2023學(xué)年完整公開(kāi)課版霉菌的分離

微生物的菌種選育-霉菌的分離篩選霉菌菌落的特征：A、形態(tài)較大，質(zhì)地疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或松或緊的形狀。B、菌落和培養(yǎng)基間的連接緊密，不易挑取，菌落正面與反面的顏色、構(gòu)造，以及邊緣與中心的顏色、構(gòu)造常不一致。C、霉菌的菌絲有營(yíng)養(yǎng)菌絲和氣生菌絲的分化，而氣生菌絲沒(méi)有毛細(xì)管水，故它們的菌落必然與細(xì)菌或酵母菌的不同，較接近放線(xiàn)菌。

根霉菌孢子形態(tài)：

顯微鏡下根霉孢子形態(tài)：

根霉菌落形態(tài)：分離霉菌需要的材料

酒曲、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、蒸餾水、1mol/LNaOH、1mol/LHCl分離霉菌需要的設(shè)備高壓蒸汽滅菌鍋、電爐、天平、鐵架臺(tái)、滅菌培養(yǎng)皿、錐形瓶、漏斗、試管、燒杯、膠頭滴管、石蕊試紙、接種環(huán)、酒精燈、量筒、玻璃棒、紗布、濾紙、試管塞、報(bào)紙、扎繩、標(biāo)簽、溫箱、冰箱、蓋玻片、載玻片、顯微鏡、杜氏管馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）的制備

將新鮮的馬鈴薯洗凈、去皮，（注意：發(fā)霉、變綠的不要使用。）切成薄片或蠶豆大小的方塊，稱(chēng)取所需的重量，倒入鍋內(nèi)，加水1000mL煮沸半小時(shí)左右，至馬鈴薯酥而不爛為止，用四層紗布過(guò)濾，然后將事先稱(chēng)好的瓊脂加到上述濾液中，用小火加熱，使之慢慢融化，并用玻棒不斷攪拌，以免燒焦鍋底。再加入事先用溫水溶化的糖溶液，用二層紗布過(guò)濾。測(cè)定pH值，用1mol/L的NaOH或HCl調(diào)至pH為5.5～6.5之間，最后加水補(bǔ)足至1000mL。（1）水瓊脂制備：將瓊脂粉直接加入無(wú)菌水中在微波爐中加熱至融化：如果將瓊脂粉加入自來(lái)水中，則需要進(jìn)行高溫蒸汽滅菌，單孢分離常用2%水瓊脂。（2）瓊脂片制備：用1ml滅菌移液槍吸取2%的無(wú)菌水瓊脂涂布在無(wú)菌載玻片上，厚度均勻。毛細(xì)管單胞打孔法獲取霉菌單孢子毛細(xì)管單胞打孔法獲取霉菌單孢子（3）孢子涂布：用滅菌挑針挑取一小塊酒曲，一般會(huì)足以沾有霉菌的孢子，將其沾復(fù)到水瓊脂片上，用滅菌波棒或毛細(xì)管沾取無(wú)菌水，稀釋涂布孢子?；蛘哂弥睆?mm的毛細(xì)管，在酒精燈下燒軟后拉絲，折斷后制作成細(xì)針（簡(jiǎn)稱(chēng)“毛細(xì)管針”）用毛細(xì)管針挑取孢子，直接涂布到水瓊脂片上。（4）孢子選?。猴@微鏡檢（常用十倍物鏡）涂有孢子的水瓊脂片，找到典型孢子后，移入視野中央（要求視野內(nèi)僅此一個(gè)孢子），然后下移載物臺(tái)。毛細(xì)管單胞打孔法獲取霉菌單孢子（5）瓊脂打孔：取內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)管，在酒精燈上燒軟后彎成直角，短臂長(zhǎng)約1cm。短臂端部在酒精燈上加熱滅菌后，對(duì)準(zhǔn)顯微鏡物鏡下的光斑中央下壓，在水瓊脂上打一個(gè)直徑1cm的圓餅，提升載物臺(tái)到原來(lái)位置，觀察目標(biāo)孢子是否在瓊脂并上，如果不在重新選取孢子（6）單胞轉(zhuǎn)移：用無(wú)菌針或毛細(xì)管針，挑去帶有目標(biāo)孢子的瓊脂餅轉(zhuǎn)入馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，有孢子的一面緊貼培養(yǎng)基，每皿可放3-5個(gè)單孢。室溫下過(guò)夜培養(yǎng)12-20小時(shí)。（或放入設(shè)置好的培養(yǎng)箱中23-25℃），觀察長(zhǎng)出菌落的形態(tài)。1、光學(xué)顯微