
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植物有絲分裂染色體制備目的掌握有絲分裂染色體制片技術(shù)為接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)制備分散較好的染色體制片原理有絲分裂中期的染色體長(zhǎng)度較短,具有典型的形態(tài)特征,易于記數(shù)和分析在細(xì)胞的分裂過(guò)程中,進(jìn)行藥物或冰凍處理,可阻止紡綞體的形成,使細(xì)胞分裂停止在中期原理對(duì)組織細(xì)胞進(jìn)行酸性水解或酶解處理,可以降解細(xì)胞之間的果膠質(zhì)和細(xì)胞的纖維素壁,使細(xì)胞易于散開(kāi)。材料、器具水稻根尖顯微鏡、水浴鍋、鑷子、載玻片、蓋玻片、小瓶、酒精燈、濾紙?jiān)噭?.002M8-羥基喹啉水溶液(或飽和對(duì)二氯苯水溶液,或飽和α-9溴萘水溶液)、0.075MKCl溶液、卡諾固定液、2.5%纖維素酶和2.0%果膠酶水溶液、Giemsa母液、1/15M磷酸緩沖液(PH6.8)實(shí)驗(yàn)步驟1浸種催芽:取少許種子放入培養(yǎng)皿中,加水浸沒(méi),于33℃左右浸種1-2天。當(dāng)種子萌動(dòng)時(shí),把水倒去在鋪有濕濾紙的培養(yǎng)皿中催芽。實(shí)驗(yàn)步驟2預(yù)處理:根長(zhǎng)至0.5-1.0cm時(shí)切取根尖,投入18℃的0.002M8-羥基喹啉水溶液中處理1-1.5h。實(shí)驗(yàn)步驟3前低滲:吸去預(yù)處理液,加入0.075MKCl溶液或水低滲處理10-30min。實(shí)驗(yàn)步驟4固定:用卡諾固定液固定30min以上,也可固定后放入4℃冰箱保存。5水洗3次,每次10min。6酶解:加入2.5%纖維素酶和2.0%的果膠酶水溶液,37℃酶解處理70-120min7后低滲:倒去酶液后用蒸餾水沖洗2-3次,在水中min以上,即可直接用于制片實(shí)驗(yàn)步驟8火焰干燥制片:放2-3個(gè)根尖在載片上,加一小滴固定液,用鑷子將根尖敲至漿狀。再滴2-3滴固定液,迅速用鑷子夾住載片在酒精燈火焰上加熱至著火,然后吹滅火焰,載片在空氣中自然干燥實(shí)驗(yàn)步驟9染色:Giemsa染色液染色1-3h,自來(lái)水沖洗,晾干10觀察:光學(xué)顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)步驟注意事項(xiàng)
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