動(dòng)物微生物-病毒的增殖和培養(yǎng)課件

病毒的增殖和培養(yǎng)病毒的增殖和培養(yǎng)學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)理解復(fù)制的定義理解病毒復(fù)制的基本過程掌握病毒的人工培養(yǎng)方式及應(yīng)用能力目標(biāo)具備病毒分離培養(yǎng)及利用培養(yǎng)特性進(jìn)行病毒鑒定的理論基礎(chǔ)學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)2主要內(nèi)容病毒的增殖復(fù)制的概念復(fù)制的基本過程病毒的培養(yǎng)動(dòng)物接種禽胚接種組織培養(yǎng)主要內(nèi)容病毒的增殖病毒的培養(yǎng)3重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)病毒復(fù)制的基本過程病毒的人工培養(yǎng)方式難點(diǎn)病毒的復(fù)制過程重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)4病毒的增殖方式─復(fù)制復(fù)制概念是指病毒利用宿主細(xì)胞內(nèi)的原料、能量、酶與場(chǎng)所，來合成病毒的核酸和蛋白質(zhì)，然后裝配成熟并釋放到細(xì)胞外的過程，稱為復(fù)制。病毒的增殖方式─復(fù)制復(fù)制概念5病毒復(fù)制的基本過程吸附穿入脫殼生物合成裝配與釋放病毒復(fù)制的基本過程吸附穿入脫殼生物合成裝配與釋放6吸附靜電吸附非特異吸附可逆與受體結(jié)合病毒與宿主細(xì)胞之間有選擇性和有特殊親和力的特異性吸附不可逆吸附靜電吸附7穿入有囊膜病毒的穿入囊膜與細(xì)胞膜融合吞飲作用無囊膜病毒的穿入

直接穿入

吞飲作用穿入有囊膜病毒的穿入無囊膜病毒的穿入8囊膜與細(xì)胞膜融合囊膜與細(xì)胞膜融合囊膜與細(xì)胞膜融合囊膜與細(xì)胞膜融合9吞飲作用吞飲作用10吞飲作用吞飲作用11形成內(nèi)吞小體吞飲作用H+形成內(nèi)吞小體吞飲作用H+12有囊膜病毒的穿入有囊膜病毒的穿入13穿入（無囊膜病毒）直接穿入穿入（無囊膜病毒）直接穿入14穿入（無囊膜病毒）直接穿入穿入（無囊膜病毒）直接穿入15穿入（無囊膜病毒）吞飲作用H+穿入（無囊膜病毒）吞飲作用H+16脫殼多數(shù)病毒的脫殼與穿入同時(shí)進(jìn)行的。不同病毒的脫殼又各有特色，例如：新城疫病毒經(jīng)溶酶體酶的作用脫殼。痘病毒的脫殼分為兩個(gè)階段進(jìn)行。呼腸孤病毒只脫去外層衣殼，內(nèi)層衣殼不脫去，形成亞病毒顆粒。小RNA病毒在吸附的同時(shí)，就發(fā)生衣殼蛋白消失，即吸附的同時(shí)就發(fā)生了脫殼。脫殼多數(shù)病毒的脫殼與穿入同時(shí)進(jìn)行的。17脫殼脫殼18生物合成生物合成即病毒遺傳信息的控制下合成病毒的各種組成成分。早期:病毒特異性酶的合成病毒核酸復(fù)制病毒結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)合成生物合成生物合成即病毒遺傳信息的控制下合成病毒的各種組成成分19生物合成有囊膜病毒的生物合成無囊膜病毒的生物合成生物合成有囊膜病毒的生物合成無囊膜病毒的生物合成20裝配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的細(xì)胞內(nèi)組裝成新的子代病毒。裝配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的細(xì)胞內(nèi)組裝成新的子代病21成熟與釋放成熟由新合成的病毒成分裝配成完整的病毒。釋放無囊膜的病毒：細(xì)胞完全裂解釋放有囊膜的病毒：出芽釋放成熟與釋放成熟22成熟與釋放有囊膜病毒的釋放囊膜來自于細(xì)胞膜有囊膜病毒的釋放囊膜來自于細(xì)胞核核膜無囊膜病毒的釋放成熟與釋放有囊膜病毒的釋放有囊膜病毒的釋放無囊膜病毒的釋放23塞里基森林病毒的出芽釋放塞里基森林病毒的出芽釋放24HIV的出芽與成熟HIV的出芽與成熟25艾滋病毒的出芽釋放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的出芽釋放艾滋病毒的出芽釋放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的26病毒復(fù)制的過程有囊膜病毒的復(fù)制病毒復(fù)制的過程有囊膜病毒的復(fù)制27病毒的培養(yǎng)方式動(dòng)物接種禽胚接種組織培養(yǎng)病毒的培養(yǎng)方式動(dòng)物接種28動(dòng)物接種動(dòng)物選擇本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最理想的是GF動(dòng)物或SPF動(dòng)物。病毒增殖結(jié)果觀察動(dòng)物死亡、癥狀、病變等。動(dòng)物接種的用途病原學(xué)檢查，傳染病診斷，疫苗生產(chǎn)及疫苗效力檢驗(yàn)等。動(dòng)物接種動(dòng)物選擇29禽胚培養(yǎng)禽胚選擇最好選擇SPF胚病毒增殖結(jié)果觀察常見病變有死亡，充血、出血或出現(xiàn)壞死灶，禽胚畸形，絨毛尿囊膜上出現(xiàn)痘斑。接種途徑禽胚接種的用途家禽傳染病的診斷、病毒病原性的研究以及生產(chǎn)診斷抗原和疫苗等方面。禽胚培養(yǎng)禽胚選擇30禽胚接種途徑絨毛尿囊膜接種10～13日齡雞胚，如傳喉。尿囊腔接種9～12日齡雞胚，如新城疫。卵黃囊接種6～8日齡雞胚，主要用于蟲媒披膜病毒、鸚鵡熱衣原體和立克次氏體等的增殖。羊膜腔接種10～11日齡雞胚，主要用于正粘病毒和副粘病毒。1．氣室2．卵殼3．卵黃囊4．卵白5．尿囊腔6．絨毛尿囊7．胚胎8．羊水腔9．胚外體液膜用的雞胚禽胚接種途徑絨毛尿囊膜接種1．氣室2．卵殼3．卵31組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞選擇增殖結(jié)果觀察優(yōu)缺點(diǎn)應(yīng)用于病毒研究、疫苗生產(chǎn)和病毒病診斷的良好方法組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)32細(xì)胞選擇獸醫(yī)上通常用的細(xì)胞：CEF（雞胚成纖維細(xì)胞）、PK-15株（豬腎上皮細(xì)胞）、K-L株（中國(guó)倉(cāng)鼠肺）、D-K株（中國(guó)倉(cāng)鼠腎）等。細(xì)胞選擇獸醫(yī)上通常用的細(xì)胞：CEF（雞胚成纖維細(xì)胞）、PK-33增殖結(jié)果觀察病毒的致細(xì)胞病變作用（簡(jiǎn)稱CPE），借助倒置顯微鏡即可觀察到。有的細(xì)胞不發(fā)生病變，但培養(yǎng)物出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附及血凝現(xiàn)象（如流感病毒等）。有時(shí)用免疫熒光技術(shù)等血清學(xué)試驗(yàn)檢查細(xì)胞中的病毒。增殖結(jié)果觀察病毒的致細(xì)胞病變作用（簡(jiǎn)稱CPE），借助倒置顯微34組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒優(yōu)缺點(diǎn)組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒優(yōu)點(diǎn)：離體活組織細(xì)胞不受機(jī)體免疫力影響，很多病毒易于生長(zhǎng)。便于人工選擇多種敏感細(xì)胞供病毒生長(zhǎng)。易于觀察病毒的生長(zhǎng)特征。便于收集病毒作進(jìn)一步檢查。細(xì)胞培養(yǎng)病毒缺點(diǎn)成本和技術(shù)水平要求較高，操作復(fù)雜，在基層單位尚未廣泛應(yīng)用。組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒優(yōu)缺點(diǎn)組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒優(yōu)點(diǎn)：35謝謝！謝謝！病毒的增殖和培養(yǎng)病毒的增殖和培養(yǎng)學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)理解復(fù)制的定義理解病毒復(fù)制的基本過程掌握病毒的人工培養(yǎng)方式及應(yīng)用能力目標(biāo)具備病毒分離培養(yǎng)及利用培養(yǎng)特性進(jìn)行病毒鑒定的理論基礎(chǔ)學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)38主要內(nèi)容病毒的增殖復(fù)制的概念復(fù)制的基本過程病毒的培養(yǎng)動(dòng)物接種禽胚接種組織培養(yǎng)主要內(nèi)容病毒的增殖病毒的培養(yǎng)39重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)病毒復(fù)制的基本過程病毒的人工培養(yǎng)方式難點(diǎn)病毒的復(fù)制過程重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)40病毒的增殖方式─復(fù)制復(fù)制概念是指病毒利用宿主細(xì)胞內(nèi)的原料、能量、酶與場(chǎng)所，來合成病毒的核酸和蛋白質(zhì)，然后裝配成熟并釋放到細(xì)胞外的過程，稱為復(fù)制。病毒的增殖方式─復(fù)制復(fù)制概念41病毒復(fù)制的基本過程吸附穿入脫殼生物合成裝配與釋放病毒復(fù)制的基本過程吸附穿入脫殼生物合成裝配與釋放42吸附靜電吸附非特異吸附可逆與受體結(jié)合病毒與宿主細(xì)胞之間有選擇性和有特殊親和力的特異性吸附不可逆吸附靜電吸附43穿入有囊膜病毒的穿入囊膜與細(xì)胞膜融合吞飲作用無囊膜病毒的穿入

直接穿入

吞飲作用穿入有囊膜病毒的穿入無囊膜病毒的穿入44囊膜與細(xì)胞膜融合囊膜與細(xì)胞膜融合囊膜與細(xì)胞膜融合囊膜與細(xì)胞膜融合45吞飲作用吞飲作用46吞飲作用吞飲作用47形成內(nèi)吞小體吞飲作用H+形成內(nèi)吞小體吞飲作用H+48有囊膜病毒的穿入有囊膜病毒的穿入49穿入（無囊膜病毒）直接穿入穿入（無囊膜病毒）直接穿入50穿入（無囊膜病毒）直接穿入穿入（無囊膜病毒）直接穿入51穿入（無囊膜病毒）吞飲作用H+穿入（無囊膜病毒）吞飲作用H+52脫殼多數(shù)病毒的脫殼與穿入同時(shí)進(jìn)行的。不同病毒的脫殼又各有特色，例如：新城疫病毒經(jīng)溶酶體酶的作用脫殼。痘病毒的脫殼分為兩個(gè)階段進(jìn)行。呼腸孤病毒只脫去外層衣殼，內(nèi)層衣殼不脫去，形成亞病毒顆粒。小RNA病毒在吸附的同時(shí)，就發(fā)生衣殼蛋白消失，即吸附的同時(shí)就發(fā)生了脫殼。脫殼多數(shù)病毒的脫殼與穿入同時(shí)進(jìn)行的。53脫殼脫殼54生物合成生物合成即病毒遺傳信息的控制下合成病毒的各種組成成分。早期:病毒特異性酶的合成病毒核酸復(fù)制病毒結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)合成生物合成生物合成即病毒遺傳信息的控制下合成病毒的各種組成成分55生物合成有囊膜病毒的生物合成無囊膜病毒的生物合成生物合成有囊膜病毒的生物合成無囊膜病毒的生物合成56裝配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的細(xì)胞內(nèi)組裝成新的子代病毒。裝配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的細(xì)胞內(nèi)組裝成新的子代病57成熟與釋放成熟由新合成的病毒成分裝配成完整的病毒。釋放無囊膜的病毒：細(xì)胞完全裂解釋放有囊膜的病毒：出芽釋放成熟與釋放成熟58成熟與釋放有囊膜病毒的釋放囊膜來自于細(xì)胞膜有囊膜病毒的釋放囊膜來自于細(xì)胞核核膜無囊膜病毒的釋放成熟與釋放有囊膜病毒的釋放有囊膜病毒的釋放無囊膜病毒的釋放59塞里基森林病毒的出芽釋放塞里基森林病毒的出芽釋放60HIV的出芽與成熟HIV的出芽與成熟61艾滋病毒的出芽釋放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的出芽釋放艾滋病毒的出芽釋放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的62病毒復(fù)制的過程有囊膜病毒的復(fù)制病毒復(fù)制的過程有囊膜病毒的復(fù)制63病毒的培養(yǎng)方式動(dòng)物接種禽胚接種組織培養(yǎng)病毒的培養(yǎng)方式動(dòng)物接種64動(dòng)物接種動(dòng)物選擇本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最理想的是GF動(dòng)物或SPF動(dòng)物。病毒增殖結(jié)果觀察動(dòng)物死亡、癥狀、病變等。動(dòng)物接種的用途病原學(xué)檢查，傳染病診斷，疫苗生產(chǎn)及疫苗效力檢驗(yàn)等。動(dòng)物接種動(dòng)物選擇65禽胚培養(yǎng)禽胚選擇最好選擇SPF胚病毒增殖結(jié)果觀察常見病變有死亡，充血、出血或出現(xiàn)壞死灶，禽胚畸形，絨毛尿囊膜上出現(xiàn)痘斑。接種途徑禽胚接種的用途家禽傳染病的診斷、病毒病原性的研究以及生產(chǎn)診斷抗原和疫苗等方面。禽胚培養(yǎng)禽胚選擇66禽胚接種途徑絨毛尿囊膜接種10～13日齡雞胚，如傳喉。尿囊腔接種9～12日齡雞胚，如新城疫。卵黃囊接種6～8日齡雞胚，主要用于蟲媒披膜病毒、鸚鵡熱衣原體和立克次氏體等的增殖。羊膜腔接種10～11日齡雞胚，主要用于正粘病毒和副粘病毒。1．氣室2．卵殼3．卵黃囊4．卵白5．尿囊腔6．絨毛尿囊7．胚胎8．羊水腔9．胚外體液膜用的雞胚禽胚接種途徑絨毛尿囊膜接種1．氣室2．卵殼3．卵67組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞選擇增殖結(jié)果觀察優(yōu)缺點(diǎn)應(yīng)用于病毒研究、疫苗生產(chǎn)和病毒病診斷的良好方法組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)68細(xì)胞選擇獸醫(yī)上通常用的細(xì)胞：CEF（雞胚成纖維細(xì)胞）、PK-15株（豬腎上皮細(xì)胞）、K-L株（中國(guó)倉(cāng)鼠肺）、D-K株（中國(guó)倉(cāng)鼠腎）等。細(xì)胞選擇獸醫(yī)上通常用的細(xì)胞：CEF（雞胚成纖維細(xì)胞）、PK-69增殖結(jié)果觀察病毒的致細(xì)胞病變作用（簡(jiǎn)稱CPE），借助倒置顯微鏡即可觀察到。有的細(xì)胞不發(fā)生病變，但培養(yǎng)物出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附及血凝現(xiàn)象