病原微生物實驗活動危害評估課件

病原微生物實驗活動危害評估陳利玉博士教授中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)微生物學(xué)系病原微生物實驗活動危害評估陳利玉博士教授1實驗室生物安全的核心內(nèi)容是生物安全風(fēng)險評估，而病原微生物危害評估是生物安全風(fēng)險評估的重要組成部分。實驗室生物安全的核心內(nèi)容是生物安全風(fēng)險評估，而2實驗室生物安全風(fēng)險評估包括:

病原微生物危害評估動物實驗風(fēng)險評估實驗室活動風(fēng)險評估實驗室儀器、設(shè)備相關(guān)的風(fēng)險評估實驗人員方面的風(fēng)險評估實驗室環(huán)境有關(guān)的風(fēng)險評估實驗室生物安全管理制度方面的風(fēng)險評估實驗室生物安全風(fēng)險評估包括:32004年頒布的《病原微生物實驗室生物安全管理條例》和國家標準《實驗室生物安全通用要求》(GB19489，2008)明確規(guī)定“當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，首先要進行生物危害評估”。2004年頒布的《病原微生物實驗室生物安全管理條例》4病原微生物危害評估是基于病原微生物危害程度及相關(guān)背景資料，同時考慮實驗活動中可能涉及的傳染或潛在傳染因子等其他因素，對病原微生物造成的傷害、損害或者導(dǎo)致疾病發(fā)生的可能性所進行的全面評估。病原微生物危害評估的概念病原微生物危害評估是基于病原微生物危害程度及相關(guān)背景5病原微生物危害評估的目的

根據(jù)在實驗活動中病原微生物可能對個體或群體造成的危害大小，①制定相應(yīng)的安全防范制度和操作程序，②選擇相應(yīng)等級的生物安全實驗室及設(shè)備配置，③實驗人員采取相應(yīng)的防護措施和使用相符的安全防護裝置，達到確保實驗工作人員不被感染、實驗對象和環(huán)境不被污染的目的。病原微生物危害評估的目的根據(jù)在實驗活動中病原微生物可能6病原微生物危害評估的用途1.確定所需的生物安全防護水平包括實驗室的空間、設(shè)施與設(shè)備等能滿足生物安全的需要，確保所開展的實驗活動安全進行。病原微生物危害評估的用途1.確定所需的生物安全防護水平7微生物操作規(guī)程；

儀器設(shè)備使用的操作程序；微生物保藏、運輸、滅活、銷毀程序；潛在危害分析與意外事故處理程序；

人員培訓(xùn)、個人防護及健康監(jiān)測程序。2.

制定相關(guān)操作或管理規(guī)程微生物操作規(guī)程；2.制定相關(guān)操作或管理規(guī)程83.

提供相關(guān)病原微生物的背景信息危害評估中有關(guān)病原微生物的背景信息，是所有工作人員必須學(xué)習(xí)的參考資料，是人員培訓(xùn)的重要內(nèi)容之一。3.提供相關(guān)病原微生物的背景信息94.

評價病原微生物實驗室的生物安全狀況

評價病原微生物實驗室生物安全狀況是在對擬進行的病原微生物危害評估審核的基礎(chǔ)上，評估所制定的操作與管理制度及實驗室設(shè)施設(shè)備是否能滿足生物安全要求。4.評價病原微生物實驗室的生物安全狀況評價病原微生10堅持“結(jié)合實際、科學(xué)評估”原則堅持“簡明扼要，科學(xué)可行”原則堅持專業(yè)人員協(xié)作完成的原則病原微生物危害評估的原則堅持“結(jié)合實際、科學(xué)評估”原則病原微生物危害評估的原則11危害程度評估應(yīng)由生物安全管理領(lǐng)導(dǎo)小組指定的專業(yè)人員進行，專業(yè)人員必須對實驗室情況十分了解，并且熟悉涉及的知識領(lǐng)域。危害評估應(yīng)在生物安全實驗室建設(shè)前進行，在實驗室正式啟用前和實驗過程中根據(jù)實際情況和有關(guān)進展進行再評估。

危害程度評估應(yīng)由生物安全管理領(lǐng)導(dǎo)小組指定的專業(yè)人員進12

中華人民共和國傳染病防治法

病原微生物實驗室生物安全管理條例實驗室生物安全通用要求（GB19489，2008）WHO實驗室生物安全手冊（第三版，2004）人間傳染的病原微生物名錄病原微生物相關(guān)專業(yè)文獻和書籍病原微生物危害評估的主要理論參考中華人民共和國傳染病防治法病原微生物危害評估的主要理論參考13病原微生物危害評估的主要依據(jù)病原微生物危害程度分類病原微生物的相關(guān)背景資料擬進行的實驗活動及其可能產(chǎn)生的潛在危害人員資質(zhì)與健康狀況等病原微生物危害評估的主要依據(jù)病原微生物危害程度分類14危害程度分類是病原微生物危害評估的主要依據(jù)之一；危害類別的高低是根據(jù)病原微生物對個體和群體感染后可能產(chǎn)生的相對危害程度來劃分的；不同國家各自進行微生物危害程度分類。一、病原微生物危害程度分類危害程度分類是病原微生物危害評估的主要依據(jù)之一；一、病原微15（一）病原微生物危害程度分類主要依據(jù)1.微生物的致病性?致病性越強，危害程度越大2.微生物的傳播方式和宿主范圍?人群的免疫水平?宿主群體的密度和流動?適宜媒介的存在?環(huán)境衛(wèi)生水平（一）病原微生物危害程度分類主要依據(jù)1.微生物的致病性16

3．當?shù)厮邆涞挠行ьA(yù)防措施

?主動、被動免疫

?衛(wèi)生措施

?動物宿主或節(jié)肢動物媒介的控制4．當?shù)厮邆涞挠行е委煷胧?

被動免疫?暴露后接種疫苗?暴露后使用藥物治療?耐藥菌株的可能性

17（二）國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實驗室生物安全管理條例》：將病原微生物分為四類：一類、二類、三類、四類。危害程度由一類至四類遞減。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物?！秾嶒炇疑锇踩ㄓ靡蟆?GB19489-2004):將病原微生物分為四級：Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級。危害程度由Ⅰ級至Ⅳ級遞增。劃分標準和等級與WHO《生物安全手冊》第三版（2004）基本一致。（二）國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實驗室生物18國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較

不同標準微生物危害等級劃分與標準

《病原微生物實驗室生物安全管理條例》美國CDC/NIH《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全》(第四版)WHO《生物安全手冊》（第三版，2004）第四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

BSL-1級不會經(jīng)常引發(fā)健康成年人疾病的微生物危險度Ⅰ級（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。

國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較

不同標準微生物危害等級劃分19病毒:

豚鼠皰疹病毒、小鼠白血病病毒等6類細菌:

名錄中未列出真菌:名錄中未列出《名錄》中危害程度為第四類的微生物舉例病毒:豚鼠皰疹病毒、小鼠白血病病毒《名錄》中危害程度20國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。

BSL-2級因皮膚傷口、吸入、黏膜暴露而發(fā)生危險的人類病原

危險度Ⅱ級（個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。管理條例 美國生物安全WHO安全手冊國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第三類能夠引起人類或者動物疾21病毒:

肝炎病毒、流行性感冒病毒腺病毒、皰疹病毒等74類細菌:細菌、放線菌、螺旋體、衣原體、支原體等145類真菌:

新生隱球菌、白假絲酵母菌等55類Prion:Scrapie1類《名錄》中危害程度為第三類的微生物舉例病毒:肝炎病毒、流行性感冒病毒《名錄》中危害程度為第三類22國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第二類能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。BSL-3級可通過氣溶膠傳播、能導(dǎo)致嚴重后果或生命危險的內(nèi)源性和外源性病原危險度Ⅲ級（個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預(yù)防和治療措施。管理條例 美國生物安全WHO安全手冊國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第二類能夠引起人類或者動物嚴23病毒:HIV、SARS冠狀病毒、漢坦病毒、乙型腦炎病毒、高致病性禽流感病毒等51類細菌:炭疽芽胞桿菌、鼠疫耶爾森菌、霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌、立克次體屬等10類真菌:

粗球孢子菌、馬皮疽組織胞漿菌、莢膜組織胞漿菌、巴西副球孢子菌4類Prion:

BSE病原等5類《名錄》中危害程度為第二類的微生物舉例病毒:HIV、SARS冠狀病毒、漢坦病毒、乙《名錄》中危害24國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第一類能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

BSL-4級對生命有高度危險的病原或外源性病原，致命，通過氣溶膠而導(dǎo)致實驗室感染，或未知傳播危險的病原危險度Ⅳ級（個體和群體的危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。管理條例 美國生物安全WHO安全手冊國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第一類能夠引起人類或者動物非25病毒:

埃博拉病毒、馬爾堡病毒新疆出血熱病毒、天花病毒等29類細菌:

無真菌:

無《名錄》中危害程度為第一類的微生物舉例病毒:埃博拉病毒、馬爾堡病毒《名錄》中危害程度為第一類的26

《人間傳染的病原微生物名錄》一、病毒（160類）：一類29類、二類51類三類74類、四類6類二、細菌（155類）：二類10類、三類145類放線菌衣原體支原體立克次體螺旋體三、真菌（59類）：二類4類、三類55類附件：朊粒（6類）：二類5類、三類1類《人間傳染的病原微生物名錄》27

《人間傳染的病原微生物名錄》不僅對病原微生物的危害程度進行了分類，而且還規(guī)定了其不同實驗操作的防護水平以及運輸?shù)陌b要求?！度碎g傳染的病原微生物名錄》不僅對病原微生物的危害程度28病原菌名稱危害程度分類實驗活動所需生物安全實驗室級別運輸包裝分類學(xué)名中文名大量活菌操作動物感染實驗樣本檢測非感染性材料實驗A/BUN編號Vibriocholerae霍亂弧菌第二類BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1AUN2814Acinetobacterbaumannii鮑氏不動桿菌第三類BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN3373病原菌名稱危害程度分類實驗活動所需生物安全實驗室級別運輸包裝29病原微生物危害程度分類與實驗室防護水平的關(guān)系是相對應(yīng)而非“等同”。在確定所從事特定工作的生物安全水平時，應(yīng)根據(jù)危害評估結(jié)果來進行專業(yè)判斷，而不應(yīng)單純根據(jù)該病原微生物的危害程度分類來機械地確定所需的實驗室生物安全水平。《名錄》列出的微生物實驗操作是應(yīng)采取的最低防護水平。注意：病原微生物危害程度分類與實驗室防護水平的關(guān)系是相對應(yīng)而非“等30

二、病原微生物危害評估的基本內(nèi)容（一）一般生物學(xué)特征概述（二）致病性和感染劑量（三）感染途徑及暴露潛在后果（四）微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性（五）被操作微生物的濃度和劑量的影響（六）自然宿主和易感人群（七）實驗動物研究、實驗室感染或醫(yī)院內(nèi)感染信息（八）實驗活動評估（九）重組DNA操作和可能擴大的宿主范圍（十）預(yù)防和治療措施（十一）人員安全狀況評估（十二）評估結(jié)論

二、病原微生物危害評估的基本內(nèi)容（一）一般生物學(xué)特征概述31

(一)一般生物學(xué)特性概述

一般生物學(xué)特性能提供某種特定病原微生物的基本背景信息，有助于對特定病原微生物產(chǎn)生概括性的認識。(一)一般生物學(xué)特性概述

一般生物學(xué)特性能提32包括：

起源：簡要地介紹病原微生物的發(fā)現(xiàn)過程形態(tài)特征：描述病原體的形狀、大小和結(jié)構(gòu)基因組及其編碼產(chǎn)物：描述基因組的類型、長度、編碼產(chǎn)物種類及其功能等培養(yǎng)特性：描述病原體的培養(yǎng)條件、培養(yǎng)細胞或培養(yǎng)基類型、細胞病變特征、菌落特點等包括：

起源：簡要地介紹病原微生物的發(fā)現(xiàn)過程33致病性和感染劑量是評估病原微生物引起感染的輕重程度的重要參考依據(jù)之一；致病性：宿主類型，病原微生物的種、型、株，入侵的部位，體內(nèi)的定位，是否產(chǎn)生特異性毒素等；不同的病原微生物的致病能力不同，決定了他們感染機體的劑量差異。(二)致病性和感染劑量致病性和感染劑量是評估病原微生物引起感染的輕重程度的重要參考34至于多少數(shù)量的病原微生物能夠?qū)е聶C體發(fā)病目前尚沒有統(tǒng)一的數(shù)據(jù)；病原微生物致病性越強，導(dǎo)致發(fā)病的劑量就越低，同一微生物感染劑量越大，其暴露的潛在后果也越嚴重。至于多少數(shù)量的病原微生物能夠?qū)е聶C體發(fā)病目前尚沒有統(tǒng)一的數(shù)據(jù)35致病性主要是闡述病原微生物引發(fā)疾病的過程和發(fā)病機制；感染劑量是給出引起人類或動物模型發(fā)病的劑量范圍或最低閾值。評估報告中：致病性主要是闡述病原微生物引發(fā)疾病的過程和發(fā)病機制；評估報告36(三)感染途徑及暴露的潛在后果感染途徑：自然感染途徑：病原微生物在自然界中傳播的途徑非自然感染途徑：實驗室和醫(yī)院感染的途徑(三)感染途徑及暴露的潛在后果感染途徑：自然感染途徑：病原37自然感染途徑感染途徑：呼吸道、消化道、接觸、血液、蟲媒等；評估報告中明確所從事病原微生物的自然感染途徑種類和方式。經(jīng)呼吸道傳播的病原微生物在實驗室容易通過氣溶膠引起不同的感染性疾病。自然感染途徑感染途徑：呼吸道、消化道、接觸、血液、蟲媒等；38操作所致的非自然途徑感染清除和處理感染性材料時可能導(dǎo)致手污染；微生物操作中釋放的較大粒子和液滴（直徑大于5μm）會迅速沉降到工作臺面和操作者的手上，可以引起經(jīng)消化道、皮膚和眼睛的感染；破損玻璃器皿刺傷，或注射器扎傷可以引起經(jīng)血液的感染；血清樣本采集時可能經(jīng)噴濺和氣溶膠引起呼吸道感染或眼結(jié)膜感染；進行動物實驗時被動物咬傷、抓傷可導(dǎo)致感染。操作所致的非自然途徑感染清除和處理感染性材料時可能導(dǎo)致手污染39暴露的潛在后果暴露以后，后果的輕重取決于病原微生物的致病力和機體的抵抗力。對暴露的潛在后果評估，應(yīng)參考教科書并收集相關(guān)資料，突出個體傳染過程與結(jié)局。

暴露的潛在后果暴露以后，后果的輕重取決于病原微生物的致病力和40個體傳染過程與結(jié)局隱性感染（亞臨床感染）

顯性感染（臨床傳染病）是否出現(xiàn)個體嚴重的結(jié)局—致殘、致死是否出現(xiàn)個體間的傳播評估報告中要分析實驗人員暴露后，可能對實驗人員產(chǎn)生的后果，以及可能導(dǎo)致周圍環(huán)境和人群帶來的危害等。個體傳染過程與結(jié)局隱性感染（亞臨床感染）

評估報告中要分析41(四)在環(huán)境中的穩(wěn)定性病原微生物的穩(wěn)定性是指其抵抗外界環(huán)境的存活能力。這種能力直接影響病原微生物的傳染性，特別是通過空氣傳播的病原體。穩(wěn)定性評估:?在自然界中的穩(wěn)定性?對物理因素、化學(xué)消毒劑的敏感性(四)在環(huán)境中的穩(wěn)定性病原微生物的穩(wěn)定性是指其抵抗42(五)被操作病原微生物的濃度和劑量的影響所操作的病原微生物的濃度和劑量與可能產(chǎn)生的危害程度密切相關(guān)；危害評估需要獲得不同的實驗操作、不同的樣本類型所涉及的病原微生物的濃度和劑量，以此來判斷危險性的大小。如果實驗涉及體積較大的樣本或濃度較高的病原微生物制品，則需要提高防護水平。(五)被操作病原微生物的濃度和劑量的影響所操作的病原微生物43(六)自然宿主和易感人群自然宿主是病原微生物在自然界傳播中所涉及的、能夠在體內(nèi)存活的動物或人類。如禽類、豬、馬、海豚及人均是禽流感病毒的自然宿主。評估中應(yīng)確定擬操作病原微生物的自然宿主。易感人群需要指出在人群中的哪一類或幾類人容易感染該病原微生物，如男性、女性或成人、兒童或孕婦等。(六)自然宿主和易感人群自然宿主是病原微生物在自然界傳播中44在某些病原微生物或待檢樣品危害程度相關(guān)背景信息量不足時，應(yīng)從動物研究、實驗室感染或院內(nèi)感染的病例中收集信息：?病人醫(yī)學(xué)資料；?流行病學(xué)資料；?樣品來源地的相關(guān)信息；?動物模型的研究資科。

(七)動物研究、實驗室感染或院內(nèi)感染信息在某些病原微生物或待檢樣品危害程度相關(guān)背景信息量不足45(八)實驗活動危害分析

在操作病原微生物的實驗活動中，許多環(huán)節(jié)可能產(chǎn)生危害。是整個病原微生物危害評估的重要內(nèi)容之一。(八)實驗活動危害分析

在操作病原微生物的實驗活動中，許多46實驗活動指實驗室從事與病原微生物菌(毒)種、樣本有關(guān)的研究、教學(xué)、檢測、診斷等活動。包含對象和類別兩個要素：實驗活動對象—病原微生物菌(毒)種及樣本實驗活動類別—不同風(fēng)險級別的實驗操作實驗活動指實驗室從事與病原微生物菌(毒)種、樣本有關(guān)的研究、47樣本感染性樣本潛在感染性樣本無感染性的樣本

——已知危害生物因子感染性樣品：如一名乙肝患者的血液標本；

——未知危害生物因子感染性樣品：如新發(fā)不明原因傳染病血液標本。樣本感染性樣本——已知危害生物因子感染性樣品48

涉及病毒的實驗活動類別病毒培養(yǎng)動物感染實驗未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作滅活材料的操作無感染性材料的操作涉及病毒的實驗活動類別病毒培養(yǎng)49涉及細菌、真菌的實驗活動類別大量活菌操作動物感染實驗樣本檢測非感染性材料的實驗涉及細菌、真菌的實驗活動類別大量活菌操作50在評估時，要結(jié)合各個實驗室和項目開展實驗活動的范圍和種類，識別不同活動中的危險因素，并給出正確的操作規(guī)程和恰當?shù)姆雷o要求。如預(yù)先確定實驗操作中可能產(chǎn)生氣溶膠的步驟：如攪拌機、離心機、勻漿機、振蕩機、超聲波粉碎儀和混合儀等設(shè)備的使用。在評估時，要結(jié)合各個實驗室和項目開展實驗活動的范圍和種類，識51涉及動物的病原微生物實驗需要考慮的因素包括：?病原微生物：使用的劑量和濃度、正常傳播途徑、接種途徑、能否和以何種途徑被排出。?動物：--動物的自然特性（攻擊性和抓咬傾向性）--自然存在的體內(nèi)外寄生蟲--易感的動物疾病--野生動物：應(yīng)考慮潛伏感染的可能性涉及動物的病原微生物實驗需要考慮的因素包括：52九、重組DNA操作和可能擴大的宿主范圍實驗室或項目中如果進行病原微生物的基因重組操作，需要結(jié)合擬開展的實驗活動種類、親本株的生物學(xué)特性和重組體的生物學(xué)特性對基因重組操作進行全面評估，以確定重組操作的生物安全水平?；蛑亟M操作的相關(guān)規(guī)定可以參考衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》和NIH的《關(guān)于重組DNA分子研究指南》。九、重組DNA操作和可能擴大的宿主范圍實驗室或項目中如果進行53十、預(yù)防和治療措施是否有有效的治療藥物或其他有效的治療措施；是否有針對該傳染病的疫苗；是否有可靠的診斷措施，保證盡快查出可能的感染，以便及時進行有效的隔離與預(yù)防。此外，還應(yīng)考慮“當?shù)亍笔欠裼袟l件進行有效的預(yù)防或治療。十、預(yù)防和治療措施是否有有效的治療藥物或其他有效的治療措施54綜合的防治措施包括：健全的管理制度合理的操作規(guī)范恰當?shù)姆雷o水平全面的疫苗接種精確的檢查方法及時的事件處理能力綜合的防治措施包括：健全的管理制度55人員資質(zhì)評估人員健康評估十一、人員安全狀況評估人員資質(zhì)評估十一、人員安全狀況評估56相應(yīng)的知識背景實驗操作技能安全防護知識心理素質(zhì)應(yīng)急處理能力管理能力（管理者） 人員資質(zhì)評估相應(yīng)的知識背景人員資質(zhì)評估57從事病原微生物實驗活動的實驗人員必須具備良好的健康狀況；針對不同的病原微生物操作還會有一些特殊的健康要求；對實驗人員的健康指標進行不間斷的監(jiān)測人員健康評估從事病原微生物實驗活動的實驗人員必須具備良好的健康狀況；人員58十二、評估結(jié)論病原微生物危害程度分類實驗活動、實驗室級別以及個人防護要求人員健康和資質(zhì)要求預(yù)防和治療措施要求菌（毒）種和實驗活動管理要求應(yīng)急預(yù)案和措施要求十二、評估結(jié)論病原微生物危害程度分類59該物質(zhì)為什么作為可疑標本？利用病人的醫(yī)學(xué)資料、流行病學(xué)資料（發(fā)病率和病死率資料、可疑的傳播途徑、其他有關(guān)暴發(fā)的調(diào)查資料）、以及標本來源地的信息，推測可能分離的病原微生物并進行危害評估。三、含未知病原微生物的物質(zhì)的危害評估原則在待檢樣品信息不足時，應(yīng)重點考慮：該物質(zhì)為什么作為可疑標本？三、含未知病原微生物的物質(zhì)的危害評60對于取自病人的標本，均應(yīng)當遵循標準防護方法，并采用隔離防護措施（如手套、防護服、眼睛保護等）；基礎(chǔ)（最低）防護：二級生物安全水平；標本的運送應(yīng)當遵循國家和／或國際的規(guī)章和規(guī)定。處理含未知的病原微生物的標本時應(yīng)注意：對于取自病人的標本，均應(yīng)當遵循標準防護方法，并采用隔離防護措61

對可能含有未知病原微生物的物質(zhì)：應(yīng)根據(jù)回顧性資料，對既往已分離的病原微生物資料以及當?shù)亓餍胁W(xué)資料進行分析，推測可能分離的病原微生物并進行危害評估。在沒有病原微生物存在與否的確切信息時，需要采用常規(guī)的預(yù)防措施。對可能含有未知病原微生物的物質(zhì)：應(yīng)根據(jù)回顧性資料，對既往已62在生物安全實驗室正式啟用前，應(yīng)根據(jù)實際工作進行再評估；當收集到的資料表明所從事的病原微生物的致病性、傳染方式發(fā)生變化時，應(yīng)對其背景資料及時變更，并對其實驗活動的安全性進行再評估；增加新的研究項目時，應(yīng)對該項目的實驗活動進行評估；四、病原微生物危害評估的再評估在生物安全實驗室正式啟用前，應(yīng)根據(jù)實際工作進行再評估；四、病63在實驗活動中分離到原評估報告中未涉及的高致病性病原微生物時，應(yīng)對其進行全面的危害評估；在實驗過程中、或在檢查與督察過程中發(fā)現(xiàn)了安全隱患或問題時，應(yīng)進行再評估。在實驗活動過程中發(fā)生微生物泄漏或人員意外情況時，應(yīng)立即進行再評估。在實驗活動中分離到原評估報告中未涉及的高致病性病原微生物時，64危害評估報告舉例

sars冠狀病毒的危害評估.doc冠狀病毒的危害評估危害評估報告舉例SARS冠狀病毒的危害評估65謝謝！謝謝！66病原微生物實驗活動危害評估陳利玉博士教授中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)微生物學(xué)系病原微生物實驗活動危害評估陳利玉博士教授67實驗室生物安全的核心內(nèi)容是生物安全風(fēng)險評估，而病原微生物危害評估是生物安全風(fēng)險評估的重要組成部分。實驗室生物安全的核心內(nèi)容是生物安全風(fēng)險評估，而68實驗室生物安全風(fēng)險評估包括:

病原微生物危害評估動物實驗風(fēng)險評估實驗室活動風(fēng)險評估實驗室儀器、設(shè)備相關(guān)的風(fēng)險評估實驗人員方面的風(fēng)險評估實驗室環(huán)境有關(guān)的風(fēng)險評估實驗室生物安全管理制度方面的風(fēng)險評估實驗室生物安全風(fēng)險評估包括:692004年頒布的《病原微生物實驗室生物安全管理條例》和國家標準《實驗室生物安全通用要求》(GB19489，2008)明確規(guī)定“當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，首先要進行生物危害評估”。2004年頒布的《病原微生物實驗室生物安全管理條例》70病原微生物危害評估是基于病原微生物危害程度及相關(guān)背景資料，同時考慮實驗活動中可能涉及的傳染或潛在傳染因子等其他因素，對病原微生物造成的傷害、損害或者導(dǎo)致疾病發(fā)生的可能性所進行的全面評估。病原微生物危害評估的概念病原微生物危害評估是基于病原微生物危害程度及相關(guān)背景71病原微生物危害評估的目的

根據(jù)在實驗活動中病原微生物可能對個體或群體造成的危害大小，①制定相應(yīng)的安全防范制度和操作程序，②選擇相應(yīng)等級的生物安全實驗室及設(shè)備配置，③實驗人員采取相應(yīng)的防護措施和使用相符的安全防護裝置，達到確保實驗工作人員不被感染、實驗對象和環(huán)境不被污染的目的。病原微生物危害評估的目的根據(jù)在實驗活動中病原微生物可能72病原微生物危害評估的用途1.確定所需的生物安全防護水平包括實驗室的空間、設(shè)施與設(shè)備等能滿足生物安全的需要，確保所開展的實驗活動安全進行。病原微生物危害評估的用途1.確定所需的生物安全防護水平73微生物操作規(guī)程；

儀器設(shè)備使用的操作程序；微生物保藏、運輸、滅活、銷毀程序；潛在危害分析與意外事故處理程序；

人員培訓(xùn)、個人防護及健康監(jiān)測程序。2.

制定相關(guān)操作或管理規(guī)程微生物操作規(guī)程；2.制定相關(guān)操作或管理規(guī)程743.

提供相關(guān)病原微生物的背景信息危害評估中有關(guān)病原微生物的背景信息，是所有工作人員必須學(xué)習(xí)的參考資料，是人員培訓(xùn)的重要內(nèi)容之一。3.提供相關(guān)病原微生物的背景信息754.

評價病原微生物實驗室的生物安全狀況

評價病原微生物實驗室生物安全狀況是在對擬進行的病原微生物危害評估審核的基礎(chǔ)上，評估所制定的操作與管理制度及實驗室設(shè)施設(shè)備是否能滿足生物安全要求。4.評價病原微生物實驗室的生物安全狀況評價病原微生76堅持“結(jié)合實際、科學(xué)評估”原則堅持“簡明扼要，科學(xué)可行”原則堅持專業(yè)人員協(xié)作完成的原則病原微生物危害評估的原則堅持“結(jié)合實際、科學(xué)評估”原則病原微生物危害評估的原則77危害程度評估應(yīng)由生物安全管理領(lǐng)導(dǎo)小組指定的專業(yè)人員進行，專業(yè)人員必須對實驗室情況十分了解，并且熟悉涉及的知識領(lǐng)域。危害評估應(yīng)在生物安全實驗室建設(shè)前進行，在實驗室正式啟用前和實驗過程中根據(jù)實際情況和有關(guān)進展進行再評估。

危害程度評估應(yīng)由生物安全管理領(lǐng)導(dǎo)小組指定的專業(yè)人員進78

中華人民共和國傳染病防治法

病原微生物實驗室生物安全管理條例實驗室生物安全通用要求（GB19489，2008）WHO實驗室生物安全手冊（第三版，2004）人間傳染的病原微生物名錄病原微生物相關(guān)專業(yè)文獻和書籍病原微生物危害評估的主要理論參考中華人民共和國傳染病防治法病原微生物危害評估的主要理論參考79病原微生物危害評估的主要依據(jù)病原微生物危害程度分類病原微生物的相關(guān)背景資料擬進行的實驗活動及其可能產(chǎn)生的潛在危害人員資質(zhì)與健康狀況等病原微生物危害評估的主要依據(jù)病原微生物危害程度分類80危害程度分類是病原微生物危害評估的主要依據(jù)之一；危害類別的高低是根據(jù)病原微生物對個體和群體感染后可能產(chǎn)生的相對危害程度來劃分的；不同國家各自進行微生物危害程度分類。一、病原微生物危害程度分類危害程度分類是病原微生物危害評估的主要依據(jù)之一；一、病原微81（一）病原微生物危害程度分類主要依據(jù)1.微生物的致病性?致病性越強，危害程度越大2.微生物的傳播方式和宿主范圍?人群的免疫水平?宿主群體的密度和流動?適宜媒介的存在?環(huán)境衛(wèi)生水平（一）病原微生物危害程度分類主要依據(jù)1.微生物的致病性82

3．當?shù)厮邆涞挠行ьA(yù)防措施

?主動、被動免疫

?衛(wèi)生措施

?動物宿主或節(jié)肢動物媒介的控制4．當?shù)厮邆涞挠行е委煷胧?

被動免疫?暴露后接種疫苗?暴露后使用藥物治療?耐藥菌株的可能性

83（二）國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實驗室生物安全管理條例》：將病原微生物分為四類：一類、二類、三類、四類。危害程度由一類至四類遞減。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2004):將病原微生物分為四級：Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級。危害程度由Ⅰ級至Ⅳ級遞增。劃分標準和等級與WHO《生物安全手冊》第三版（2004）基本一致。（二）國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實驗室生物84國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較

不同標準微生物危害等級劃分與標準

《病原微生物實驗室生物安全管理條例》美國CDC/NIH《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全》(第四版)WHO《生物安全手冊》（第三版，2004）第四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

BSL-1級不會經(jīng)常引發(fā)健康成年人疾病的微生物危險度Ⅰ級（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。

國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較

不同標準微生物危害等級劃分85病毒:

豚鼠皰疹病毒、小鼠白血病病毒等6類細菌:

名錄中未列出真菌:名錄中未列出《名錄》中危害程度為第四類的微生物舉例病毒:豚鼠皰疹病毒、小鼠白血病病毒《名錄》中危害程度86國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。

BSL-2級因皮膚傷口、吸入、黏膜暴露而發(fā)生危險的人類病原

危險度Ⅱ級（個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽游镏虏。珜嶒炇夜ぷ魅藛T、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。管理條例 美國生物安全WHO安全手冊國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第三類能夠引起人類或者動物疾87病毒:

肝炎病毒、流行性感冒病毒腺病毒、皰疹病毒等74類細菌:細菌、放線菌、螺旋體、衣原體、支原體等145類真菌:

新生隱球菌、白假絲酵母菌等55類Prion:Scrapie1類《名錄》中危害程度為第三類的微生物舉例病毒:肝炎病毒、流行性感冒病毒《名錄》中危害程度為第三類88國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第二類能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。BSL-3級可通過氣溶膠傳播、能導(dǎo)致嚴重后果或生命危險的內(nèi)源性和外源性病原危險度Ⅲ級（個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預(yù)防和治療措施。管理條例 美國生物安全WHO安全手冊國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第二類能夠引起人類或者動物嚴89病毒:HIV、SARS冠狀病毒、漢坦病毒、乙型腦炎病毒、高致病性禽流感病毒等51類細菌:炭疽芽胞桿菌、鼠疫耶爾森菌、霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌、立克次體屬等10類真菌:

粗球孢子菌、馬皮疽組織胞漿菌、莢膜組織胞漿菌、巴西副球孢子菌4類Prion:

BSE病原等5類《名錄》中危害程度為第二類的微生物舉例病毒:HIV、SARS冠狀病毒、漢坦病毒、乙《名錄》中危害90國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第一類能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

BSL-4級對生命有高度危險的病原或外源性病原，致命，通過氣溶膠而導(dǎo)致實驗室感染，或未知傳播危險的病原危險度Ⅳ級（個體和群體的危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。管理條例 美國生物安全WHO安全手冊國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較第一類能夠引起人類或者動物非91病毒:

埃博拉病毒、馬爾堡病毒新疆出血熱病毒、天花病毒等29類細菌:

無真菌:

無《名錄》中危害程度為第一類的微生物舉例病毒:埃博拉病毒、馬爾堡病毒《名錄》中危害程度為第一類的92

《人間傳染的病原微生物名錄》一、病毒（160類）：一類29類、二類51類三類74類、四類6類二、細菌（155類）：二類10類、三類145類放線菌衣原體支原體立克次體螺旋體三、真菌（59類）：二類4類、三類55類附件：朊粒（6類）：二類5類、三類1類《人間傳染的病原微生物名錄》93

《人間傳染的病原微生物名錄》不僅對病原微生物的危害程度進行了分類，而且還規(guī)定了其不同實驗操作的防護水平以及運輸?shù)陌b要求。《人間傳染的病原微生物名錄》不僅對病原微生物的危害程度94病原菌名稱危害程度分類實驗活動所需生物安全實驗室級別運輸包裝分類學(xué)名中文名大量活菌操作動物感染實驗樣本檢測非感染性材料實驗A/BUN編號Vibriocholerae霍亂弧菌第二類BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1AUN2814Acinetobacterbaumannii鮑氏不動桿菌第三類BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN3373病原菌名稱危害程度分類實驗活動所需生物安全實驗室級別運輸包裝95病原微生物危害程度分類與實驗室防護水平的關(guān)系是相對應(yīng)而非“等同”。在確定所從事特定工作的生物安全水平時，應(yīng)根據(jù)危害評估結(jié)果來進行專業(yè)判斷，而不應(yīng)單純根據(jù)該病原微生物的危害程度分類來機械地確定所需的實驗室生物安全水平?！睹洝妨谐龅奈⑸飳嶒灢僮魇菓?yīng)采取的最低防護水平。注意：病原微生物危害程度分類與實驗室防護水平的關(guān)系是相對應(yīng)而非“等96

二、病原微生物危害評估的基本內(nèi)容（一）一般生物學(xué)特征概述（二）致病性和感染劑量（三）感染途徑及暴露潛在后果（四）微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性（五）被操作微生物的濃度和劑量的影響（六）自然宿主和易感人群（七）實驗動物研究、實驗室感染或醫(yī)院內(nèi)感染信息（八）實驗活動評估（九）重組DNA操作和可能擴大的宿主范圍（十）預(yù)防和治療措施（十一）人員安全狀況評估（十二）評估結(jié)論

二、病原微生物危害評估的基本內(nèi)容（一）一般生物學(xué)特征概述97

(一)一般生物學(xué)特性概述

一般生物學(xué)特性能提供某種特定病原微生物的基本背景信息，有助于對特定病原微生物產(chǎn)生概括性的認識。(一)一般生物學(xué)特性概述

一般生物學(xué)特性能提98包括：

起源：簡要地介紹病原微生物的發(fā)現(xiàn)過程形態(tài)特征：描述病原體的形狀、大小和結(jié)構(gòu)基因組及其編碼產(chǎn)物：描述基因組的類型、長度、編碼產(chǎn)物種類及其功能等培養(yǎng)特性：描述病原體的培養(yǎng)條件、培養(yǎng)細胞或培養(yǎng)基類型、細胞病變特征、菌落特點等包括：

起源：簡要地介紹病原微生物的發(fā)現(xiàn)過程99致病性和感染劑量是評估病原微生物引起感染的輕重程度的重要參考依據(jù)之一；致病性：宿主類型，病原微生物的種、型、株，入侵的部位，體內(nèi)的定位，是否產(chǎn)生特異性毒素等；不同的病原微生物的致病能力不同，決定了他們感染機體的劑量差異。(二)致病性和感染劑量致病性和感染劑量是評估病原微生物引起感染的輕重程度的重要參考100至于多少數(shù)量的病原微生物能夠?qū)е聶C體發(fā)病目前尚沒有統(tǒng)一的數(shù)據(jù)；病原微生物致病性越強，導(dǎo)致發(fā)病的劑量就越低，同一微生物感染劑量越大，其暴露的潛在后果也越嚴重。至于多少數(shù)量的病原微生物能夠?qū)е聶C體發(fā)病目前尚沒有統(tǒng)一的數(shù)據(jù)101致病性主要是闡述病原微生物引發(fā)疾病的過程和發(fā)病機制；感染劑量是給出引起人類或動物模型發(fā)病的劑量范圍或最低閾值。評估報告中：致病性主要是闡述病原微生物引發(fā)疾病的過程和發(fā)病機制；評估報告102(三)感染途徑及暴露的潛在后果感染途徑：自然感染途徑：病原微生物在自然界中傳播的途徑非自然感染途徑：實驗室和醫(yī)院感染的途徑(三)感染途徑及暴露的潛在后果感染途徑：自然感染途徑：病原103自然感染途徑感染途徑：呼吸道、消化道、接觸、血液、蟲媒等；評估報告中明確所從事病原微生物的自然感染途徑種類和方式。經(jīng)呼吸道傳播的病原微生物在實驗室容易通過氣溶膠引起不同的感染性疾病。自然感染途徑感染途徑：呼吸道、消化道、接觸、血液、蟲媒等；104操作所致的非自然途徑感染清除和處理感染性材料時可能導(dǎo)致手污染；微生物操作中釋放的較大粒子和液滴（直徑大于5μm）會迅速沉降到工作臺面和操作者的手上，可以引起經(jīng)消化道、皮膚和眼睛的感染；破損玻璃器皿刺傷，或注射器扎傷可以引起經(jīng)血液的感染；血清樣本采集時可能經(jīng)噴濺和氣溶膠引起呼吸道感染或眼結(jié)膜感染；進行動物實驗時被動物咬傷、抓傷可導(dǎo)致感染。操作所致的非自然途徑感染清除和處理感染性材料時可能導(dǎo)致手污染105暴露的潛在后果暴露以后，后果的輕重取決于病原微生物的致病力和機體的抵抗力。對暴露的潛在后果評估，應(yīng)參考教科書并收集相關(guān)資料，突出個體傳染過程與結(jié)局。

暴露的潛在后果暴露以后，后果的輕重取決于病原微生物的致病力和106個體傳染過程與結(jié)局隱性感染（亞臨床感染）

顯性感染（臨床傳染?。┦欠癯霈F(xiàn)個體嚴重的結(jié)局—致殘、致死是否出現(xiàn)個體間的傳播評估報告中要分析實驗人員暴露后，可能對實驗人員產(chǎn)生的后果，以及可能導(dǎo)致周圍環(huán)境和人群帶來的危害等。個體傳染過程與結(jié)局隱性感染（亞臨床感染）

評估報告中要分析107(四)在環(huán)境中的穩(wěn)定性病原微生物的穩(wěn)定性是指其抵抗外界環(huán)境的存活能力。這種能力直接影響病原微生物的傳染性，特別是通過空氣傳播的病原體。穩(wěn)定性評估:?在自然界中的穩(wěn)定性?對物理因素、化學(xué)消毒劑的敏感性(四)在環(huán)境中的穩(wěn)定性病原微生物的穩(wěn)定性是指其抵抗108(五)被操作病原微生物的濃度和劑量的影響所操作的病原微生物的濃度和劑量與可能產(chǎn)生的危害程度密切相關(guān)；危害評估需要獲得不同的實驗操作、不同的樣本類型所涉及的病原微生物的濃度和劑量，以此來判斷危險性的大小。如果實驗涉及體積較大的樣本或濃度較高的病原微生物制品，則需要提高防護水平。(五)被操作病原微生物的濃度和劑量的影響所操作的病原微生物109(六)自然宿主和易感人群自然宿主是病原微生物在自然界傳播中所涉及的、能夠在體內(nèi)存活的動物或人類。如禽類、豬、馬、海豚及人均是禽流感病毒的自然宿主。評估中應(yīng)確定擬操作病原微生物的自然宿主。易感人群需要指出在人群中的哪一類或幾類人容易感染該病原微生物，如男性、女性或成人、兒童或孕婦等。(六)自然宿主和易感人群自然宿主是病原微生物在自然界傳播中110在某些病原微生物或待檢樣品危害程度相關(guān)背景信息量不足時，應(yīng)從動物研究、實驗室感染或院內(nèi)感染的病例中收集信息：?病人醫(yī)學(xué)資料；?流行病學(xué)資料；?樣品來源地的相關(guān)信息；?動物模型的研究資科。

(七)動物研究、實驗室感染或院內(nèi)感染信息在某些病原微生物或待檢樣品危害程度相關(guān)背景信息量不足111(八)實驗活動危害分析

在操作病原微生物的實驗活動中，許多環(huán)節(jié)可能產(chǎn)生危害。是整個病原微生物危害評估的重要內(nèi)容之一。(八)實驗活動危害分析

在操作病原微生物的實驗活動中，許多112實驗活動指實驗室從事與病原微生物菌(毒)種、樣本有關(guān)的研究、教學(xué)、檢測、診斷等活動。包含對象和類別兩個要素：實驗活動對象—病原微生物菌(毒)種及樣本實驗活動類別—不同風(fēng)險級別的實驗操作實驗活動指實驗室從事與病原微生物菌(毒)種、樣本有關(guān)的研究、113樣本感染性樣本潛在感染性樣本無感染性的樣本

——已知危害生物因子感染性樣品：如一名乙肝患者的血液標本；

——未知危害生物因子感染性樣品：如新發(fā)不明原因傳染病血液標本。樣本感染性樣本——已知危害生物因子感染性樣品114

涉及病毒的實驗活動類別病毒培養(yǎng)動物感染實驗未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作滅活材料的操作無感染性材料的操作涉及病毒的實驗活動類別病毒培養(yǎng)115涉及細菌、真菌的實驗活動類別大量活菌操作動物感染實驗樣本檢測非感染性材料的實驗涉及細菌、真菌的實驗活動類別大量活菌操作116在評估時，要結(jié)合各個實驗室和項目開展實驗活動的范圍和種類，識別不同