再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌課件

內(nèi)容提要結(jié)核病發(fā)病情況1結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法234夾層杯診斷技術(shù)應(yīng)用夾層杯檢驗(yàn)技術(shù)的意義5湘雅醫(yī)院應(yīng)用情況介紹內(nèi)容提要結(jié)核病發(fā)病情況1結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法234夾結(jié)核感染情況全世界1／3的人口感染或曾經(jīng)感染過結(jié)核全球每年新發(fā)病例800－1000萬,死亡超過300萬。我國(guó)屬結(jié)核病高發(fā)病率國(guó)家之一,患者數(shù)僅次于印度，居世界第二位。結(jié)核病仍然是世界衛(wèi)生組織(WHO)和我國(guó)重點(diǎn)防治的重大傳染性疾病。結(jié)核感染情況全世界1／3的人口感染或曾經(jīng)感染過結(jié)核

中國(guó)結(jié)核病感染特點(diǎn)低遞降率病例發(fā)現(xiàn)率低高感染率及患病率高耐藥率高死亡率中國(guó)結(jié)核感染的特點(diǎn)中國(guó)結(jié)核病感染特點(diǎn)低遞降率病例發(fā)高感染率高耐藥率高死亡率中結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法

細(xì)菌學(xué)檢查是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和手段，是確定結(jié)核病診斷和治療、評(píng)價(jià)治療效果的可靠標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法細(xì)菌學(xué)檢查是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和實(shí)驗(yàn)室診斷培養(yǎng)法免疫學(xué)方法噬菌體法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法分子生物學(xué)方法液體培養(yǎng)系統(tǒng)（自動(dòng)化）涂片法最基本的檢查方法實(shí)驗(yàn)室診斷培養(yǎng)法免疫學(xué)方法噬菌體法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法分子生物學(xué)方噬菌體方法分枝桿菌的噬菌體在研究中應(yīng)用已有多年的歷史。近年來利用分枝桿菌噬菌體能特異性地感染分枝桿菌的特性,開發(fā)成結(jié)核菌臨床檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)臨床標(biāo)本中是否含有結(jié)核菌活菌,且該技術(shù)快速、簡(jiǎn)便,將是否含有結(jié)核菌活菌的檢出時(shí)間縮短為48h。這是一項(xiàng)很有希望用于流行病學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的細(xì)菌學(xué)新技術(shù)。噬菌體方法分枝桿菌的噬菌體在研究中應(yīng)用已有多年的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法或稱結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)。是檢測(cè)抗原刺激后產(chǎn)生細(xì)胞因子—主要指γ-IFN的外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù),根據(jù)斑點(diǎn)的數(shù)量來確定細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的情況,從單細(xì)胞水平評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫功能,從而判斷結(jié)核分枝桿菌感染的情況。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法或稱結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌課件再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌課件液體培養(yǎng)系統(tǒng)是將一種O2敏感的熒光釕復(fù)合物加入分枝桿菌生長(zhǎng)指示管(MGIT)液體培養(yǎng)基中作為生長(zhǎng)指試劑,試管底部的熒光復(fù)合物與氧氣結(jié)合時(shí)處于淬滅狀態(tài),結(jié)核菌生長(zhǎng)時(shí),氧氣逐漸減少,熒光復(fù)合物就發(fā)出熒光而被檢測(cè)到。自動(dòng)化的MGIT還可加入臨界濃度的抗結(jié)核藥物進(jìn)行藥敏分析。該方法操作簡(jiǎn)便，陽性標(biāo)本檢出時(shí)間平均為9天。但價(jià)格昂貴。液體培養(yǎng)系統(tǒng)是將一種O2敏感的熒光釕復(fù)合物加入分枝桿涂片法的優(yōu)缺點(diǎn)包括：直接涂片法、厚涂法、離心濃縮集菌法、漂浮集菌法等優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行,成本低廉,準(zhǔn)確性較高缺點(diǎn)：陽性率低，效果不理想。涂片法的優(yōu)缺點(diǎn)包括：直接涂片法、厚涂法、離心濃縮集菌法、漂浮夾層杯檢測(cè)技術(shù)夾層杯液基抗酸桿菌集菌制片檢測(cè)技術(shù)沉降式夾層杯法濾過式夾層杯法夾層杯檢測(cè)技術(shù)夾層杯液基抗酸桿菌集菌制片檢測(cè)技術(shù)沉降式夾層杯

沉降式夾層杯法

運(yùn)用夾層杯技術(shù)，通過標(biāo)本消化液消化后，選擇有效成分離心附著于透明高分子薄片上，經(jīng)過自動(dòng)或手工染色，將完成染色的薄片用取片針取出，人工或計(jì)算機(jī)輔助閱片。檢測(cè)原理

沉降式夾層杯法

運(yùn)用夾層杯技術(shù)，通過標(biāo)本消化液檢測(cè)檢測(cè)流程示意圖檢測(cè)流程示意圖主要設(shè)備及相關(guān)材料主要設(shè)備及相關(guān)材料再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌課件

濾過式夾層杯法

經(jīng)過消化后的標(biāo)本通過濾過式夾層杯過濾，將抗酸桿菌阻攔在納米硅介質(zhì)微孔濾膜膜片上，直接染色。取出膜片置于滴有光媒介液體的閱片夾中可以直接通過普通顯微鏡進(jìn)行觀察。檢測(cè)原理

濾過式夾層杯法

檢測(cè)原理檢測(cè)流程示意圖檢測(cè)流程示意圖主要設(shè)備及相關(guān)材料主要設(shè)備及相關(guān)材料夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)陽性率高背景清晰，易于觀察易于標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)速度快生物安全性好夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)陽性率高背景清晰，易于觀察易于標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)陽性率高

液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)在標(biāo)本中加入消化液,有助于降解標(biāo)本中的蛋白成分,使標(biāo)本中的結(jié)核菌分散出來，且所用的標(biāo)本量明顯大于直接涂片法，故大大提高了陽性率。陽性率高液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)在標(biāo)本中背景清晰，易于觀察

由于蛋白分解,避免蛋白成分的聚集,從而抗酸桿菌分布均勻,而且染色后背景清晰,很容易觀察到抗酸桿菌的存在。背景清晰，易于觀察由于蛋白分解,避免蛋白成分的聚集,易于標(biāo)準(zhǔn)化

夾層杯診斷技術(shù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程均可執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)化:標(biāo)本體積定量;標(biāo)本收集保存條件可控制;染色溫度、時(shí)間可控制;夾層片的面積是固定的,通過離心后細(xì)菌均勻沉積在夾層片上,油鏡每個(gè)視野的實(shí)際面積也是可以計(jì)算的。通過計(jì)算機(jī)處理后,可準(zhǔn)確計(jì)算每毫升痰液中抗酸桿菌量。易于標(biāo)準(zhǔn)化夾層杯診斷技術(shù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程均可執(zhí)行標(biāo)檢測(cè)速度快液基結(jié)核菌集菌制片技術(shù),單臺(tái)TQ-12離心涂片機(jī),單人每日可完成100例標(biāo)本制片,閱片。而濾過式夾層杯的檢測(cè)速度更快捷，十分鐘就可檢測(cè)5份標(biāo)本。檢測(cè)速度快生物安全性好

整個(gè)操作均在容器中進(jìn)行，并且進(jìn)行了滅活處理，安全性很高。標(biāo)本經(jīng)樹膠封存于載玻片上,顯微鏡無須與含菌面接觸,檢驗(yàn)人員降低了實(shí)驗(yàn)室感染風(fēng)險(xiǎn)。生物安全性好應(yīng)用夾層杯檢驗(yàn)技術(shù)的意義1解決結(jié)核桿菌痰檢長(zhǎng)期存在的技術(shù)問題2更好的社會(huì)效益35檢驗(yàn)科新的效益增長(zhǎng)點(diǎn)新的科研手段14細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)方法應(yīng)用夾層杯檢驗(yàn)技術(shù)的意義1解決結(jié)核桿菌痰檢長(zhǎng)期存在的技術(shù)問題解決抗酸桿菌痰檢長(zhǎng)期

存在的技術(shù)問題存在的問題陽性率偏低安全性標(biāo)準(zhǔn)化其它類型標(biāo)本工作效率其它微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目解決抗酸桿菌痰檢長(zhǎng)期

存在的技術(shù)問題存在的陽性率偏低安全性標(biāo)

陽性率偏低問題

痰標(biāo)本抗酸桿菌檢出率低，這是長(zhǎng)期困擾檢驗(yàn)科的難題，在各級(jí)醫(yī)院都存在臨床明確診斷而實(shí)驗(yàn)室查不到抗酸桿菌的情況，一些不理解情況的醫(yī)師甚至?xí)岩蓹z驗(yàn)科的技術(shù)水平，提高應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)這個(gè)問題肯定會(huì)得到明顯改善。

陽性率偏低問題

痰標(biāo)本抗酸桿菌檢出率低，這是長(zhǎng)期困擾安全性問題實(shí)驗(yàn)室生物安全是檢驗(yàn)科工作的重要環(huán)節(jié)，夾層杯法液基結(jié)核桿菌檢驗(yàn)從技術(shù)角度解決了這個(gè)難題。首先采用完全密閉的容器進(jìn)行離心，避免了氣溶膠的形成，再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌。安全性問題實(shí)驗(yàn)室生物安全是檢驗(yàn)科工作的重要標(biāo)準(zhǔn)化問題傳統(tǒng)的痰檢方法要做到標(biāo)準(zhǔn)化從技術(shù)角度很難實(shí)現(xiàn)，主要依靠經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行工作，夾層杯痰檢技術(shù)的整個(gè)操作和流程可以通過時(shí)間、溫度、標(biāo)本量等技術(shù)參數(shù)進(jìn)行量化，因此這項(xiàng)技術(shù)很有希望成為結(jié)核桿菌痰檢的標(biāo)準(zhǔn)方法。標(biāo)準(zhǔn)化問題傳統(tǒng)的痰檢方法要做到標(biāo)準(zhǔn)化從技術(shù)提高了工作效率

從操作上看，夾層杯法在時(shí)間和程序上看好像復(fù)雜了很多，其實(shí)從整個(gè)抗酸桿菌檢驗(yàn)角度看提高了工作效率。首先標(biāo)本可以批量操作，再有由于通過強(qiáng)消化液和離心的處理后，細(xì)菌的高度集中可以大大節(jié)省閱片時(shí)間，一些老方法要用幾分鐘才能看到細(xì)菌的標(biāo)本用本法可能很短的時(shí)間就看到了。提高了工作效率從操作上看，夾層杯法在時(shí)間和程其它標(biāo)本結(jié)核桿菌檢驗(yàn)問題

在臨床上經(jīng)常會(huì)遇到各種體液標(biāo)本查找抗酸桿菌的情況，檢驗(yàn)科工作人員經(jīng)常感到頭痛，因?yàn)橘M(fèi)了很多周折往往找不到細(xì)菌，用夾層杯法集菌查找即快捷又可以明顯提高陽性率。其它標(biāo)本結(jié)核桿菌檢驗(yàn)問題在臨床上經(jīng)常會(huì)遇到各種體液標(biāo)其它微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目的開展

腦脊液新型隱球菌檢查；分泌物中淋病雙球菌檢查；各種皮膚真菌檢驗(yàn)；組織懸液的細(xì)菌學(xué)檢查。其它微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目的開展腦脊液新型隱球菌檢查；更好的社會(huì)效益早日發(fā)現(xiàn)并確診結(jié)核病患者是結(jié)核病防治的最有效方式，研究數(shù)據(jù)表明，目前有70％的結(jié)核病患者并不能夠在初次檢查時(shí)查到結(jié)核桿菌，不良的生活習(xí)慣如隨地吐痰加重了結(jié)核病的流行。盡早發(fā)現(xiàn)結(jié)核病感染者是檢驗(yàn)科的責(zé)任，因此從痰檢中更早發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌對(duì)結(jié)核病防治意義重大。更好的社會(huì)效益早日發(fā)現(xiàn)并確診結(jié)核病患者是結(jié)核病防治的最有效方新的科研手段

流行病學(xué)調(diào)查

動(dòng)物模型檢查手段新的細(xì)菌培養(yǎng)模式

新的藥敏實(shí)驗(yàn)方法自動(dòng)化痰檢技術(shù)新的科研手段動(dòng)新新自細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)方法婦科宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查；痰液細(xì)胞學(xué)檢查；胸腹水腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查；尿液細(xì)胞學(xué)檢查等。細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)方法婦科宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查；檢驗(yàn)科新的效益增長(zhǎng)點(diǎn)

全套設(shè)備投資較少，湖南省的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)三級(jí)醫(yī)院是50元/次，一般情況只要完成1200例檢查就可以收回儀器投資。檢驗(yàn)科新的效益增長(zhǎng)點(diǎn)湘雅醫(yī)院臨床應(yīng)用情況臨床研究應(yīng)用情況湘雅醫(yī)院臨床應(yīng)用情況臨床研究應(yīng)用臨床研究

留取152例臨床標(biāo)本(100例痰標(biāo)本、23例支氣管分泌物標(biāo)本、7例腦脊液標(biāo)本、22例穿刺液標(biāo)本)均來自本院住院、門診及急診患者,標(biāo)本選取方式為根據(jù)醫(yī)囑留取,每例標(biāo)本同時(shí)采用液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)和直接涂片染色法平行處理,并將其結(jié)果進(jìn)行比較分析。臨床研究留取152例臨床標(biāo)本(100例痰標(biāo)本、23至少觀察100個(gè)視野,未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌者應(yīng)繼續(xù)觀察300個(gè)視野每300個(gè)視野0條為(-)每300個(gè)視野1-8條時(shí)應(yīng)直接報(bào)告所查到的抗酸桿菌條數(shù)每100個(gè)視野3-9條為(+)每10個(gè)視野1-9條為(++)每個(gè)視野1-9條為(+++)每個(gè)視野≥10條為(++++)判斷結(jié)果方法至少觀察100個(gè)視野,未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌者應(yīng)繼續(xù)觀察300個(gè)視野結(jié)果

表1液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)與直接涂片染色法檢測(cè)結(jié)果比較

液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)

直接涂片染色法陽性(例數(shù))陰性(例數(shù))合計(jì)

陽性(例數(shù))10(6.58%)010(6.58%)陰性(例數(shù))14(9.21%)128142合計(jì)24(15.79%)128152

注:直接涂片染色法:陽性率=6.58%液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù):陽性率=15.79%.其檢測(cè)陽性率明顯提高(X2=50.51,p<0.01)。結(jié)果表1液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)與直接涂片染表2液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)與直接涂片染色法檢出菌量的比較

菌量直接涂片(例數(shù))液基集菌制片技術(shù)(例數(shù))合計(jì)

-14014+10919++044+++033++++088合計(jì)242448注:液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)與直接涂片染色法相比檢出菌量明顯增多(u=2.1467,p<0.05)表2液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)與直接涂片染色法檢出菌量的比鏡下比較痰涂片鏡檢法夾層杯集菌法

鏡下比較痰涂片鏡檢法夾層杯集菌法應(yīng)用情況

湘雅醫(yī)院微生物實(shí)驗(yàn)室自2010年7月1日搬遷新院至今：共檢測(cè)臨床標(biāo)本7050例，陽性標(biāo)本共225例，陽性率為3.19%。包括4例膿汁、3例穿刺液、2例胃液、1例腦脊液、1例大便、1例胸水標(biāo)本，其余為呼吸道標(biāo)本。應(yīng)用情況湘雅醫(yī)院微生物實(shí)驗(yàn)室自2010年7月1夾層杯診斷技術(shù)所獲榮譽(yù)15項(xiàng)國(guó)家專利3項(xiàng)國(guó)際專利榮登“十一五國(guó)家重大科技成就展技術(shù)應(yīng)用后合作單位及應(yīng)用單位發(fā)表論文18篇夾層杯診斷技術(shù)所獲榮譽(yù)Thankyouforyourattention!Thankyoufor內(nèi)容提要結(jié)核病發(fā)病情況1結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法234夾層杯診斷技術(shù)應(yīng)用夾層杯檢驗(yàn)技術(shù)的意義5湘雅醫(yī)院應(yīng)用情況介紹內(nèi)容提要結(jié)核病發(fā)病情況1結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法234夾結(jié)核感染情況全世界1／3的人口感染或曾經(jīng)感染過結(jié)核全球每年新發(fā)病例800－1000萬,死亡超過300萬。我國(guó)屬結(jié)核病高發(fā)病率國(guó)家之一,患者數(shù)僅次于印度，居世界第二位。結(jié)核病仍然是世界衛(wèi)生組織(WHO)和我國(guó)重點(diǎn)防治的重大傳染性疾病。結(jié)核感染情況全世界1／3的人口感染或曾經(jīng)感染過結(jié)核

中國(guó)結(jié)核病感染特點(diǎn)低遞降率病例發(fā)現(xiàn)率低高感染率及患病率高耐藥率高死亡率中國(guó)結(jié)核感染的特點(diǎn)中國(guó)結(jié)核病感染特點(diǎn)低遞降率病例發(fā)高感染率高耐藥率高死亡率中結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法

細(xì)菌學(xué)檢查是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和手段，是確定結(jié)核病診斷和治療、評(píng)價(jià)治療效果的可靠標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法細(xì)菌學(xué)檢查是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和實(shí)驗(yàn)室診斷培養(yǎng)法免疫學(xué)方法噬菌體法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法分子生物學(xué)方法液體培養(yǎng)系統(tǒng)（自動(dòng)化）涂片法最基本的檢查方法實(shí)驗(yàn)室診斷培養(yǎng)法免疫學(xué)方法噬菌體法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法分子生物學(xué)方噬菌體方法分枝桿菌的噬菌體在研究中應(yīng)用已有多年的歷史。近年來利用分枝桿菌噬菌體能特異性地感染分枝桿菌的特性,開發(fā)成結(jié)核菌臨床檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)臨床標(biāo)本中是否含有結(jié)核菌活菌,且該技術(shù)快速、簡(jiǎn)便,將是否含有結(jié)核菌活菌的檢出時(shí)間縮短為48h。這是一項(xiàng)很有希望用于流行病學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的細(xì)菌學(xué)新技術(shù)。噬菌體方法分枝桿菌的噬菌體在研究中應(yīng)用已有多年的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法或稱結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)。是檢測(cè)抗原刺激后產(chǎn)生細(xì)胞因子—主要指γ-IFN的外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù),根據(jù)斑點(diǎn)的數(shù)量來確定細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的情況,從單細(xì)胞水平評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫功能,從而判斷結(jié)核分枝桿菌感染的情況。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法或稱結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌課件再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌課件液體培養(yǎng)系統(tǒng)是將一種O2敏感的熒光釕復(fù)合物加入分枝桿菌生長(zhǎng)指示管(MGIT)液體培養(yǎng)基中作為生長(zhǎng)指試劑,試管底部的熒光復(fù)合物與氧氣結(jié)合時(shí)處于淬滅狀態(tài),結(jié)核菌生長(zhǎng)時(shí),氧氣逐漸減少,熒光復(fù)合物就發(fā)出熒光而被檢測(cè)到。自動(dòng)化的MGIT還可加入臨界濃度的抗結(jié)核藥物進(jìn)行藥敏分析。該方法操作簡(jiǎn)便，陽性標(biāo)本檢出時(shí)間平均為9天。但價(jià)格昂貴。液體培養(yǎng)系統(tǒng)是將一種O2敏感的熒光釕復(fù)合物加入分枝桿涂片法的優(yōu)缺點(diǎn)包括：直接涂片法、厚涂法、離心濃縮集菌法、漂浮集菌法等優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行,成本低廉,準(zhǔn)確性較高缺點(diǎn)：陽性率低，效果不理想。涂片法的優(yōu)缺點(diǎn)包括：直接涂片法、厚涂法、離心濃縮集菌法、漂浮夾層杯檢測(cè)技術(shù)夾層杯液基抗酸桿菌集菌制片檢測(cè)技術(shù)沉降式夾層杯法濾過式夾層杯法夾層杯檢測(cè)技術(shù)夾層杯液基抗酸桿菌集菌制片檢測(cè)技術(shù)沉降式夾層杯

沉降式夾層杯法

運(yùn)用夾層杯技術(shù)，通過標(biāo)本消化液消化后，選擇有效成分離心附著于透明高分子薄片上，經(jīng)過自動(dòng)或手工染色，將完成染色的薄片用取片針取出，人工或計(jì)算機(jī)輔助閱片。檢測(cè)原理

沉降式夾層杯法

運(yùn)用夾層杯技術(shù)，通過標(biāo)本消化液檢測(cè)檢測(cè)流程示意圖檢測(cè)流程示意圖主要設(shè)備及相關(guān)材料主要設(shè)備及相關(guān)材料再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌課件

濾過式夾層杯法

經(jīng)過消化后的標(biāo)本通過濾過式夾層杯過濾，將抗酸桿菌阻攔在納米硅介質(zhì)微孔濾膜膜片上，直接染色。取出膜片置于滴有光媒介液體的閱片夾中可以直接通過普通顯微鏡進(jìn)行觀察。檢測(cè)原理

濾過式夾層杯法

檢測(cè)原理檢測(cè)流程示意圖檢測(cè)流程示意圖主要設(shè)備及相關(guān)材料主要設(shè)備及相關(guān)材料夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)陽性率高背景清晰，易于觀察易于標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)速度快生物安全性好夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)陽性率高背景清晰，易于觀察易于標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)陽性率高

液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)在標(biāo)本中加入消化液,有助于降解標(biāo)本中的蛋白成分,使標(biāo)本中的結(jié)核菌分散出來，且所用的標(biāo)本量明顯大于直接涂片法，故大大提高了陽性率。陽性率高液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)在標(biāo)本中背景清晰，易于觀察

由于蛋白分解,避免蛋白成分的聚集,從而抗酸桿菌分布均勻,而且染色后背景清晰,很容易觀察到抗酸桿菌的存在。背景清晰，易于觀察由于蛋白分解,避免蛋白成分的聚集,易于標(biāo)準(zhǔn)化

夾層杯診斷技術(shù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程均可執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)化:標(biāo)本體積定量;標(biāo)本收集保存條件可控制;染色溫度、時(shí)間可控制;夾層片的面積是固定的,通過離心后細(xì)菌均勻沉積在夾層片上,油鏡每個(gè)視野的實(shí)際面積也是可以計(jì)算的。通過計(jì)算機(jī)處理后,可準(zhǔn)確計(jì)算每毫升痰液中抗酸桿菌量。易于標(biāo)準(zhǔn)化夾層杯診斷技術(shù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程均可執(zhí)行標(biāo)檢測(cè)速度快液基結(jié)核菌集菌制片技術(shù),單臺(tái)TQ-12離心涂片機(jī),單人每日可完成100例標(biāo)本制片,閱片。而濾過式夾層杯的檢測(cè)速度更快捷，十分鐘就可檢測(cè)5份標(biāo)本。檢測(cè)速度快生物安全性好

整個(gè)操作均在容器中進(jìn)行，并且進(jìn)行了滅活處理，安全性很高。標(biāo)本經(jīng)樹膠封存于載玻片上,顯微鏡無須與含菌面接觸,檢驗(yàn)人員降低了實(shí)驗(yàn)室感染風(fēng)險(xiǎn)。生物安全性好應(yīng)用夾層杯檢驗(yàn)技術(shù)的意義1解決結(jié)核桿菌痰檢長(zhǎng)期存在的技術(shù)問題2更好的社會(huì)效益35檢驗(yàn)科新的效益增長(zhǎng)點(diǎn)新的科研手段14細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)方法應(yīng)用夾層杯檢驗(yàn)技術(shù)的意義1解決結(jié)核桿菌痰檢長(zhǎng)期存在的技術(shù)問題解決抗酸桿菌痰檢長(zhǎng)期

存在的技術(shù)問題存在的問題陽性率偏低安全性標(biāo)準(zhǔn)化其它類型標(biāo)本工作效率其它微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目解決抗酸桿菌痰檢長(zhǎng)期

存在的技術(shù)問題存在的陽性率偏低安全性標(biāo)

陽性率偏低問題

痰標(biāo)本抗酸桿菌檢出率低，這是長(zhǎng)期困擾檢驗(yàn)科的難題，在各級(jí)醫(yī)院都存在臨床明確診斷而實(shí)驗(yàn)室查不到抗酸桿菌的情況，一些不理解情況的醫(yī)師甚至?xí)岩蓹z驗(yàn)科的技術(shù)水平，提高應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)這個(gè)問題肯定會(huì)得到明顯改善。

陽性率偏低問題

痰標(biāo)本抗酸桿菌檢出率低，這是長(zhǎng)期困擾安全性問題實(shí)驗(yàn)室生物安全是檢驗(yàn)科工作的重要環(huán)節(jié)，夾層杯法液基結(jié)核桿菌檢驗(yàn)從技術(shù)角度解決了這個(gè)難題。首先采用完全密閉的容器進(jìn)行離心，避免了氣溶膠的形成，再有通過強(qiáng)滅活消化液配合加溫徹底殺滅結(jié)核桿菌。安全性問題實(shí)驗(yàn)室生物安全是檢驗(yàn)科工作的重要標(biāo)準(zhǔn)化問題傳統(tǒng)的痰檢方法要做到標(biāo)準(zhǔn)化從技術(shù)角度很難實(shí)現(xiàn)，主要依靠經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行工作，夾層杯痰檢技術(shù)的整個(gè)操作和流程可以通過時(shí)間、溫度、標(biāo)本量等技術(shù)參數(shù)進(jìn)行量化，因此這項(xiàng)技術(shù)很有希望成為結(jié)核桿菌痰檢的標(biāo)準(zhǔn)方法。標(biāo)準(zhǔn)化問題傳統(tǒng)的痰檢方法要做到標(biāo)準(zhǔn)化從技術(shù)提高了工作效率

從操作上看，夾層杯法在時(shí)間和程序上看好像復(fù)雜了很多，其實(shí)從整個(gè)抗酸桿菌檢驗(yàn)角度看提高了工作效率。首先標(biāo)本可以批量操作，再有由于通過強(qiáng)消化液和離心的處理后，細(xì)菌的高度集中可以大大節(jié)省閱片時(shí)間，一些老方法要用幾分鐘才能看到細(xì)菌的標(biāo)本用本法可能很短的時(shí)間就看到了。提高了工作效率從操作上看，夾層杯法在時(shí)間和程其它標(biāo)本結(jié)核桿菌檢驗(yàn)問題

在臨床上經(jīng)常會(huì)遇到各種體液標(biāo)本查找抗酸桿菌的情況，檢驗(yàn)科工作人員經(jīng)常感到頭痛，因?yàn)橘M(fèi)了很多周折往往找不到細(xì)菌，用夾層杯法集菌查找即快捷又可以明顯提高陽性率。其它標(biāo)本結(jié)核桿菌檢驗(yàn)問題在臨床上經(jīng)常會(huì)遇到各種體液標(biāo)其它微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目的開展

腦脊液新型隱球菌檢查；分泌物中淋病雙球菌檢查；各種皮膚真菌檢驗(yàn)；組織懸液的細(xì)菌學(xué)檢查。其它微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目的開展腦脊液新型隱球菌檢查；更好的社會(huì)效益早日發(fā)現(xiàn)并確診結(jié)核病患者是結(jié)核病防治的最有效方式，研究數(shù)據(jù)表明，目前有70％的結(jié)核病患者并不能夠在初次檢查時(shí)查到結(jié)核桿菌，不良的生活習(xí)慣如隨地吐痰加重了結(jié)核病的流行。盡早發(fā)現(xiàn)結(jié)核病感染者是檢驗(yàn)科的責(zé)任，因此從痰檢中更早發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌對(duì)結(jié)核病防治意義重大。更好的社會(huì)效益早日發(fā)現(xiàn)并確診結(jié)核病患者是結(jié)核病防治的最有效方新的科研手段

流行病學(xué)調(diào)查

動(dòng)物模型檢查手段新的細(xì)菌培養(yǎng)模式

新的藥敏實(shí)驗(yàn)方法自動(dòng)化痰檢技術(shù)新的科研手段動(dòng)新新自細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)方法婦科宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查；痰液細(xì)胞學(xué)檢查；胸腹水腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查；尿液細(xì)胞學(xué)檢查等。細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)方法婦科宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查；檢驗(yàn)科新的效益增長(zhǎng)點(diǎn)

全套設(shè)備投資較少，湖南省的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)三級(jí)醫(yī)院是50元/次，一般情況只要完成1200例檢查就可以收回儀器投資。檢驗(yàn)科新的效益增長(zhǎng)點(diǎn)湘雅醫(yī)院臨床應(yīng)用情況臨床研究應(yīng)用情況湘雅醫(yī)院臨床應(yīng)用情況臨床研究應(yīng)用臨床研究

留取152例臨床標(biāo)本(100例痰標(biāo)本、23例支氣管分泌物標(biāo)本、7例腦脊液標(biāo)本、22例穿刺液標(biāo)本)均來自本院住院、門診及急診患者,標(biāo)本選取方式為根據(jù)醫(yī)囑留取,每例標(biāo)本同時(shí)采用液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)和直接涂片染色法平行處理,并將其結(jié)果進(jìn)行比較分析。臨床研究留取152例臨床標(biāo)本(100例痰標(biāo)本、23至少觀察100個(gè)視野,未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌者應(yīng)繼續(xù)觀察300個(gè)視野每300個(gè)視野0條為(-)每300個(gè)視野1-8條時(shí)應(yīng)直接報(bào)告所查到的抗酸桿菌條數(shù)每100個(gè)視野3-9條為(+)每10個(gè)視野1-9條為(++)每個(gè)視野1-9條為(+++)每個(gè)視野≥10條為(++++)判斷結(jié)果方法至少觀察100個(gè)視野,未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌者應(yīng)繼續(xù)觀察300個(gè)視野結(jié)果

表1液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)與直接涂片染色法檢測(cè)結(jié)果比較

液基抗酸桿菌集菌制片技術(shù)

直接涂片染色法陽性(例數(shù))