沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程資料僅供參考文件編號(hào)：2022年4月沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程版本號(hào)：A修改號(hào)：1頁(yè)次：1.0審核：批準(zhǔn):發(fā)布日期：目的PURPOSE規(guī)范888物料、產(chǎn)品的沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)操作，確保檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。范圍SCOPE適用于888物料、產(chǎn)品的沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)工作。責(zé)任RESPONSIBILITY微生物檢驗(yàn)員嚴(yán)格執(zhí)行本規(guī)程，品質(zhì)部負(fù)責(zé)人監(jiān)督執(zhí)行。程序PROCEDURE定義和原理沙門(mén)氏菌廣泛存在于動(dòng)物的腸道和內(nèi)臟，以及被糞便污染的水和土壤中，是細(xì)菌性食物中毒的主要病因。本方法利用沙門(mén)氏菌呈辛酸酯酶陽(yáng)性，而氧化酶和脂肪酶均呈陰性的特性，對(duì)物料、產(chǎn)品進(jìn)行沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)。材料和設(shè)備紫外燈：波長(zhǎng)366nm，功率不小于6W。放大鏡：3至4倍。毛細(xì)滴管。LX-B35L壓力蒸汽滅菌鍋。無(wú)菌的培養(yǎng)皿。無(wú)菌的接種環(huán)。培養(yǎng)基和試劑SCDLP液體培養(yǎng)基：按《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007版）或使用商品培養(yǎng)基干粉配制。四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液：按—2010附錄配制或使用商品試劑。SS瓊脂培養(yǎng)基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)，蛋白胨，乳糖，蔗糖，膽鹽，檸檬酸鈉，硫代硫酸鈉，檸檬酸鐵，煌綠，中性紅，瓊脂，蒸餾水1000mL。制訂者PreparedBy:888審核者ReviewedBy:888批準(zhǔn)者ApprovedBy:CC:88HE瓊脂培養(yǎng)基：按—2010附錄或使用商品培養(yǎng)基干粉配制。玉米油維多利亞藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基：滅菌后的基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，邊搖邊加入玉米油乳化液。傾注平皿，制成平板?；A(chǔ)培養(yǎng)基及玉米油乳化液配方如下：a）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化鈉5g，瓊脂13g，水900mL，。將各成分加入水中，加熱溶解。調(diào)節(jié)，116℃15min高壓滅菌。b）玉米油乳化液：玉米油100mL，%維多利亞藍(lán)水溶液100mL，%瓊脂溶液80mL，吐溫801mL。玉米油加維多利亞藍(lán)水溶液混合，邊振動(dòng)邊在沸水中加熱溶化。然后，放入分液漏斗中，棄去藍(lán)色水部分，再將著色的脂肪用水洗1-2次。將著色脂肪20mL加入810mL瓊脂溶液中，再加1mL吐溫80，116℃15min高壓滅菌。冷卻后用超聲波乳化。MUCAP試劑：取MUCAP100mg，加纖維溶解劑溶解，再加TritonX-100，貯存于4℃冰箱。使用時(shí)用的L醋酸鹽緩沖液稀釋10倍。氧化酶試紙：將甲液與乙液等量混合。取定性濾紙，浸透混合液后，于70-80℃烘箱烘干，剪成大小適當(dāng)?shù)募垪l，密封于塑料袋或瓶中，貯存于4℃冰箱備用。甲液：1%α-萘酚乙醇液；乙液：1%二甲基對(duì)苯二胺草酸鹽水溶液。檢驗(yàn)步驟增菌和前增菌取樣品按SOP-QM-B017制備1：10稀釋的檢液。取10mL加到90mLSCDLP液體培養(yǎng)基中，置培養(yǎng)箱36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。移取10mL，轉(zhuǎn)接種于100mL四硫酸鈉煌綠（TTB）增菌液內(nèi)，42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。分離培養(yǎng)分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個(gè)SS瓊脂平板（含1%蔗糖）和一個(gè)HE瓊脂平板。SS瓊脂平板于36℃±1℃培養(yǎng)24～30h，HE平板于36℃±1℃培養(yǎng)40～48h。沙門(mén)氏菌菌落特征：a）在SS瓊脂平板上：無(wú)色半透明，菌落中心帶黑色的菌落；或者菌落為粉紅色，中心帶黑色，但有時(shí)不明顯。b）在HE平板上：無(wú)色半透明，菌落中心帶黑色或幾乎全黑色；或者菌落呈粉紅色，中心帶黑色。試驗(yàn)從培養(yǎng)的分離培養(yǎng)基或顯色培養(yǎng)基上挑選疑似沙門(mén)氏菌的菌落，盡量選較大、分離較好的單個(gè)菌落，用中性筆做好標(biāo)記并編號(hào)。用毛細(xì)滴管吸取MUCAP試劑，加一滴于編號(hào)的菌落上(覆蓋整個(gè)菌落)。將一個(gè)平板的被檢可疑菌落全部都滴加試劑后，將平板置于366nm紫外燈下檢視10至15分鐘。發(fā)藍(lán)色熒光的為MUCAP試驗(yàn)陽(yáng)性，將陽(yáng)性菌落編號(hào)記錄下來(lái)。氧化酶試驗(yàn)用接種環(huán)挑取MUCAP陽(yáng)性菌落，涂于氧化酶試紙上，觀察涂菌點(diǎn)是否變藍(lán)色。在10min內(nèi)變藍(lán)色為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，不變色為陰性。脂肪酶試驗(yàn)將SS瓊脂或HE瓊脂上，MUCAP陽(yáng)性且氧化酶試驗(yàn)陰性的菌落，用接種環(huán)挑取劃線接種至玉米油維多利亞藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基平板于36℃±1℃培養(yǎng)40～48h。觀察長(zhǎng)出的菌落，脂肪酶陽(yáng)性菌菌落呈藍(lán)色；陰性菌菌落則呈無(wú)色或粉紅色。（注：氧化酶試驗(yàn)和脂肪酶試驗(yàn)順序可以交換，或同時(shí)進(jìn)行。）記錄和檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告在檢驗(yàn)原始記錄上詳細(xì)記錄觀察結(jié)果。菌落的MUCAP試驗(yàn)陽(yáng)性，且氧化酶試驗(yàn)與脂肪酶試驗(yàn)均為陰性，判定為沙門(mén)氏菌，報(bào)告沙門(mén)氏菌陽(yáng)性。其它情況均報(bào)告陰性。檢驗(yàn)出陽(yáng)性結(jié)果的培養(yǎng)基平板要保存至少1個(gè)月。相關(guān)文件RELEVANTDOCUMENT編碼Code名稱(chēng)Name8888888微生物檢驗(yàn)樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程附件ATTACHMENT編碼Code名稱(chēng)Name版次VersionNo