枸杞多糖檢測方法研究

枸杞多糖檢測方法研究姓名：王暢2010-8-5枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!內容提要簡介選題背景研究目的和意義研究動態(tài)與趨勢 擬采取的研究方法枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!枸杞多糖簡介來源：茄科植物枸杞的干燥果實枸杞多糖（Lyciumbarbarumpolysaccharide）簡稱LBP，是以阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖與半乳糖醛酸組成的酸性雜多糖同多肽或蛋白質構成的復合多糖為主,還含有中性雜多糖和葡聚糖同多肽或蛋白質構成的復合多糖，是天然的大分子物質。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!ClicktoaddtextClicktoaddtextClicktoaddtextClicktoaddtextClicktoaddtextClicktoaddtextClicktoaddtext白色略帶棕色絮狀，纖維狀無味吸濕性理化性質（一）性狀枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!理化性質（三）常見的化學性質測定試驗結果結論硫酸—苯酚反應陽性含中性糖硫酸—半胱氨酸陽性含半乳糖醛酸卡瑪斯亮藍反應陽性含有蛋白質斐林試劑反應陰性不含還原糖碘—碘化鉀反應陰性不含有淀粉枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!保健食品的區(qū)分代保健食品：以民間的處方，秘方為基礎，根據(jù)原材料的功能推斷保健品的功能，未經嚴格的科學檢測的保健食品第二代保健食品：經過動物實驗和人體實驗證明產品具有某項生理調節(jié)功能，其安全性，功能性都較為可靠第三代保健食品：經過進一步的嚴格實驗及審核，除具備第二代產品的要求外，還要明確功能能因子及其結構，含量，作用機理，類似于藥品的要求枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!蒽酮-硫酸法多糖在濃硫酸作用下先水解成單糖,并迅速脫水生成糠醛或羥甲基糠醛,而生成的糠醛或羥甲基糠醛與蒽酮脫水縮合,形成糠醛的衍生物,反應后溶液呈藍綠色在620nm處有最大吸收，在10~100ug范圍內其顏色的深淺與可溶性糖質量濃度成正比其主要反應式為枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!分子量測定高分子物質的分子量測定有滲透壓法、蒸氣壓法,凝膠色譜法、超速離心法等，但已有的報導大多集中在有機溶劑體系的高分子聚合物如各種塑料產品、人工橡膠等，水體系大分子物質如蛋白質、多糖的分子量測定很少報導單糖組成測定方法主要有TLC、GC、HPLC、CE等,但是關于枸杞多糖柱前衍生化高效液相色譜法測單糖組成還未見報道。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!在多糖的分子量測定方法、尤其是枸杞多糖的測定方法尚未確立標準，無據(jù)可依的情況下，繼承傳統(tǒng)保健理論的同時結合現(xiàn)代科學檢測技術，找出枸杞多糖的最優(yōu)檢測方法，制訂枸杞多糖的檢測標準，為以后的枸杞多糖檢測提煉提供依據(jù)。研究意義枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!枸杞多糖相對分子量的檢測方法蒸汽壓法凝膠過濾法HPLC滲透壓法光散射法粘度法afebcd枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!相對分子量LBP-Ⅰ，LBP-Ⅱ，LBP-Ⅲ，LBPⅣ相對分子量均大于200001LBPA3,LBPB1,LBPC2，LBPC4分子量分別為66000，18000，12000，100002Duan分離得到了4個均一枸杞多糖,其分子量在82～115kDa之間3黃等分離得到三類LbGP，其分子量分別為925000，2148000，2370004王建華通過SDS-不連續(xù)體系凝膠電泳法測得LBP2a分子量為774825枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!組成成分單糖：阿拉伯糖，鼠李糖，木糖，甘露糖，半乳糖，葡萄糖半乳糖醛酸---硫酸-半胱氨酸反應定性蛋白質---斐林-酚法枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!紅外光譜法方法：KBr壓片法波長范圍：4000~650cm-1目的：主要是確定吡喃糖的苷鍵構型及常規(guī)觀察其他官能團。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!紫外檢測在200nm處有多糖的特征吸收峰在260nm處沒有吸收峰，說明不含核酸在280nm處吸收峰不明顯，說明蛋白質含量低枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!擬采取的研究方法及可行性分析(1)通過HPLC法測定枸杞多糖的分子量

可行性分析：嚴邦干曾采用此法測定香菇多糖的分子量，該方法較其他多糖測定法具有迅速，簡便，準確的特點，是目前較為行之有效的測定方法.

(2)通過柱前衍生化高效液相色譜法測定枸杞多糖的單糖組成及其摩爾比

可行性分析：采用3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉酮(PMP)在堿性條件下與單糖定量縮合生成單糖PMP衍生物,用常規(guī)的紫外檢測器和C18烷基鍵合柱,建立適于多糖單糖組成測定的HPLC新方法,達到靈敏、快速、準確、方便和可在線大批量分析的目標。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!HPLC檢測單糖組分和含量直接進樣檢測：柱子：carbohydrate柱氨基鍵合相柱（SpherisorbNH2，HypersilNH2）檢測器：示差檢測器缺點：柱子成本高，氨基鍵合柱易與還原糖生成希夫堿，縮短柱子的壽命示差檢測器靈敏度低，不適用于梯度洗脫枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!柱前衍生化1.糖類衍生的試劑：2-氨基苯甲酸、對甲氧基苯胺、2-氨基吡啶、6-氨基喹啉、對硝基苯甲酰氯和3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉酮(PMP)2.步驟：a.對照品各種單糖標準品Ara，Rha，Xyl，Man，Gal，Glc，F(xiàn)uc按等量混合衍生化b.枸杞多糖水解液衍生化枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!多糖組成分析及計算方法計算校正因子fx=（mx/Ax）/(mfuc/Afuc)計算樣品中各種單糖的比例：m1:m2:m3...mn=A1f1:A2f2:A3f3...AnfnAx,Afuc分別為對照品單糖x衍生物，內標衍生物的峰面積;mx,mfuc分別為對照品單糖x衍生物，內標衍生物的濃度（mmol/L）枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!指紋圖譜的相似度評價將不同產地的枸杞多糖按照相同方法制備供試品溶液，分別進樣記錄色譜圖。比較各產地的枸杞中提取的枸杞多糖，確定了共有的指紋峰，并通過對照品的色譜圖，確定了主要的指紋峰采用由國家藥典委員會制定的中藥色譜相似度評價系統(tǒng)計算軟件分析，將全譜導入后，經譜圖處理，以軟件自動生成的對照圖譜為參照圖譜，多點校正將譜峰進行比較，得到的相似度結果，查看各樣品的相關性和區(qū)別。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!理化性質（二）溶解性

1.溶于水，二甲基亞砜，溶解度隨中性單糖含量的減少而降低

2.不溶于高濃度乙醇，乙醚，丙酮，氯仿，正丁醇等有機溶劑枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!選題背景（一）生理活性：增強免疫、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降血糖血脂、保肝，可作為第三代功能性食品的功能因子隨著生活水平的提高，由以治病為主向防病為主的觀念轉變，為功能食品的開發(fā)帶來了良好機遇。功效明確的枸杞多糖符合新一代功能食品的要求，枸杞多糖的研究將推動枸杞產品向更高層次發(fā)展枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!選題背景（二）多糖一般的檢測方法概括如下:1將無紫外吸收的多糖與顯色劑顯色，產生紫外吸收，從而用紫外法定量,如硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法，3、5-二硝基水楊酸比色法測定總糖。2直接測糖法，折光法測定多糖，主要是水溶性糖。原理是用折射計測得的折射指數(shù)值(糖度)代表著溶液中可溶性物質的含量高低，若溶液中的溶質是糖物質或以糖為主的糖物質,則折射指數(shù)值就反映著糖含量的高低。3多糖檢測的HPLC法也是基于上面的思路，要么衍生化后使用紫外或熒光檢測器，要么使用通用型檢測器，這類檢測器主要有示差檢測器。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!選題背景（三）質量不易控制枸杞多糖是一個水溶性的大分子物質,不能如小分子物質那樣,通過熔點測定、元素分析,四大光譜等鑒定后,制定質量標準。

分子量測定決定了枸杞多糖的生物活性，分子量過大不易透過細胞膜，影響活性，分子量小一般是沒有活性的，因此分子量數(shù)據(jù)可以作為枸杞多糖質量標準的重要指標。多糖的單糖組成分析是進行多糖質量控制和獲取多糖基本信息的重要環(huán)節(jié)。單糖組分及其摩爾比可以作為質量標準的重要指標。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!研究目的

建立一個枸杞多糖的質量標準—定量鑒別方法

：(1)通過HPLC法測定枸杞多糖的分子量(2)通過柱前衍生化高效液相色譜法測定枸杞多糖的單糖組成及其摩爾比枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!研究動態(tài)常見的檢測方法化學方法物理方法苯酚-硫酸法，高碘酸氧化，Smith降解，甲基化分析比旋光儀、紫外分光光度計、紅外光譜儀、液相色譜儀、氣相色譜儀、質譜、核磁共振從所得到的數(shù)據(jù)來看，國內對枸杞多糖的分離純化，含量測定分離提取、分級純化組分鑒定及其分子量、結構、基本性質等方面有大量成果報道,但研究者所得出的枸杞多糖分子量、組成、結構、等研究結果各不相同枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!分子量的測定方法凝膠過濾法將已知分子量的葡聚糖標準品進行凝膠層系，洗脫收集，用硫酸-蒽酮法檢測多糖，分別求得相應的洗脫體積Ve

用藍色葡聚糖上柱求得外水體積Vo.以Ve/Vo為縱坐標，lgMr為橫坐標，得到分子量的標準曲線。3.取枸杞多糖進行一樣的操作求得Ve/Vo查標準曲線可求得多糖的分子量枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!多糖中單糖的組成及其摩爾比的測定方法對微量物質的檢出體現(xiàn)了高分辨率的特點，但是所測樣品具有一定的揮發(fā)性，衍生化操作煩雜、費時GC分離速度快，分離效果好，重現(xiàn)性好，不破壞樣品，前處理簡單HPLC操作方便，靈活但是靈敏度不高，對含量微小的物質不易檢出，且無法確定單糖摩爾比TLC枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!枸杞多糖中單糖的組成及其摩爾比名稱單糖組成摩爾比LBP-6Ara：Rha：Xyl：Man：Gal：Glc4.83:0.17：0.23：019:1:1LBP-ⅠAra：Rha：Xyl：Man：Gal：Glc1:3.15:0.48:0.84:5.17:4.13LBP-ⅡAra：Rha：Xyl：Man：Gal：Glc1:3.57:0.02:0.22:1.53:1.03LBP-ⅢAra：Rha：Xyl：Man：Gal：Glc2.43:4.22:0.95:0.38:0.38:1LBP-ⅣAra：Rha：Xyl：Man：Gal：Glc2.53:3.57:1.33:0.29:1:0.86蛋白多糖GAra：Rha：Xyl：Man：Gal：Glc2.8:0.2:0.08:0.2:2.6:1.0LBP-VAra：Gal：Glc2.5:1.0:10LBNPAra：Xyl：Man：Gal：Glc1.0：10.0：1.0:6.7:4.0LBPC2Xyl：Rha：Man8.8：2.3：1LBPC4Glc枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!枸杞多糖常見官能團紅外光譜解析枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!

發(fā)展趨勢

1)枸杞多糖結構與活性、功能的關系方面得到明確，市場上將有更多以枸杞多糖為主要成分的新藥，并且都是采用現(xiàn)代生物技術，從分子、細胞、器官等分子生物水平上研究活性因子的結構、含量及其作用機理，準確評價其功效。2）因為有統(tǒng)一的質量標準，明確的結構證明其新穎性，創(chuàng)新性，實用性，中國除了主要圍繞枸杞多糖的提取方法、純化工藝、分離技術、制備治療脂肪肝胃潰瘍藥物應用等專利以外，還將得到更多關于枸杞多糖的組分結構、作用機制、藥理功效等方面的專利。枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!HPLC法測分子量色譜柱：proteinkw-804檢測器：示差折光檢測器溫度：室溫流動相：醋酸鈉緩沖溶液以不同分子質量的標準右旋糖酐分子的分離保留時間與相應的分子質量建立分子質量對數(shù)值繪制標準坐標曲線，待測得枸杞多糖經分離后得到不同分子質量峰的保留時間值，通過標準曲線即可計算枸杞多糖的分子質量分布（由分子質量計算輔助軟件自行運行）

枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!柱前衍生化HPLC測枸杞多糖中的單糖組成前處理：1.樣品水解：a.硫酸適合于中性糖的水解b.三氟醋酸適用于植物細胞壁多糖，糖蛋白，糖胺聚糖的水解（1）多糖的水解常用硫酸，其用量不易控制，過多會導致多糖樣品的炭化，而產生雜質峰，過少又會水解不完全。本法采用三氟醋酸可較好的實現(xiàn)多糖的水解。（2）實驗中要盡量減少樣品的水分含量，以免影響衍生化的結果，在衍生化時，適當加大無水醋酸酐的用量也可減小水分的影響。

枸杞多糖檢測方法研究共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!柱前衍生化反應PMP的優(yōu)點：PM