動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)第1頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞工程

其中，動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動物細胞工程

常用的技術(shù)手段動物細胞培養(yǎng)動物細胞核移植動物細胞融合生產(chǎn)單克隆抗體第2頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植。但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學們想一想如何來治療該病人？思考？第3頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月取該患者的皮膚進行細胞培養(yǎng),獲得人造皮膚后再移植。第4頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）、概念

是指從動物機體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。（二）、原理細胞分裂增殖一、動物細胞培養(yǎng)第5頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月(三)、動物細胞培養(yǎng)過程

取動物組織塊剪碎組織胰蛋白酶處理細胞培養(yǎng)單個細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)剪碎組織及胰蛋白酶處理的目的？剪碎組織及胰蛋白酶處理的目的：將組織分散成單個細胞，有利于細胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)。制成細胞懸液動物胚胎或幼齡動物器官因為這些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。第6頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）動物細胞生長特性1.細胞貼壁：細胞懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。

要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑無毒、易于貼附。2.接觸抑制第7頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。50代以后失去接觸抑制接觸抑制（細胞為單層）50代以后細胞失去接觸抑制第8頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月原代培養(yǎng)：

人們通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：

貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。第9頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的細胞、組織或器官細胞懸浮液→原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)10代細胞50代細胞無限傳代單個細胞胰蛋白酶加培養(yǎng)液剪碎細胞貼壁剝離分瓶部分細胞的細胞核型發(fā)生變化動物細胞培養(yǎng)最終不能培養(yǎng)成動物體接觸抑制第10頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)器皿第11頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

超凈工作臺實驗設(shè)備細胞培養(yǎng)箱倒置顯微鏡第12頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）、動物細胞培養(yǎng)條件1、無菌、無毒的環(huán)境

（①添加一定量的抗生素；②定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)

（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）（使用合成培養(yǎng)基時，需加入血清、血漿等）補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，如血清激素、氨基酸等。CO2有調(diào)節(jié)PH的作用。第13頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月思考與討論1、進行動物細胞傳代培養(yǎng)時用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？2、胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎？為什么？主要是蛋白質(zhì)。不行，因為動物細胞培養(yǎng)適宜PH為7.2—7.4，而胃蛋白酶適宜PH為2.0，胃蛋白酶會失去活性。長時間會消化細胞膜蛋白，對細胞有損傷作用。所以應(yīng)控制好胰蛋白酶的消化時間。P44第14頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月3、動物細胞培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)基相比，有何獨特之處？4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？動物細胞培養(yǎng)液的獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體第15頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理細胞的全能性細胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細胞數(shù)目增多培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細胞或細胞分泌蛋白第16頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等健康細胞培養(yǎng)：如獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。用于檢測有毒物質(zhì)用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)第17頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月P50

動物細胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化過程嗎？為什么？

不經(jīng)過。因為高度分化的動物細胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力。第18頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月二、動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物

1.概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。核移植受體細胞：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易

用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。2.原理：動物體細胞核的全能性。（難度高）MⅡ期的卵母細胞第19頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月選用去核卵母細胞的原因：①卵母細胞比較大，容易操作；②細胞質(zhì)多，營養(yǎng)豐富，含有促進細胞核全能性表達的物質(zhì)。②胚胎移植

①動物細胞核移植原理：動物細胞核具有全能性和細胞膜的流動性第20頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月討論：1.在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？

為使遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物。P49第21頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月2.用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞，想一想，這是為什么？

培養(yǎng)的動物細胞一般當傳代至10～50代左右時，部分細胞核型可能會發(fā)生變化，其細胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細胞一般能保持正常的二倍體核型。第22頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月3.你認為用上述體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復(fù)制嗎？為什么？

不是。

①克隆動物絕大部分DNA來自于供體細胞核，

少部分DNA來自于受體卵母細胞的