高三二輪復(fù)習(xí)生物：專題2 尿素分解菌和纖維素分解菌的分離課件

知識回顧1.菌落的概念？作用？概念：在固體培養(yǎng)基生長，一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體P18作用：鑒定菌種的重要依據(jù)2.實驗室篩選微生物的原理？P213.微生物的培養(yǎng)？P20將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基（對照組）都放入到37℃恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h后，分別觀察并記錄結(jié)果。4.培養(yǎng)基的制作是否合格？P205.大腸桿菌純化的方法？微生物計數(shù)方法？

課題2

土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

（一）土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)所需培養(yǎng)基：P22該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？

配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細菌？為什么？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有產(chǎn)生脲酶的細菌能利用尿素作為氮源而生存。一、基礎(chǔ)知識怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？P29資料二第3.（二）菌落的計數(shù)P22

如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明實驗不精確，需要重新實驗。（三）設(shè)置對照P23旁欄思考目的：排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響。

除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實驗，稱為對照實驗。通過書中的案例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。想一想：A同學(xué)和其他同學(xué)所得實驗結(jié)果差異如此之大，請分析原因可能有哪些？并通過設(shè)置對照，幫助A同學(xué)排除上述兩個可能影響實驗結(jié)果的因素？P23可能原因?qū)嶒灲Y(jié)果土樣不同A和其他同學(xué)用一樣的土樣若A與其他同學(xué)結(jié)果一樣，A說法正確；培養(yǎng)基污染/操作失誤將A同學(xué)配置的培養(yǎng)基不加土樣情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照若有菌落，培養(yǎng)基有污染；若無菌落，培養(yǎng)基無污染。1.取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。2.應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。3.在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。(2)如何進行無菌操作？P25(1)取樣場所？P23富含有機質(zhì)的pH接近中性的距地表3-8cm的土壤層。二、實驗設(shè)計（一）土壤取樣（二）樣品的稀釋（三）微生物的培養(yǎng)與觀察注意:不同的微生物不同的稀釋度P24和P23圖回答P24思考旁欄的問題注意:不同的微生物不同的培養(yǎng)條件P24濾膜法

樣品中菌數(shù)很低時的常用方法，如測定飲水中大腸桿菌數(shù)量。將一定體積的水用細菌過濾膜過濾后，將濾膜放到伊紅-美藍

鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，根據(jù)菌落數(shù)，通過計算得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。圖中濾膜的孔徑應(yīng)_________(填“大于”“小于”或“等于”)大腸桿菌。相關(guān)鏈接P26課題3分解纖維素的微生物的分離一、基礎(chǔ)知識（一）纖維素和纖維素酶纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。知識回顧：（1）分離尿素分解菌的實驗流程（初步篩選）：土壤取樣—樣品的稀釋—涂布到選擇培養(yǎng)基上（以尿素為唯一氮源）—微生物的培養(yǎng)與觀察鑒定方法：脲酶檢測法（2）分離纖維素分解菌實驗流程（初步篩選）：為了確定得到的是纖維素分解菌還需要：進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶1.對比分離尿素分解菌和纖維素分解菌的實驗流程實驗原理：①土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物生長受到抑制。②在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。二、纖維素分解菌的篩選實驗設(shè)計1.土壤取樣富含纖維素的環(huán)境中P282.選擇培養(yǎng)*（此步可以省略）

選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物?？捎门Ｈ飧嗟鞍纂伺囵B(yǎng)基與之對照。

本配方中的碳源是纖維素，所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖，其他微生物的生長受到抑制，故有選擇作用。這個培養(yǎng)基是否具有選擇作用？3.梯度稀釋:按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進行等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)到106。4.將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的固體培養(yǎng)基上5.挑選產(chǎn)生透明圈的菌落參照課本剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。

產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈，從產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落上挑取部分細菌，并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在30～37℃條件下培養(yǎng)，可獲得較純的菌種。方法一（后置）方法二（前置）步驟優(yōu)點

缺點

顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用

操作繁瑣，加入剛果紅時會使菌落之間發(fā)生混雜操作簡便，不存在菌落混雜問題

產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅在倒平板時就加入剛果紅兩種剛果紅染色法比較P30

為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進行_____________

實驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有______發(fā)酵和______發(fā)酵。纖維素酶測定方法是對纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的________含量進行定量測定。發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶

液體

固體

葡萄糖思考：如何確定分離得到的是纖維素分解菌？（一）培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落：對照組在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到實驗組產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。（二）分離的結(jié)果是否一致：由于在土壤中細菌的數(shù)量遠遠高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。結(jié)果分析與評價比較項目分解尿素的細菌纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基原理培養(yǎng)基類型目的將細菌涂布在只有尿素做氮源的選擇培養(yǎng)基上將細菌接種在纖維素粉做碳源的選擇培養(yǎng)基上固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基篩選菌株增加目的菌的濃度對比分解尿素的細菌和纖維素分解菌的培養(yǎng)基鑒定分解尿素的細菌纖維素分解菌原理現(xiàn)象方法細菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，氨使培養(yǎng)基的pH升高。在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑會變紅。培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)，纖維素被纖維素酶分解后紅色復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。觀察酚紅指示劑是否變紅觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈脲酶檢測法剛果紅染色法研究思路（二）統(tǒng)計菌落數(shù)目微生物計數(shù)通常有：顯微鏡直接計數(shù)（不能區(qū)分死活）利用菌落數(shù)間接計數(shù)1、理論依據(jù)：P22中間恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒y(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。2、注意事項①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30—300的平板上進行計數(shù)。②為使結(jié)果接近真實值，需培養(yǎng)計算出2個或2個以上的平板菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。為檢測外賣糕點的微生物指標(biāo)，食品監(jiān)管人員通過無菌操作，將25g樣品以及225mL磷酸鹽緩沖液一起置于均質(zhì)器中以8000～10000r/min的速度處理1min，獲得均勻稀釋液待用。請回答下列問題：若培養(yǎng)基上平均有40個菌落，則1g樣品中大致的活菌數(shù)量是

個。該結(jié)果往往較實際值偏小，原因是

。有人認(rèn)為，此處統(tǒng)計的菌落總數(shù)實際上僅為糕點樣品中總細菌數(shù)的一部分，理由