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![多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段演示文稿課件_第2頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b2.gif)
![多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段演示文稿課件_第3頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b3.gif)
![多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段演示文稿課件_第4頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b4.gif)
![多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段演示文稿課件_第5頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b/a8d3fb7a0db413b33c73e649140b845b5.gif)
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多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片斷細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外DNA復(fù)制環(huán)境的區(qū)別體內(nèi)DNA的復(fù)制體外的模擬模板(母鏈)細(xì)胞內(nèi)源外源加入引物引物合成酶外源加入底物dNTP細(xì)胞內(nèi)源外源加入聚合酶細(xì)胞內(nèi)源外源加入反應(yīng)環(huán)境細(xì)胞內(nèi)環(huán)境緩沖液PCR儀微量離心管微量移液器靶序列靶序列PCR循環(huán)第一步:加熱變性靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’TaqDNA聚合酶PCR循環(huán)第三步:引物延伸靶序列
靶序列第1個(gè)PCR循環(huán)完成后:得到兩個(gè)拷貝的靶序列循環(huán)數(shù)變性復(fù)性延伸第一次94°C,10min--30次94℃,30s55℃,30s72℃,1min最后一次72℃,10min④計(jì)算DNA含量(g
)=50x(260nm的讀數(shù))x稀釋倍數(shù)50:1g/ml的DNA在厚度為1cm比色杯中的吸光值為0.02比色杯實(shí)驗(yàn)小結(jié)PCR儀加熱使()變性,復(fù)性使引物與模板DNA(),延伸需將反應(yīng)溫度升至中溫(),在()的作用下,以()為原料,以()為復(fù)制的起點(diǎn),合成新鏈。如此重復(fù)改變反應(yīng)溫度,經(jīng)()三個(gè)階段為一個(gè)循環(huán),每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍,一般樣品是經(jīng)過(guò)30次循環(huán),最終使基因放大了數(shù)百萬(wàn)倍;將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳,經(jīng)溴化乙錠染色,在紫外燈照射下肉眼能見(jiàn)到擴(kuò)增特異區(qū)段的DNA
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