐng)導(dǎo)俄國人民建立了世界上第一個社會主義國家。列寧在繼承和發(fā)揚馬克思恩格斯所創(chuàng)立的共產(chǎn)主義學(xué)說的基礎(chǔ)上加以深化和創(chuàng)新，并以實踐中出現(xiàn)的問題為指導(dǎo)，不斷豐富和發(fā)展馬克思主義的相關(guān)理論，其中當(dāng)然包括大學(xué)生思想政治教育的理論。在列寧時期，無產(chǎn)階級的大學(xué)生思想政治教育理論更加成熟和更加系統(tǒng)化。列寧提出了許多關(guān)于進行思想政治教育的內(nèi)容、原則和方法，這對于以后的思想政治教育的發(fā)展具有重要的借鑒意義。一、對無產(chǎn)階級進行理論灌輸?shù)恼撌隽袑幵凇对趺崔k？》一文中對社會主義灌輸理論做出了經(jīng)典的表述，他認為“工人本來也不可能有社會主義的民主意識。這種意識只能從外面灌輸進去。”〔1〕列寧的灌輸理論的對象雖然主要是指工人階級，但是由于青年大學(xué)生本身具有的特殊性使得灌輸理論對于青年大學(xué)生的思想政治教育同樣具有重要的意義。他指出：“俄國的情況也是一樣，社會民主黨的理論學(xué)說也是完全不依賴于工人運動的自發(fā)增長而產(chǎn)生的，它的產(chǎn)生是革命的社會主義知識分子的思想發(fā)展的結(jié)果?！薄?〕這就是要求對青年大學(xué)生進行理論灌輸，使他們成為革命的知識分子以教育人民。為了達成這一目標(biāo)，列寧提出要把對青年大學(xué)生的社會主義理論灌輸當(dāng)成黨的一項重要任務(wù)來實施，并在不同的場合予以強調(diào)。在《為俄國社會民主工黨第二次代表大會準(zhǔn)備的決議草案》中，列寧指出：“所有學(xué)生組織、團體和小組提出如下建議：第一，在工作中把培養(yǎng)自己成員的完整而徹底的革命世界觀當(dāng)作首要任務(wù)?！薄?〕同時列寧認識到，如果對青年大學(xué)生不積極進行社會主義和共產(chǎn)主義理論的灌輸，青年大學(xué)生也許會走向我們的對立面，所以列寧又指出：“不要怕他們?nèi)狈﹀憻?，不必?dān)心他們沒有經(jīng)驗和不夠成熟。第一，如果你們不善于組織和推動他們，他們就會跟孟什維克和加邦分子走，那時他們的沒有經(jīng)驗將會帶來五倍的危害?！币虼?，必須要“按照我們的精神教育他們。”〔4〕列寧的社會主義灌輸理論使俄國取得了巨大的成效，同時該理論隨著馬克思列寧主義在中國的傳播，逐漸成為我黨進行思想政治教育的重要理論基礎(chǔ)。二、對正確對待和認識大學(xué)生的論述在如何對待大學(xué)生的問題上列寧有著自己的獨特見解。他認為最主要的是要認清青年大學(xué)生所處的歷史地位和發(fā)揮的作用，并且對不同的大學(xué)生采用不同的方法來進行教育。首先，對待大學(xué)生上，列寧特別強調(diào)要從當(dāng)時的社會環(huán)境即俄國社會生活的現(xiàn)實條件方面來探索大學(xué)生的政治動向，不應(yīng)該按照那種脫離歷史條件、不注重大學(xué)生知識分子之間不同的政治派別和政治素養(yǎng)高低的眼光認識大學(xué)生。因此，列寧指出：“不管大學(xué)生是多么無私、純潔、富于理想等等，他們不可能是整個社會的例外”〔5〕只要是生活于社會中的青年大學(xué)生，總要收到當(dāng)時的歷史條件的影響導(dǎo)致他們對待革命的態(tài)度、對待政治方向和目標(biāo)的差距。對此，我們應(yīng)該認識到這些差別，拋棄那種“資產(chǎn)階級民主主義觀點和革命社會主義的堂皇外衣之間的明顯矛盾”〔6〕。其次，列寧也認為對于這樣一群“血氣方剛、熱情奔放和正在探索途中的青年”，我們必須學(xué)會辯證的對待。對于那些“正在把無產(chǎn)階級引入迷途的”青年大學(xué)生，我們必須與其進行徹底的斗爭，而對于那些對社會有益的青年學(xué)生，雖然他們身上也會有許多缺點和錯誤我們應(yīng)采取“說服而不是用斗爭的辦法”來克服。最后，列寧認識到青年大學(xué)生在革命和建設(shè)中的重要作用。列寧在給《給亞?亞?波格丹諾夫和謝?伊?古謝夫的信》中指出：“整個斗爭的結(jié)局都將取決于青年，取決于青年大學(xué)生，尤其是青年工人”〔7〕。這是對青年大學(xué)生的高度認可。此外列寧也不僅僅認識到青年在當(dāng)前的革命中具有重要的地位，他認為“我們只是為這個未來社會奠定基礎(chǔ)，至于建設(shè)，則有待于你們將來長大以后去努力”〔8〕，這就明確界定了大學(xué)生作為未來社會主義建設(shè)的重要力量，賦予了大學(xué)生崇高的使命感和責(zé)任感。三、對大學(xué)生要與工農(nóng)群眾相結(jié)合的論述與工農(nóng)群眾相結(jié)合是大學(xué)生思想政治教育的重要原則和方法。列寧對青年大學(xué)生要與工農(nóng)群眾相結(jié)合的原則做出了具體的闡釋，列寧認為青年大學(xué)生要與工農(nóng)群眾相結(jié)合就是要在實踐中向群眾學(xué)習(xí)，就是要把所學(xué)的知識運用到實踐中去發(fā)揮應(yīng)有的作用。首先，青年大學(xué)生要與工農(nóng)群眾相結(jié)合的必要性。第一，列寧指出：“離開工作，離開斗爭，從共產(chǎn)主義小冊子和著作中得來的關(guān)于共產(chǎn)主義的書本知識，可以說是一分不值，因為這種書本知識仍然會保持舊時的理論與實踐的脫節(jié)，而這正是資產(chǎn)階級舊社會的一個最令人厭惡的特征”〔9〕。列寧在此深刻的批判了資產(chǎn)階級的教育制度與方式，認為按照這種脫離鮮活的實踐的教育方式只能培養(yǎng)出一些書呆子或者吹牛家。為了防止這種教育危險必須改革這樣的教育制度，他強調(diào)青年大學(xué)生“只有在與工農(nóng)的共同勞動中，才能成為真正的共產(chǎn)主義者”〔10〕。其次，列寧從大學(xué)生這一群體的力量是非常軟弱的方面來進行闡述與工農(nóng)結(jié)合的必要性。列寧指出：“你們不了解如果他們不依附于一個階級，他們就等于零。你們吹噓俄國無產(chǎn)階級知識分子向來以思想‘純潔’著稱，――其實正是因為這樣，他們才始終沒有力量”〔11〕。列寧認為青年大學(xué)生只有與工人群眾相結(jié)合才能在革命和建設(shè)中發(fā)揮巨大的力量。四、借鑒列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育相關(guān)論述的現(xiàn)實啟示面對我國現(xiàn)代化建設(shè)的進程及世界形勢的復(fù)雜多變，提高高校思想政治教育的實效，探索對大學(xué)生進行思想政治教育的規(guī)律成為當(dāng)前研究的重要課題。在這一背景下，深入研究列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育的理論與實踐，對于我們在新形勢下加強思想政治教育建設(shè)，提高思想政治教育的實效性具有重要的借鑒意義。1.借鑒列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育的相關(guān)論述是提高思想政治教育實效性的現(xiàn)實要求當(dāng)前我國正處在全面深化改革，進行社會現(xiàn)代化建設(shè)，實現(xiàn)偉大復(fù)興的中國夢的關(guān)鍵時期，這一現(xiàn)實的要求需要全社會的總動員。在知識經(jīng)濟迅速崛起的今天，大學(xué)生作為知識精英和社會棟梁對于社會主義現(xiàn)代化建設(shè)發(fā)揮著不可替代的重要作用。但是我們也清醒的認識到，隨著當(dāng)前社會利益主體的多元化，利益需求的多樣性，在市場經(jīng)濟的發(fā)展中各種不良思潮也侵蝕到象牙塔內(nèi)，“道德滑坡”、“信仰危機”等現(xiàn)象在大學(xué)生群體中屢見不鮮，這不僅直接影響到了人們對于大學(xué)生這一群體的期望，也降低了大學(xué)生作為社會精英應(yīng)具有的作用。因此，如何培養(yǎng)德才兼?zhèn)涞拇髮W(xué)生，提高思想政治教育實效，使大學(xué)生沿著正確的道路為社會現(xiàn)代化貢獻力量就成為思想政治教育的主題。列寧以自己所處的時代環(huán)境為條件，在辯證唯物主義和歷史唯物主義的指導(dǎo)之下，對大學(xué)生思想政治教育的基礎(chǔ)、原則、方法等各個方面進行了探索，他們的探索在一定程度上蘊含著當(dāng)代大學(xué)生思想政治教育發(fā)展的理論基礎(chǔ)和現(xiàn)實根基。這就有必要對列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育理論進行借鑒，以期為高校思想政治教育注入新的活力。2.借鑒列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育相關(guān)論述是體現(xiàn)“三個面向”教育理念的根本要求1983年10月1日，鄧小平為北京景山學(xué)校題詞中指出，教育要面向現(xiàn)代化，面向世界，面向未來。這為新時期的教育發(fā)展和改革指明了根本的方向和要求，同時這一命題同樣適用于大學(xué)生思想政治教育的發(fā)展要求。大學(xué)生思想政治教育的現(xiàn)代化就是要求使大學(xué)生思想政治教育的目標(biāo)、體系和原則方法必須體現(xiàn)時代的氣息，更具有針對性，更加關(guān)注大學(xué)生這一特殊群體所具有的新的特點，形成符合的時代的特色和大學(xué)生思想特點的思想政治教育理論體系以追求思想政治教育效果的最大化。列寧關(guān)于大學(xué)生特點的精辟分析與關(guān)注是我們進行其理論和實踐借鑒的基礎(chǔ)。面向世界、面向未來要求大學(xué)生思想政治教育的發(fā)展必須樹立開放和長遠的眼光，積極借鑒國外關(guān)于大學(xué)生或高校思想政治教育方面的理論和教育改革的實踐，汲取其中的優(yōu)秀成果為我所用。但是在這一借鑒的過程中，必須保持堅持馬克思主義的指導(dǎo)地位不動搖，這是我們進行大學(xué)生思想政治教育借鑒的根基。而根基的夯實就在于把列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育的相關(guān)論述實現(xiàn)中國化，符合中國的國情，體現(xiàn)中國特色。3.借鑒列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育相關(guān)論述是構(gòu)建高?；虼髮W(xué)生思想政治教育體系以及促進思想政治教育學(xué)科發(fā)展的必然要求高?；虼髮W(xué)生思想政治教育是思想政治教育學(xué)科的重要分支，構(gòu)建更加系統(tǒng)的、理論化的高?；虼髮W(xué)生思想政治教育體系拓寬了思想政治教育學(xué)科的領(lǐng)域，增強對于同一問題的關(guān)注，有利于社會對該學(xué)科的確認贊同和學(xué)科功能的發(fā)揮。在構(gòu)建高?；虼髮W(xué)生思想政治教育體系的過程中要求我們避免重走彎路，要立足于自身的發(fā)展，借鑒列寧關(guān)于大學(xué)生思想政治教育的方法和原則構(gòu)建符合本學(xué)科自身的話語體系，為思想政治教育的效果提升鋪平新的道路?？傊畬τ诹袑庩P(guān)于大學(xué)生思想政治教育理論與實踐的借鑒是現(xiàn)實與理論對我們的要求，也是歷史賦予我們的責(zé)任?！材孓D(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)中的細節(jié)問題RT-PCR原理AMMANMMA(AYRNAIsolation/tAMMAn)CellsorTissueCDNAsynthesisoligo(di)armingAAAA周A10ie0iAAMMIAGSPMMMMMAMA(AhAAMANIPCRAmplification介紹內(nèi)容口實驗器具與材料C試劑口標(biāo)本收集與保存CRNA抽提口遞轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(RT)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、實驗器具、材料1、移液槍:1m1、200μ1、20μ12、吸頭及吸頭盒:1m1、200μ1、20μ1(無菌無酶,可直接購買)3、EP管:1.5m1(無菌無酶,可直接購買)4、PCR薄壁管0.2m15、普通EP管:1.5m1、0.5m1(高壓滅菌)6、大瓷缸:2個(180℃的高溫干烤6h,滅活RNA酶,存放無酶EP管和PCR管7、組織搗碎棒(可直接購買)試劑1、DEPC水500m12、75%乙醇:用無水乙醇DEPC水配,然后放4℃保存3、異丙醇4、氯仿5、電泳緩沖液(TAE/TBE)7、瓊脂糖8、Taq酶(含MgC12Buffer),-20℃9、dNTP,-20℃10、隨機引物,-20℃11、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶(Buffer),-20℃12、RNasin,-20℃13、Triz1100m1/1瓶,-4℃14、Marker,-20℃15、引物,-20℃三、標(biāo)本收集與保存目的:防止RNA被RNA酶降解措施:低溫、RNA酶抻制劑、盡快取材防止細胞裂解1、細胞懸浮細胞:1500rpm,5min離心,取沉淀-80℃凍存,或直接抽RNA;貼壁細胞:倒摔培養(yǎng)液,加Trizol1m1,溶解細胞,直接抽RNA或凍存(如沒有Triz1,可用胰酶消化后,同懸浮細胞處理)2、組織液氮取材(越快越好),-80℃凍存:即可用于抽RNA,也可用于抽蛋白;RNA保護劑取材:用普通冰袋即可,但不宜用于抽蛋白Triz01取材:同上;80℃冰袋取材:沒辦法的辦法四、RNA抽提目的:防止RNA被RNA酶降解,獲得高質(zhì)量的RNA措施:1.了解RNA酶的來源及應(yīng)對方法:1)內(nèi)源性:組織細胞裂解釋放(低溫、RNA酶抑制劑)(2)外源性:實驗者的皮膚分泌物、呼吸氣體、唾液等(帶手套、口罩);3)實驗環(huán)境中的灰塵、微生物等(環(huán)境清潔、消毒、在超凈臺內(nèi)進行);(4)實驗器械(進行無酶處理):180℃的高溫下干烤6h;0.1%DBPC水浸泡或用氯仿沖洗(注意:有機玻璃器具不能使用);用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制溶液2、了解RNA抽提的步驟原理,知道哪些是需要注意RNA酶污染的關(guān)鍵步驟,做到膽大心細。舉例如下:TRIREAGENT分離RNAPR0T0COL1)5-10×10胞沉淀,加TR1,反復(fù)打?qū)⒓毎拷?50-100mg組織加1m1TRIReagent于勻漿器中勾漿(注意:標(biāo)本體積不得超過TRIReagent體積的10%)2)將勻漿于室溫靜置5分鐘(此步后將樣本置-80℃至少可保存一個月)3)然后向勻漿中加入0、2m1氯仿,蓋緊樣本劇烈振搖15秒4)將混合物室溫靜置2-15min,12,000g,4℃離心15min(低溫離心很重要,否則,水相中會混入少量的DNA)(離心后原混合物分為底員紅色的酚-氯構(gòu)中間相和上員無色的水RN在在干水智,而DN和白質(zhì)分別在在于中間相和育機相,水相的體積大概占用于的Re9en感體積的0,5)轉(zhuǎn)移上層無色的水相至新的管子中,加0.5m1異丙醇(從水相中沉淀RNA),室溫靜置5-10分鐘6)12,000g,4℃離心8min.此時可見RNA沉淀(離心前通常看不見)于管底或側(cè)壁形成膠凍狀或白色沉淀刀)移去上清,加至少1m1的75%乙醇洗滌RNA沉淀(用渦旋),(此時RNA可至于75%乙醇中存于4℃至少一周或存于-20℃至少一年)8)然后于7,500g,4℃離心5min(如RNA沉淀積于管壁一側(cè)和傾向于漂浮,于12,000g沉淀9)移去上層的乙醇洗液,將RNA沉淀置空氣中短時千燥.(注意不要讓RNA沉淀完全干燥,因為這樣將極大的降低其可溶性。但對于用于RT-PCR的樣本而言,應(yīng)盡量讓RNA樣本中的乙醇揮發(fā),