血清α-淀粉酶（AMS）（EPS-G7法）測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書

血清α-淀粉酶（AMS）（EPS-G7法）測(cè)定作業(yè)指導(dǎo)書1.實(shí)驗(yàn)原理AMS測(cè)定采用酶動(dòng)態(tài)比色測(cè)定法。所用底物為4,6-亞乙基-,D-麥芽七糖苷-對(duì)硝基苯酚（EPS－G7）。樣品中－淀粉酶分解底物EPS－G7，生成對(duì)硝基苯酚（PNP），在405nm處比色，吸光度的上升速率與樣品中-淀粉酶的活力成正比。2亞乙基－G5＋2G2PNP5EPS-G7＋5H2O -淀粉酶2亞乙基－G4＋2G3PNP亞乙基－G3＋G4PNP-葡萄糖苷酶2G2PNP＋2G3PNP＋G4PNP＋14H2O5PNP＋14G（反應(yīng)式中PNP：對(duì)硝基苯酚；G：葡萄糖）2.標(biāo)本采集與處理：2.1病人準(zhǔn)備：無特殊要求。2.2標(biāo)本類型：血清、肝素或EDTA處理的血漿、尿液。2.3血清分離血清或血漿應(yīng)在收集后盡快分離出來。未酸化的尿液，隨機(jī)或限時(shí)收取。3.標(biāo)本存放：不要用嘴吸取標(biāo)本或?qū)?biāo)本吹氣，以免唾液污染標(biāo)本唾液中的淀粉酶使結(jié)果升高。血清淀粉酶在20～25℃穩(wěn)定一個(gè)星期，避免微生物降解作用；在2～8℃時(shí)穩(wěn)定一個(gè)月。尿液樣品在2～8℃可穩(wěn)定10天，在15～25℃可穩(wěn)定2天。對(duì)于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的穩(wěn)定性減弱，因此，儲(chǔ)存前pH值應(yīng)調(diào)至大約7.0。4.標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下運(yùn)輸5.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染、溶血的不能做測(cè)定。6.實(shí)驗(yàn)材料：6.1AMS測(cè)定試劑盒（試劑16×64ml＋試劑26×16ml）6.1.1試劑組成試劑1：GOOD’S緩沖液 pH7.1100mmol/L氯化鈉50mmol/L氯化鎂10mmol/L-葡萄糖苷酶≥23KU/L試劑2：EPS－G73mmol/L6.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：原試劑避光保存于2～8℃，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑有效期為24個(gè)月。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有濁度時(shí)，表明有細(xì)菌污染則試劑不能使用。6.1.5注意事項(xiàng)：唾液和皮膚中含有-淀粉酶，應(yīng)避免用嘴吸取試劑，避免皮膚接觸試劑。試劑中含疊氮鈉，避免接觸皮膚及粘膜。6.2校準(zhǔn)品：參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件6.3質(zhì)控品：參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件7.儀器：奧林巴斯AU1000生化分析儀8.操作步驟8.1項(xiàng)目基本參數(shù)：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU1000生化分析儀項(xiàng)目測(cè)定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU1000生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9.檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計(jì)算方法：無需手工計(jì)算，在37℃每個(gè)標(biāo)本的結(jié)果儀器自動(dòng)以U/L報(bào)告。手工測(cè)定計(jì)算方法為：-淀粉酶(U/L)=△A/min×F反應(yīng)總體積（ml）×1000F=毫摩爾消光系數(shù)×樣品體積（ml）×比色杯光徑注：1000＝IU/ml到U/L的轉(zhuǎn)換系數(shù)PNP在405nm處的毫摩爾消光系數(shù)：9.9012.參考值范圍血清或血漿16-108U/L隨機(jī)尿液100-1200U/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13.臨床意義：-淀粉酶是將淀粉降解為麥芽糖的水解酶類。人體內(nèi)的-淀粉酶來源于多種器官：胰淀粉酶由胰腺產(chǎn)生并釋放到腸道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由腎臟清除并經(jīng)尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。檢測(cè)血清、尿液中-淀粉酶活力主要用于診斷胰腺功能紊亂和監(jiān)測(cè)并發(fā)癥的發(fā)展。急性胰腺炎發(fā)作病人在腹痛開始后的幾小時(shí)內(nèi)，血液淀粉酶活力升高，約12小時(shí)后達(dá)到峰值；并至少在5天后活力回復(fù)至參考范圍內(nèi)。由于多種非胰腺疾病如腮腺炎、腎功能不全等也會(huì)引起-淀粉酶的升高，所以-淀粉酶對(duì)胰腺功能紊亂的診斷特異性不高。因此，為了確診急性胰腺炎，還應(yīng)進(jìn)行脂肪酶檢測(cè)14.操作性能14.1線性范圍：3～2400U/L14.2精密度：精密度的評(píng)估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法7，AU1000批內(nèi)不精密度小于5%，總不精密度小于10%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)批間精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)樣品11842.001.08樣品11801.821.01樣品23982.670.67樣品23833.740.97樣品38414.960.59樣品38177.480.9214.3方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時(shí)對(duì)100個(gè)樣品進(jìn)行AMY活力檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=1.00x+1.00U/L；r=0.998。14.4靈敏度：本試劑的檢測(cè)限為3U/L。14.5病人結(jié)果可報(bào)告范圍：3～2400U/L15.超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為2400U/L。如樣品測(cè)定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1：10稀釋，重新測(cè)定，結(jié)果乘以11。16.病危報(bào)警值的處理當(dāng)血清AMS>300U/L時(shí)，在經(jīng)過復(fù)查等確認(rèn)手段處理后應(yīng)及時(shí)向臨床主管醫(yī)生匯報(bào)。17.方法局限性17.1本法線性上限為2400U/L。如樣品測(cè)定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1：10稀釋，重新測(cè)定，結(jié)果乘以11。17.2干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704mol/L，膽紅素濃度684mol/L，甘油三酯濃度11.3mmol/L時(shí)沒有觀察到干擾。即使極低濃度的血紅蛋白都會(huì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生干擾。18.補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時(shí)，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19.參考文獻(xiàn)：1. Friedman,R.B.andYoung,D.S.EffectsofDiseasesonClinicalLaboratoryTests,2ndEdition,AACCPress,Washington,DC,1989.2. Blair,H.E.,Genzyme,USPatentPending.3. Tietz,N.W.(Ed),ClincialGuidetoLaboratoryTests,2ndEdition,W.B.Saunders,1990.4. Henry,R.J.,Cannon,D.C.andWinkelman,J.W.,ClinicalChemistry,Principles&Technciques,2ndEdition,Harper&Row,943-949;1974.5. NCCLS,InterferenceTestinginClincialChemistry,EP7-P,1986.6. Young,D.S.,EffectsofDrugsonClincialLaboratoryTests,4thEd