常用化學(xué)藥品檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)儀器的使用

常用化學(xué)藥品檢驗(yàn)方法

檢驗(yàn)儀器的使用化學(xué)藥品檢驗(yàn)室內(nèi)容：高效液相色譜儀器（高效液相）色譜理論滴定分析法高效液相色譜儀一、結(jié)構(gòu)示意圖.二、部件介紹

一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。 現(xiàn)在的儀器還一般配置有在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、柱溫箱等。制備型HPLC儀還配備有自動餾分收集裝置。

泵恒壓泵、恒流泵。恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵、柱塞往復(fù)泵和隔膜往復(fù)泵。目前應(yīng)用的基本上是柱塞往復(fù)泵。（單元泵、四元泵、高壓二元泵）柱塞往復(fù)泵使用時的注意事項(xiàng)：1防止固體微粒進(jìn)入泵體造成磨損。2流動相不應(yīng)含有對泵體造成腐蝕的化學(xué)物質(zhì)。3泵空轉(zhuǎn)也會磨損柱塞，防止流動相跑空。4壓力過高會使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。5防止流動相中析出鹽晶，應(yīng)開啟柱塞沖洗功能。進(jìn)樣器主要部件為定量環(huán)及六通閥。使用時應(yīng)注意：1樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損2進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%3每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥，現(xiàn)在大部分進(jìn)樣器能自動實(shí)現(xiàn)此功能。部分自動進(jìn)樣器還能實(shí)現(xiàn)柱前衍生化等操作。（Agilent）色譜柱色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好、分析速度快等。使用色譜柱時應(yīng)注意事項(xiàng)：1避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。2應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?一般不能反沖，否則會迅速降低柱效。4使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。5流動相應(yīng)先脫氣，避免氣泡進(jìn)入柱體。6測試基質(zhì)復(fù)雜的樣品時，應(yīng)用保護(hù)柱。7定期用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除駐留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。8保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇后塞緊。

高效液相色譜的主要類型及其分離原理類型（按固定相分子聚集狀態(tài)和分離機(jī)制分）：分配色譜(液-液色譜)；吸附色譜(液-固色譜)；離子交換色譜；空間排阻色譜；親和色譜等。一、液-液色譜（一）反相鍵合相色譜化學(xué)鍵合相：利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面特點(diǎn)：不易流失熱穩(wěn)定性好化學(xué)性能好載樣量大適于梯度洗脫1分離機(jī)制：分配+吸附

疏溶劑理論

流動相與溶質(zhì)排斥力越強(qiáng)，作用時間↑，k↑，組分tR↑流動相與溶質(zhì)排斥力越弱，作用時間↓，k↓，組分tR↓2．固定相：極性小的烷基鍵合相

C8柱，C18柱（十八烷基Octadecylsilyl，簡稱ODS）3．流動相：極性大的甲醇-水或乙腈-水

流動相極性>固定相極性（RP）底劑+有機(jī)調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑）例：水（緩沖鹽溶液）+甲醇，乙腈，THF4．流動相極性與k的關(guān)系：

流動相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑5．出柱順序：極性大的組分先出柱極性小的組分后出柱6．適用：非極性~中等極性組分（二）正相鍵合相色譜1．分離機(jī)制：溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力（有分配和吸附兩種說法）2．固定相：極性大的氰基、氨基、二氨基、芳硝基等鍵合相3．流動相：極性小（同LSC）底劑+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑

例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇4．流動相極性與k的關(guān)系：流動相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓5．出柱順序：結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱極性大的組分后出柱6．適用：氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍?。蛛x物質(zhì)也相似氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性，分析極性大物質(zhì)、酚、羧酸、核苷酸、糖類、氨基酸等（也可用作反相固定相，氨基柱不能用于分離甾酮、還原糖）二.液-固固色譜法（（或液-固固吸附色譜譜法）1.特點(diǎn)：流動相為為液體，固固定相為吸吸附相。2.分離機(jī)機(jī)制：Xm+nSa=Xa+nSmK=[Xa][Sm]n/[Xm][Sa]n3.結(jié)結(jié)論論：顯顯然然，，分分配配系系數(shù)數(shù)大大的的組組分分，，吸吸附附劑劑對對它它的的吸吸附附力力強(qiáng)強(qiáng)，，保保留留值值就就大大。。4.作作用用：a.適適用用分分離離相相對對分分子子質(zhì)質(zhì)量量中中等等油油性性試試樣樣。。b.對對具具有有不不同同官官能能團(tuán)團(tuán)的的化化合合物物和和異異構(gòu)構(gòu)體體有有較較高高的的選選擇擇性性。。缺點(diǎn)點(diǎn)：由由于于非非線線性性等等溫溫吸吸附附常常引引起起峰峰的的拖拖尾尾現(xiàn)現(xiàn)象象。。三.離離子子交交換換色色譜譜法法1.分分離離機(jī)機(jī)制制；離離子子與與離離子子之間間的的電電荷荷吸吸引引力力2.適適用用范范圍圍；凡凡能能在在溶溶劑劑中中電電離離的的物物質(zhì)質(zhì)一一般般均均可可用用該該法法進(jìn)進(jìn)行行分分離離。。3.交交換換：KX=[-NR4+X-][Cl-]/[-NR4+Cl-][X-]DX=[-NR4+X-]/[X-]=KX[-NR4+Cl-]/[Cl-]4.結(jié)結(jié)論論：a.分分配配系系數(shù)數(shù)D愈愈大大，，表表示示溶溶質(zhì)質(zhì)的的離離子子與與離離子子交交換換劑劑的的相相互互作作用用愈愈強(qiáng)強(qiáng)。。b.親親合合力力高高的的，，在在柱柱中中保保留留值值就就愈愈大大。。5.應(yīng)應(yīng)用用：a.分分離離離離子子或或可可離離解解的的化化合合物物。。b.主主要要用用于于分分析析有有機(jī)機(jī)酸酸、、氨氨基基酸酸、、核核酸酸、、多多肽肽等等。離子子對對色色譜譜法法1.特特點(diǎn)點(diǎn)：分離離效效能能高高，，分分析析速速度度快快，，操操作作簡簡便便.2.分分離離機(jī)機(jī)制制：：又稱稱偶偶離離子子色色譜譜法法，，是是液液－－液液色色譜譜法法的的分分支支。。它它是是根根據(jù)據(jù)被被測測組組分分離離子子與與離離子子對對試試劑劑離離子子形形成成中中性性的的離離子子對對化化合合物物后后，，在在非非極極性性固固定定相相中中溶溶解解度度增增大大，，從從而而使使其其分分離離效效果果改改善善。。3.分分離離過過程程：X+水相相+Y－水相相?X+Y－水相相KXY=[X+Y－]有機(jī)機(jī)相相/[X+]水相相·[Y－]水相相DX=[X+Y－]有機(jī)機(jī)相相/X+水相相=KXY·[Y－]水相相4.a.可可用用C18、C8等常常用用色色譜譜柱柱；；b.庚庚烷烷磺磺酸酸鈉鈉等等離離子子對對試試劑劑價價格格貴貴.5.應(yīng)應(yīng)用用：解決決了了以以往往難難分分離離混混合合物物的的分分離離問問題題.主主要要用用于于分分析析離離子子強(qiáng)強(qiáng)度度大大的的酸酸堿堿物物質(zhì)質(zhì)。。（（三三聚聚氰氰胺胺））離子子對對色色譜譜分分離離過過程程示示意意圖圖四、、離離子子色色譜譜法法1.固固定相相:離子交交換樹樹脂，，常用苯苯乙烯與與二乙乙烯交交聯(lián)形形成的的聚合合物骨骨架，在在表面面未端端芳環(huán)環(huán)上接接上羧羧基、、磺酸基基（稱稱陽離離子交交換樹樹脂））或季季銨基（（陰離離子交交換樹樹脂））。流動相相:電電解質(zhì)質(zhì)溶液液檢測器器:電電導(dǎo)檢檢測器器，安安培主配件件：抑抑制柱柱2.流流程程圖：：fig3-23.分分類a.雙雙柱型型：化化學(xué)抑抑制型型離子子色譜譜法；；b.單單柱型型：非非抑制制型，，用低低電導(dǎo)導(dǎo)的洗洗脫液液；4.分分離機(jī)機(jī)制（（陰陰離子子為例例）被分離離組分分在色色譜柱柱上分分離原原理是是樹脂脂上可可電離離離子子與流流動相相中具具有相相同電電荷的的離子子及被被測組組分的的離子子進(jìn)行行可逆逆交換換，根根據(jù)各各離子子與離離子交交換基基團(tuán)具具有不不同的的電荷荷吸引引力而而分離離。5.應(yīng)應(yīng)用：：從無機(jī)機(jī)和有有機(jī)陰陰離子子到金金屬陽陽離子子，從從有機(jī)機(jī)陽離離子到到糖類類、氨氨基酸酸、多多肽、、核酸酸等均均可用用該法法分析析。離子色譜譜中發(fā)生生的基本本過程就就是離子子交換，，因此，，離子色色譜本質(zhì)質(zhì)上就是是離子交交換色譜譜。在離子色色譜的基基本組成成中，重重要的和和與其他他高效液液相色譜譜不同的的就是抑抑制器和和電導(dǎo)檢檢測器，，離子色色譜用的的泵是PEEK材料襯襯里的不不銹鋼泵泵。藥典品種種應(yīng)用離子色譜譜法：陽離子交交換柱山梨醇及及制劑甘油果糖糖氯化鈉鈉注射液液甘露醇及及制劑利巴韋林林及制劑劑鹽酸二甲甲雙胍及及制劑蘋果酸及及制劑富馬酸及及制劑陰離子交交換柱肝素鈉及及制劑帕米磷酸酸二鈉及及制劑氯膦酸二二鈉及制制劑硫酸軟骨骨素鈉及及制劑色譜柱類型品種個數(shù)陽離子交換柱23個陰離子交換柱14個五、空間間排阻色色譜法1.固定定相：凝膠2.機(jī)制制：類似于于分子篩篩作用，，分離只只與凝膠膠的孔徑徑分布和和溶質(zhì)的的流體力力學(xué)體積積和分子子大小有有關(guān).3.分離離示意圖圖，fig3-3a.排斥斥極限A點(diǎn);b.全滲滲透極限限B點(diǎn)相對分子子質(zhì)量介介于上述述兩個極極限之間間的化合合物，將將按相對對分子質(zhì)質(zhì)量降低低的次序序被洗脫脫.4.常用于分分離高分分子化合合物，如組織提提取物、、多肽、、蛋白質(zhì)質(zhì)、核酸等。。常壓凝膠色譜頭孢尼西鈉頭孢唑肟鈉阿莫西林注射用頭孢尼西鈉注射用頭孢唑肟鈉阿莫西林膠囊頭孢他啶頭孢唑林鈉青霉素V鉀注射用頭孢他定注射用頭孢唑林鈉青霉素V鉀膠囊頭孢曲松鈉頭孢替唑鈉青霉素鈉注射用頭孢曲松鈉注射用頭孢替唑鈉注射用青霉素鈉頭孢呋辛鈉頭孢噻吩鈉青霉素鉀注射用頭孢呋辛鈉注射用頭孢噻吩鈉注射用青霉素鉀頭孢拉定頭孢噻肟鈉苯唑西林鈉頭孢哌酮鈉注射用頭孢噻肟鈉注射用苯唑西林鈉注射用頭孢哌酮鈉阿洛西林鈉美洛西林鈉氯唑西林鈉注射用阿洛西林鈉注射用美洛西林鈉注射用氯唑西林鈉普魯卡因青霉素磺芐西林鈉注射用普魯卡因青霉素注射用磺芐西林鈉2010版藥典典二部采采用常壓壓凝膠色色譜的品品種門冬酰胺酶（埃希）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度門冬酰胺酶（歐文）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用門冬酰胺酶（埃希）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用門冬酰胺酶（歐文）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)注射用抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)烏司他丁親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)烏司他丁溶液親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)胰島素親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)中性胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)精蛋白鋅胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)2010版藥典典二部采采用高效效凝膠色色譜的品品種右旋糖酐20親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐20葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐20氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量1000~10000），有關(guān)物質(zhì)注射用頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量1000~10000），有關(guān)物質(zhì)2010版藥典典二部采采用高效效凝膠色色譜的品品種19世紀(jì)紀(jì)70年年代中期期，HPLC儀儀開始出出現(xiàn)，主主要填料料：10μm的無定型硅硅膠顆粒。70年代代后期，，發(fā)展了了反相液液相色譜譜。80年代代，HPLC被被廣泛泛應(yīng)用于于化合物物的分離離，主要要填料：：粒徑為為5～～10μm球形硅膠膠。90年代代早期，，粒徑為為5μμm的的高純硅膠膠，即所謂謂的B型硅硅膠被發(fā)發(fā)展，并并成為這這個行業(yè)業(yè)填料的的標(biāo)準(zhǔn)，，這種B型型硅膠含含有微量量的金屬屬。90年代代后期，，為了滿滿足快速速分離的的需求，，發(fā)展了了3μμm或或3.5μμm的的球形形硅膠，，其作用用和性能能逐漸的的獲得了了人們的的認(rèn)同和和接受。。手性色色譜柱的的開發(fā)。。21世紀(jì)紀(jì)早期，，為適應(yīng)應(yīng)超快速速的分離離要求，，粒徑小于于2μμm的填料被被開發(fā)出出來，發(fā)發(fā)展出了了整體柱、、無機(jī)和和有機(jī)雜雜化硅膠膠。目前，市市場上流流行的分分析用的的HPLC硅硅膠基基質(zhì)填料料主要為為B型型硅膠膠。填料發(fā)展展史無定形硅硅膠和鍵鍵合相硅硅膠示意意圖：填料發(fā)展展史色譜法的的應(yīng)用：：液相色色譜常用用檢測器器光學(xué)檢測測器：紫紫外、熒熒光、示差折光光、蒸發(fā)發(fā)光散射射（通用用型檢測測器）電化學(xué)檢檢測器：：極譜、、庫侖、、安培電學(xué)檢測測器：電電導(dǎo)、介介電常數(shù)數(shù)質(zhì)譜檢測測器選擇性檢檢測器：：靈敏度度較高檢測器類型品種個數(shù)紫外檢測器1333個蒸發(fā)光散射檢測器28個示差檢測器10個電導(dǎo)檢測器5個2010版藥典典二部采采用檢測測器情況況色譜法的的應(yīng)用：：蒸發(fā)光光散射檢檢測器優(yōu)點(diǎn)：適用于沒沒有特征征紫外吸吸收或紫紫外吸收收很弱的的待測物物，使用用UV時時靈敏度度更低；；無需衍衍生化而而直接測測定，避避免了衍衍生帶來來的誤差差?？梢詰?yīng)用用有強(qiáng)紫紫外吸收收的試劑劑，如氯氯仿、丙丙酮等。。適用于組組分復(fù)雜雜樣品的的分析，，可以進(jìn)進(jìn)行梯度度洗脫，，基線平平穩(wěn)。通用型檢檢測器，，只要待待測物揮揮發(fā)性低低于溶劑劑，即可可適用。。對不同同物質(zhì)，，ELSD相應(yīng)應(yīng)因子的的變化比比其它檢檢測器要要小得多多。對環(huán)境影影響不靈靈敏，室室溫下即即可操作作。沒有溶劑劑前緣峰峰，適用用于保留留時間短短的物質(zhì)質(zhì)的檢測測。與LC-MS的的色譜條條件一致致，可直直接進(jìn)行行方法轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換。色譜法的的應(yīng)用：：蒸發(fā)光光散射檢檢測器影響ELSD響響應(yīng)的因因素載氣流速速、霧化化器設(shè)計(jì)計(jì)與溫度度、流動動相的組組成和流流速等影影響霧化化過程。。被分析物物的濃度度和體積積質(zhì)量決決定了進(jìn)進(jìn)入光散散射池的的氣溶膠膠中的顆顆粒的直直徑。被分析物物的折射射指數(shù)、、光源發(fā)發(fā)出的光光的強(qiáng)度度和波長長、光電電倍增管管的位置置等影響響散射光光強(qiáng)度。。光電電倍倍增增管管的的靈靈敏敏度度和和入入射射光光的的強(qiáng)強(qiáng)度度決決定定了了檢檢測測的的效效率率，，反反映映為為實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)者者所所觀觀測測的的峰峰面面積積。。2010版版藥藥典典二二部部應(yīng)應(yīng)用用蒸蒸發(fā)發(fā)光光散散射射檢檢測測器器的的品品種種妥布霉素硫酸慶大霉素妥布霉素滴眼液硫酸慶大霉素注射液硫酸妥布霉素注射液硫酸奈替米星硫酸小諾霉素硫酸奈替米星注射液硫酸小諾霉素口服溶液硫酸依替米星硫酸小諾霉素片硫酸依替米星注射液硫酸小諾霉素注射液注射用硫酸依替米星硫酸巴龍霉素硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射用硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射液硫酸鏈霉素硫酸卡那霉素滴眼液注射用硫酸鏈霉素注射用硫酸卡那霉素大豆磷脂硫酸西索米星膽固醇硫酸西索米星注射液蛋黃卵磷脂色譜法的的應(yīng)用：：蒸發(fā)光光散射檢檢測器圖硫酸酸核糖霉霉素有關(guān)關(guān)物質(zhì)色色譜圖（蒸發(fā)管管溫度：：65℃℃，分流流模式））總雜質(zhì)：5.26%色譜法的的應(yīng)用：：蒸發(fā)光光散射檢檢測器圖硫酸酸核糖霉霉素有關(guān)關(guān)物質(zhì)色色譜圖（蒸發(fā)管管溫度：：110℃，不不分流模模式）總雜質(zhì)：4.18%蒸發(fā)光散散射檢測測器應(yīng)用用要點(diǎn)：：謹(jǐn)慎使用用，充分分優(yōu)化實(shí)實(shí)驗(yàn)條件件。企業(yè)質(zhì)控控人員和和藥檢所所人員均均需要。漂移管溫溫度的優(yōu)優(yōu)化：溫度對對響應(yīng)值值的影響響無明顯顯的規(guī)律律性。最最優(yōu)溫度度為在流流動相基基本揮發(fā)發(fā)的基礎(chǔ)礎(chǔ)上，產(chǎn)產(chǎn)生可接接受噪音音的最低低溫度。。霧化氣流流速的優(yōu)優(yōu)化：流速越越大，響響應(yīng)值越越低。最最優(yōu)氣體體流速應(yīng)應(yīng)是在可可接受噪噪音的基基礎(chǔ)上，，產(chǎn)生最最大檢測測響應(yīng)值值的最低低氣體流流速。色譜法的的應(yīng)用：：示差折折光檢測測器原理：連連續(xù)測定定流通池池中溶液液折射率率來測定定試樣中中各組分分濃度。。優(yōu)點(diǎn)：通通用型檢檢測器缺點(diǎn)：1）對溫溫度變化化敏感2）對溶溶劑組成成變化敏敏感，不不能用于于梯度檢檢測3）屬于于中等靈靈敏度的的檢測器器山梨醇山梨醇注注射液甘露醇甘露醇注注射液乳果糖口口服溶液液葡甲胺麥芽糖乳糖倍他環(huán)糊糊精羥丙基倍倍他環(huán)糊糊精色譜法的的應(yīng)用：：電導(dǎo)檢檢測器原理：根根據(jù)物質(zhì)質(zhì)在某些些介質(zhì)中中電離后后所產(chǎn)生生的電導(dǎo)導(dǎo)變化來來測定電電離物質(zhì)質(zhì)含量。。優(yōu)點(diǎn)：對對流動相相流速和和壓力的的改變不不敏感，，可用于于梯度洗洗脫。缺點(diǎn)：對對溫度變變化敏感感（每升升高1度度，電導(dǎo)導(dǎo)率增加加2%-2.5%)。。廣泛應(yīng)用用于離子子色譜。。主要用用于檢測測水溶性性無機(jī)和和有機(jī)離離子。帕米膦酸酸二鈉注注射液注射用帕帕米膦酸酸二鈉鹽酸頭孢孢吡肟注射用鹽鹽酸頭孢孢吡肟氯膦酸二二鈉氯膦酸二二鈉注射射液氯膦酸二二鈉膠囊囊?guī)追N檢測測器主要要特性比比較表檢測器檢測信號選擇性流速影響檢出限g/ml梯度洗脫UV吸光度有無10-10適宜FD熒光強(qiáng)度有無10-13適宜AD電流有有10-13不宜ELSD散射光強(qiáng)度無－10-9適宜RID折光率無無10-7不宜液相色譜譜法流動動相1.重要要性：GC載氣氣僅三四四種，要要提高柱柱效選擇擇性，主主要改變變固定相相的性質(zhì)質(zhì)；LC則不不同，當(dāng)當(dāng)固定相相選定時時，流動動相的種種類，配配比能顯顯著地影影響分離離效果，，因此流動相的的選擇很很重要。2.選擇擇流動相相應(yīng)注意意的因素素3.溶劑劑的選擇擇：a.依依據(jù)：溶溶劑的極極性是重重要依據(jù)據(jù)。b.溶溶劑極性性順序，，水最大大，正已已烷最小小。c.采采用多元元組合溶溶劑系統(tǒng)統(tǒng)作為流流動相（（底液和和洗脫液液）d.根根據(jù)不同同的方法法選擇合合適的底底液和洗洗脫液具體操作作時還應(yīng)應(yīng)注意的的事項(xiàng)①流動動相濾過過后，注注意觀察察有無肉肉眼能看看到的微微粒、纖纖維。有有請重新新濾過。。②開機(jī)機(jī)后把要要用到的的管路進(jìn)進(jìn)行purge（脫氣氣）處理理。③③增加加流速應(yīng)應(yīng)以0.1ml/min的增增量逐步步進(jìn)行，，一般不不超過0.5ml/min，反反之亦然然。否則則易使柱柱床下塌塌。④④裝柱柱時注意意流向，，接口處處不要留留有空隙隙產(chǎn)生氣氣泡。⑤⑤樣樣品液請請注意濾濾過后進(jìn)進(jìn)樣，注注意樣品品溶劑的的揮發(fā)性性。⑥⑥測定定完畢請請用（甲甲醇：水水=10:90）沖柱柱1小時時，再用用（甲醇醇：水=90:10））沖柱30分鐘鐘，長時時間不用用應(yīng)最后后再沖15分鐘鐘純甲醇醇。對于于含碳量量高、封封尾充分分的柱，，特別注注意應(yīng)先先用含5~10%甲醇醇的水沖沖洗，再再用甲醇醇沖洗。。重溫溫一一下下學(xué)學(xué)校校里里學(xué)學(xué)過過的的色譜譜理理論論知知識識色譜譜法法中中的的主主要要參參數(shù)數(shù)和和關(guān)關(guān)系系式式分配配系系數(shù)數(shù)Kp和容容量量因因子子K'（1）分配配系系數(shù)數(shù)Kp：定溫溫定定壓壓下下物物質(zhì)質(zhì)在在固固定定相相和和流流動動相相中中的的濃度度比比。KP＝[A]s/[A]m（s－固固定定相相；；m－流流動動相相））（2）容量量因因子子K'：分配配系系數(shù)數(shù)與與兩兩相相體體積積有有關(guān)關(guān)的的參參數(shù)數(shù)，，表表示示溶溶質(zhì)質(zhì)A在兩兩相相中中的的質(zhì)量量比比。K'=[mA]s/[mA]m=KP×VS/VmＫ`應(yīng)應(yīng)為為1~10Ｒ≥≥１１.5兩兩個個組組分分能能完完全全分分開開（3））分分離離度度ＲＲ———色色譜譜柱柱的的總總分分離離效效能能指指標(biāo)標(biāo)定義義：：相相鄰鄰兩兩個個峰峰的的保保留留值值之之差差與與兩兩峰峰寬寬度度平平均均值值之之比比式中中：：分分子子反反映映了了溶溶質(zhì)質(zhì)在在兩兩相相中中分分配配行行為為對對分分離離的的影影響響，，是是色色譜譜分分離離的的熱力力學(xué)學(xué)因因素素。分母反反映了了動態(tài)態(tài)過程程溶質(zhì)質(zhì)區(qū)帶帶的擴(kuò)擴(kuò)寬對對分離離的影影響，，是色譜分分離的的動力學(xué)學(xué)因素素。從中得得到：：兩溶溶質(zhì)保保留時時間相相差越越大，，色譜譜峰越越窄，，分離越好好。a:柱柱效因因子：：塔板數(shù)數(shù)決定定，n越越大，，柱效效越高高分離離的越越好。。(色色譜柱柱)分離度度與柱柱效能能、選選擇性性的關(guān)關(guān)系b：選選擇因因子：：tR’(２２)與與t’’R（1））相相差越越大，r2,1越大，，分的的越好好。(樣品品)C：容容量因因子：k’大大一些些對分分析有有利;太太大，，tR長；柱柱容量量合適適,分分的才才好。。(流流動相相)一般１１＜k’＜＜１１０色譜法法的基基本理理論一、塔塔板理理論色譜技技術(shù)發(fā)發(fā)展的的初期期，Martin等等人把把色譜譜分離離過程程比作作分餾餾過程程，并并把分分餾中中的半半經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)理論論－塔板理理論用于色色譜分分析法法。塔板理理論把把色譜譜柱比比作一一個分分餾塔塔，假假設(shè)柱柱內(nèi)有有n個個塔板板，每每個塔塔板高高度稱稱為理理論塔塔板高高度，，用H表示，，在每個塔板板內(nèi)，試樣樣各組分在在兩相中分分配并達(dá)到到平衡，最最后，揮發(fā)發(fā)度大的組組分和揮發(fā)發(fā)度小的組組分彼此分分離，揮發(fā)發(fā)度大的最最先從塔頂頂（即柱后后）逸出。。盡管這個個理論并不不完全符合合色譜柱的的分離過程程，色譜分分離和一般般的分餾塔塔分離有著著重大的差差別，但是是因?yàn)檫@個個比喻形象象簡明，因因此幾十年年來一直沿沿用。一、塔板理理論塔板理論公公式H=L/n*n=5.54(tR/Wh/2)2=16(tR/W)2二、速率理理論—范第第姆特方程程用塔板理論論來說明色色譜柱內(nèi)各各組分的分分離過程并并不完全合合理，因?yàn)闉樯V柱內(nèi)內(nèi)并沒有塔塔板，當(dāng)同同一試樣進(jìn)進(jìn)入同一色色譜柱，當(dāng)當(dāng)流動相速速度變化時時，得到不不同的色譜譜圖。測得得的n（塔板數(shù)數(shù)）和H（柱效））也不同，充分說明明塔板理論論不足以說說明色譜柱柱的分離過過程。1956年，荷蘭學(xué)學(xué)者范第姆姆特（VanDeomter）提出一個個描述色譜譜柱分離過過程中復(fù)雜雜因素使色色譜峰變寬寬而致柱效效降低（即即：使H增大）影響響的方程。。此方程經(jīng)經(jīng)簡化后寫寫為:該式稱為速速率方程（（范氏方程程）。u為流動相相線速度cm.s-1，線速度=柱長/死時間速率理論——范第姆特特方程（1）提出出了影響ＨＨ的三項(xiàng)因因素：A渦流擴(kuò)散散項(xiàng)，B分分子擴(kuò)散項(xiàng)項(xiàng)，C傳質(zhì)阻力力項(xiàng)。（2）在流流動相流速速一定時，，當(dāng)Ａ、Ｂ、、Ｃ最小時時，Ｈ小，，n才最最高，柱效效高。當(dāng)Ａ、Ｂ、、Ｃ最大時時，Ｈ大，，n才最最小，柱效效低。（1）渦流流擴(kuò)散項(xiàng)A在填充色譜譜柱中，當(dāng)當(dāng)組分隨流流動相向柱柱出口遷移移時，流動動相由于受受到固定相相顆粒障礙礙，不斷改改變流動方方向，使組組分分子在在前進(jìn)中形形成紊亂的的類似“渦渦流”的流流動，故稱稱渦流擴(kuò)散散。A＝2λdpA與填充物物的平均直徑dp的大小和填填充不規(guī)則因子子λ有關(guān)。減小Ａ：固定相顆粒粒應(yīng)適當(dāng)細(xì)細(xì)小、填充充要均勻。。待測組分是是以“塞子子”的形式式被流動相相帶入色譜譜柱的，在在“塞子””前后存在在濃度梯度度，由濃→→稀方向擴(kuò)擴(kuò)散，產(chǎn)生生了縱向擴(kuò)擴(kuò)散，使色色譜峰展寬寬。（2）分子子擴(kuò)散項(xiàng)B/u（縱縱向擴(kuò)散項(xiàng)項(xiàng)）由于溶質(zhì)區(qū)區(qū)帶前后存存在著濃度度差，因而而產(chǎn)生縱向向擴(kuò)散使區(qū)區(qū)帶（色譜譜峰）擴(kuò)寬寬。由于分分子在液體體中的擴(kuò)散散速率大約約是在氣體體中的1/105，所以該項(xiàng)項(xiàng)對液相色譜來來說很小，，而對氣相相色譜則很很重要。擴(kuò)散的嚴(yán)重重與否，關(guān)關(guān)鍵是取決決于流動相相的線速度度。減小縱向擴(kuò)擴(kuò)散項(xiàng)Ｂ／／u采取取措施（針對氣相相色譜）①適當(dāng)提提高流動相相流速u，，減小保留留時間②用相對對分子質(zhì)量量較大的氣氣體作流動動相。B＝2γDgDg∝③適當(dāng)降降低柱溫ＴＴc。（3）傳質(zhì)質(zhì)阻力項(xiàng)Cu傳質(zhì)阻力系系數(shù)C包包括兩部部分，Ｃ＝Ｃg+Cl兩項(xiàng)組成Cg—流動相傳傳質(zhì)阻力系系數(shù)組分從流動動相移動到到固定相表表面進(jìn)行兩相之間的的質(zhì)量交換換時所受到的的阻力，質(zhì)質(zhì)量交換慢慢，引起色色譜峰變寬寬。gCl—固定相傳傳質(zhì)阻力系系數(shù)即組分從兩相界面移移動到固定定相內(nèi)部，達(dá)分配平平衡后，又又返回到兩兩相界面，，在這過程程中所受到到的阻力為為固定相傳傳質(zhì)阻力。。2組分在固定定相中擴(kuò)散散系數(shù)固定液膜厚厚度減?。貌扇∪〈胧孩俨捎昧Ａ６刃〉奶钐畛湮铮虎贒l越大越好，，增加柱溫溫是提高Dl的方法之一一。液相色譜條條件的試驗(yàn)驗(yàn)評價基線柱效分離度峰的對稱性性（T、S、AS））結(jié)果的重復(fù)復(fù)性（RSD）系統(tǒng)適用性性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性性試驗(yàn)是在在正式檢測測之前進(jìn)行行預(yù)試驗(yàn)，，對目前實(shí)實(shí)驗(yàn)條件所所產(chǎn)生的分分離效果及及測定結(jié)果果進(jìn)行評價價，確認(rèn)儀儀器狀態(tài)及及實(shí)驗(yàn)條件件達(dá)到一定定要求后才才可進(jìn)行有有效的測定定。如系系統(tǒng)統(tǒng)適適用用性性試試驗(yàn)驗(yàn)達(dá)達(dá)不不到到要要求求，，應(yīng)應(yīng)對對條條件件進(jìn)進(jìn)行行調(diào)調(diào)整整使使最最終終符符合合要要求求。。藥典典正正文文給給出出的條條件件，，在在不不改改變變性性質(zhì)質(zhì)的的基基礎(chǔ)礎(chǔ)上上可可按按具具體體實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)情情況況作作出出適適當(dāng)當(dāng)?shù)牡恼{(diào)調(diào)整整,以以符符合合系系統(tǒng)統(tǒng)適適用用性性試試驗(yàn)驗(yàn)的的要要求求。。代表表性性質(zhì)質(zhì)的的有有：：色色譜譜柱柱的的填填體體，，流流動動相相的的成成份份，，檢檢測測波波長長等等。。常作作出出調(diào)調(diào)整整的的有有：：流速速，，流流動動相相中中水水相相與與有有機(jī)機(jī)相相的的配配比比等等。。測定定精精度度的的控控制制1.儀器器狀狀態(tài)態(tài)良好好,通通過過檢檢定定/校校準(zhǔn)準(zhǔn)a.基基線線b.流流速速穩(wěn)穩(wěn)定定性性c.最最低低檢檢測測限限d.結(jié)結(jié)果果重重現(xiàn)現(xiàn)性性2.色譜譜柱柱狀狀態(tài)態(tài)良好好3.流動動相相的配配制制試試藥藥選選用用化化學(xué)學(xué)純純以以上上,最最好好是是分分析析純純,水水用用重重蒸蒸餾餾水水,有有機(jī)機(jī)溶溶劑劑選選用用符符合合色色譜譜要要求求的的試試劑劑，，流流動動相相用前前經(jīng)經(jīng)脫脫氣氣處處理理。。4.合合理理設(shè)設(shè)定定參數(shù)數(shù)；5.符符合合系統(tǒng)統(tǒng)適適用用性性試試驗(yàn)驗(yàn)要求求；；6.溶液液配配制制按容容量量分分析析要要求求,并并注注意意溶溶液液的的穩(wěn)穩(wěn)定定性性；；7.用用外標(biāo)標(biāo)法測測定時時儀器器最好好配有有定量量環(huán)或或自動動進(jìn)樣樣,沒沒有有配備備的儀儀器最最好選選用內(nèi)內(nèi)標(biāo)法法；8.適適當(dāng)?shù)牡谋Ａ魰r時間；9.其他開頭幾幾份結(jié)結(jié)果一一般不不要；；對供供試品品色譜譜圖不不完全全了解解之前前應(yīng)先先走一一份時時間較較長的的圖譜譜；進(jìn)進(jìn)行雙雙份平平行試試驗(yàn)。。滴定分分析法法滴定分分析是是化學(xué)學(xué)分析析中的的一類類重要要的分分析方方法。。此類類分析析方法法是將將一種種已知知濃度度的液液體即即滴定定溶液液用滴滴定管管加到到被測測物質(zhì)質(zhì)的溶溶液中中，直直到所所加滴滴定液液和被被測組組分按按化學(xué)學(xué)計(jì)量量反應(yīng)應(yīng)完全全為止止。優(yōu)點(diǎn)：：精密密度和和準(zhǔn)確確度高高，操操作簡簡便，，至今今仍是是組分分單一一原料料藥含含量測測定的的首選選方法法；快快速經(jīng)經(jīng)濟(jì)、、儀器器簡單單。缺點(diǎn)：：專屬屬性不不足，，對組組分較較多的的制劑劑，需需較繁繁瑣的的前處處理，，可損損失一一定的的精密密度和和準(zhǔn)確確度。。滴定分分析法法滴定分分析應(yīng)應(yīng)符合合以下下條件件：-a、、反應(yīng)應(yīng)應(yīng)朝朝一個個方向向完全全進(jìn)行行（完完全、、>99.9%）；；-b、、反應(yīng)應(yīng)嚴(yán)格格按化化學(xué)計(jì)計(jì)量式式進(jìn)行行；-c、、反應(yīng)應(yīng)迅速速，必必要時時通過過加熱熱或加加催化化劑等等方法法加速速反應(yīng)應(yīng)；-d、、共存存物不不得干干擾測測定，，或能能用適適當(dāng)方方法消消除；；-e、、確定定等當(dāng)當(dāng)點(diǎn)的的方法法簡單單靈敏敏；-f、、標(biāo)化化滴定定液所所用基基準(zhǔn)物物質(zhì)易易得，，且符符合純純度高高、組組分恒恒定且且與化化學(xué)式式符合合、性性質(zhì)穩(wěn)穩(wěn)定（（標(biāo)化化時無無副反反應(yīng)））等。。滴定分分析法法分類類根據(jù)化化學(xué)反反應(yīng)不不同-分分酸酸堿滴滴定、、沉淀淀滴定定、絡(luò)絡(luò)合滴滴定、、氧化化還原原滴定定；按滴定定方式式-分分直直接滴滴定和和剩余余滴定定（也也稱回回滴定定、間間接滴滴定））。滴定分分析法法操作作注意意事項(xiàng)項(xiàng)滴定液液消耗耗體積積：若使用用50ml滴定定管，，最好好在30～～40ml范圍圍內(nèi)；；用25ml滴滴定管管，最最好在在20～25ml范范圍內(nèi)內(nèi)，減減少讀讀數(shù)引引起得得相對對誤差差。如如：滴滴定管管體積積讀數(shù)數(shù)誤差差一般般