12綜合實(shí)訓(xùn)配套奶粉中環(huán)丙沙星獸藥殘留檢測(cè)

奶粉中環(huán)丙沙星獸藥殘留檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)

綜合實(shí)訓(xùn)1實(shí)訓(xùn)背景、目的1材料、儀器與設(shè)備2實(shí)訓(xùn)任務(wù)3實(shí)訓(xùn)考核4目錄頁(yè)CONTENTSPAGE實(shí)訓(xùn)背景、目的我國(guó)絕大多數(shù)的動(dòng)物在其一生中或多或少的均使用過(guò)獸藥抗生素，而殘留在動(dòng)物性食品中的獸藥抗生素，將隨著食物鏈進(jìn)入人體，對(duì)人類的健康構(gòu)成潛在的威脅。為了確保食品安全和國(guó)民身體健康，促進(jìn)畜禽產(chǎn)品的發(fā)展，本實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目參照中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1751.3-2011對(duì)市售奶粉進(jìn)行環(huán)丙沙星獸藥殘留檢測(cè)。1.實(shí)訓(xùn)背景2.實(shí)訓(xùn)目的實(shí)訓(xùn)背景、目的鞏固高效液相色譜儀器使用；全面熟悉動(dòng)物源性食品中獸藥殘留檢測(cè)要求與方法；熟悉樣品預(yù)處理、檢測(cè)和數(shù)據(jù)處理各環(huán)節(jié)關(guān)鍵操作；能獨(dú)立運(yùn)用高效液相色譜技術(shù)對(duì)食品進(jìn)行獸藥殘留檢測(cè)實(shí)訓(xùn)目的1.實(shí)訓(xùn)背景2.實(shí)訓(xùn)目的材料、儀器與設(shè)備材料（每小組）：新鮮市售牛肉儀器設(shè)備：高效液相色譜儀（配熒光檢測(cè)器）托盤天平（感量0.01g）分析天平（感量0.00001g）漩渦振蕩器、組織勻漿機(jī)離心機(jī)、30mL勻漿杯50mL離心管固相萃取柱（C18，100mg/mL）微孔濾膜（0.45μm）實(shí)訓(xùn)任務(wù)試劑配制樣品預(yù)處理樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)處理過(guò)渡頁(yè)TRANSITIONPAGE任務(wù)一：試劑配制請(qǐng)參照實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)，完成下列試劑的配制。（1）5.0mol/L氫氧化鈉溶液（2）乙腈飽和正己烷溶液（3）洗脫液和定溶液（4）磷酸鹽緩沖溶液（5）環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（6）環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液任務(wù)二：樣品預(yù)處理1、試樣制備從原始樣品取出有代表性樣品約500g，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于4℃避光保存。在制樣的操作過(guò)程中，應(yīng)防止樣品污染或發(fā)生殘留物含量的變化。任務(wù)二：樣品預(yù)處理2、樣品提取稱取約2g（精確至0.01g）均質(zhì)后的試樣于50mL離心管中。加入20mL樣品提取液，振蕩提取20min后，10000r/min，離心10min，取上清液10mL于50mL分液漏斗中。30mL乙腈飽和正己烷分三次液-液分配除脂，振蕩5min，靜置后收集下層。任務(wù)二：樣品預(yù)處理3、樣品凈化——C18固相萃取柱凈化C18固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水預(yù)淋洗后，轉(zhuǎn)入10mL提取液。用5mL水進(jìn)行淋洗，棄去。用5mL洗脫液1進(jìn)行洗脫，收集洗脫液于10mL刻度試管中。整個(gè)固相萃取凈化過(guò)程控制流速不超過(guò)2mL/min。洗脫液在50℃下用氮?dú)獯抵良s1mL后加入9mL磷酸鹽緩沖液，渦旋混勻1min，超聲波助溶1min，待過(guò)MAX固相萃取柱。任務(wù)二：樣品預(yù)處理3、樣品凈化——MAX固相萃取柱凈化MAX固相萃取柱依次用2mL甲醇、2mL5mol/L的氫氧化鈉溶液、2mL水預(yù)淋洗后，轉(zhuǎn)入磷酸鹽緩沖液溶解液。依次用2mL25%氨水、2mL甲醇進(jìn)行淋洗，棄去。用5mL洗脫液2進(jìn)行洗脫，收集洗脫液于10mL刻度試管中。整個(gè)固相萃取凈化過(guò)程控制流速不超過(guò)2mL/min。洗脫液在50℃下用氮?dú)獯蹈伞Ｓ枚ㄈ菀憾ㄈ葜?mL，渦旋混勻1min后，超聲波助溶1min，過(guò)0.2μm微孔濾膜，供儀器檢測(cè)。任務(wù)三：樣品檢測(cè)1、色譜條件色譜柱：C18250mm4.6mm(i.d)，粒徑5μm，或相當(dāng)者；流動(dòng)相：A：乙腈，B：0.02mol/L磷酸溶液任務(wù)三：樣品檢測(cè)1、色譜條件流速：1.0mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)280nm；發(fā)射波長(zhǎng)450nm；柱溫：40℃進(jìn)樣量：10μL任務(wù)三：樣品檢測(cè)2、測(cè)定方法根據(jù)樣液中待測(cè)喹諾酮藥物的含量，選定濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，待測(cè)樣液中喹諾酮藥物的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)（0.4ng/mL-5μg/mL）。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣液等體積參插進(jìn)樣測(cè)定。在上述儀器條件下，環(huán)丙沙星保留時(shí)間約為21.1min。在上述色譜條件下，對(duì)照溶液和試樣溶液的高效液相色譜圖分別見(jiàn)附錄A中圖A.1、圖A.2。任務(wù)三：樣品檢測(cè)2、測(cè)定方法任務(wù)四：數(shù)據(jù)處理1、抗生素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X——試料中抗生素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每克（ng/g）；A——試樣溶液中抗生素的峰面積；AS——對(duì)照溶液中抗生素的峰面積；CS——對(duì)照溶液中抗生素的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1——提取用磷酸鹽緩沖液的總體積，單位為毫升（mL）；V2——過(guò)固相萃取柱所用備用液體積，單位為毫升（mL）；V3——洗脫用流動(dòng)相體積，單位為毫升（mL）；M——供試試料的質(zhì)量，單位為克（g）。注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，平均值保留三位有效數(shù)字。任務(wù)四：數(shù)據(jù)處理2、加標(biāo)回收率P——加標(biāo)回收率，（%）；m——每個(gè)加標(biāo)樣，經(jīng)預(yù)處理以后所剩余抗生素的總質(zhì)量，單位為納克（ng）；m0——空白樣中抗生素的總質(zhì)量，單位為納克（ng）；ms——所加標(biāo)準(zhǔn)樣中抗生素的總質(zhì)量，單位為納克（ng）。數(shù)據(jù)結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后2位。任務(wù)四：數(shù)據(jù)處理3、RSD值

——三個(gè)平行加標(biāo)樣中抗生素質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值，單位為納克每克（ng/g）；n——平行樣品個(gè)數(shù)，為3；xi——每個(gè)平行樣品加標(biāo)樣中抗生素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每克（ng/g）。數(shù)據(jù)結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后2位。實(shí)訓(xùn)考核任務(wù)1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備-