感染性疾病診斷技術(shù)新進(jìn)展

感染性疾病診斷技術(shù)新進(jìn)展感染性疾?。喝蚬餐奶魬?zhàn)2016年，5歲以下兒童死亡的三大主要原因是呼吸道感染、新生兒早產(chǎn)并發(fā)癥以及新生兒因出生窒息和創(chuàng)傷而導(dǎo)致的新生兒腦病，總共導(dǎo)致了1億8千萬(wàn)人死亡在全球范圍內(nèi)，2016年死亡率的前五大原因主要是心血管疾病;腹瀉、下呼吸道感染和其他常見(jiàn)感染性疾病;腫瘤;新生兒疾病;HIV/艾滋病和肺結(jié)核血流感染發(fā)展迅速，死亡率高院內(nèi)死亡率達(dá)16%，比其他診斷的死亡率高8倍以上住院時(shí)間延長(zhǎng)，住院費(fèi)用高1990年-2003年間，敗血癥相關(guān)住院時(shí)間增長(zhǎng)了153%，年均增長(zhǎng)6%感染性疾病—嚴(yán)重感染導(dǎo)致住院時(shí)間延長(zhǎng)感染性疾病—增加耐藥菌感染的抗菌藥物治療花費(fèi)傳統(tǒng)臨床微生物檢測(cè)傳統(tǒng)微生物檢測(cè)方法：分離培養(yǎng)+抗原抗體檢測(cè)+普通PCR檢測(cè)缺點(diǎn)：細(xì)菌無(wú)法生長(zhǎng)（應(yīng)用抗生素后）病毒、真菌、寄生蟲(chóng)難以培養(yǎng)多種細(xì)菌混合很難分離鑒定厭氧菌經(jīng)常被忽略無(wú)法準(zhǔn)確定量局限性微生物實(shí)驗(yàn)室的挑戰(zhàn)硬件設(shè)施和人員的技術(shù)水平、診斷水平等參差不齊微生物專家需多年的經(jīng)驗(yàn)培養(yǎng)

傳統(tǒng)鑒定能力有限

人力資源普遍不足平均每1000床位<5位臨床微生物專家

<2012上海國(guó)際醫(yī)院感染控制論壇>臨床要求更快檢驗(yàn)時(shí)效更高的工作強(qiáng)度臨床微生物專家與臨床醫(yī)師對(duì)稱、溝通有障礙較少涉略臨床用藥指引政策,評(píng)鑒需求增多抗菌藥物臨床應(yīng)用管理辦法（衛(wèi)生部令第84號(hào))三級(jí)綜合醫(yī)院評(píng)審標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施細(xì)則耐藥菌株逐年上升更多藥物敏感性報(bào)告需求微生物實(shí)驗(yàn)室如何面對(duì)挑戰(zhàn)?更加標(biāo)準(zhǔn)化更高效率更主動(dòng)的信息交流更高質(zhì)量微生物檢測(cè)新技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)敏感快速特異準(zhǔn)確多種病原體同時(shí)檢測(cè)（multiplex）高通量型別的鑒定MALDI-TOFGeneXpertFilmArray基因芯片檢測(cè)高通量測(cè)序技術(shù)（NGS）有應(yīng)用前景的微生物檢測(cè)技術(shù)FilmarrayMALDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOFMS）是最新開(kāi)發(fā)的鑒定固體培養(yǎng)基上分離的病原菌的方法原理：是在高真空系統(tǒng)中將樣本分子離解成帶電的離子，并通過(guò)對(duì)生成離子的質(zhì)量和強(qiáng)度的測(cè)定，而進(jìn)行樣品成分和結(jié)構(gòu)分析的方法BrukerABI島津MALDI-TOFMS-基本原理激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量傳遞給生物分子，而電高過(guò)程中將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到生物分子或從生物分子得到質(zhì)子，而使生物分子電離的過(guò)程X軸：M/ZY軸：相對(duì)強(qiáng)度很直觀的看到整個(gè)分子的質(zhì)譜全貌質(zhì)譜信號(hào)：分子離子峰、碎片離子峰、亞穩(wěn)離子峰、重排離子峰等MALDI-TOFMS蛋白質(zhì)指紋特征基于譜圖模式比對(duì)的細(xì)菌鑒定2022/11/17MALDI-TOF鑒定流程MALDI-TOFvsVITEK2微生物培養(yǎng)（withoutMALDI)微生物培養(yǎng)（withMALDI)Day1接種平板培養(yǎng)；PCT接種平板培養(yǎng)，PCTDay2革蘭染色，直接鏡檢；配置鑒定藥敏菌懸液上機(jī)；及藥敏試驗(yàn)MS檢測(cè)1~3分鐘鑒定出細(xì)菌報(bào)告臨床；同時(shí)有選擇做藥敏Day3ID&AST臨床報(bào)告藥敏報(bào)告縮短報(bào)告TAT（24h）TAT時(shí)間——將數(shù)天數(shù)小時(shí)降低至數(shù)分鐘傳統(tǒng)VSMALDI-TOFMALDI-TOF用于血培養(yǎng)檢測(cè)應(yīng)用MALDI-TOFMS降低治療成本將快速識(shí)別和易感技術(shù)與抗菌管理結(jié)合起來(lái)，大大改善了最佳治療的時(shí)間，并降低了住院時(shí)間和總成本MALDITOF-MS優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)單、快速一個(gè)樣品從獲得單克隆開(kāi)始，到樣本處理、譜圖采集和獲得鑒定結(jié)果可以在幾分鐘之內(nèi)完成，操作簡(jiǎn)單、快速、通量高靈敏度高使用經(jīng)久耐用且性能可靠的布魯克?道爾頓的MALDI-TOF系列質(zhì)譜儀，可以實(shí)現(xiàn)高重現(xiàn)性的快速可靠的檢測(cè)準(zhǔn)確度好MALDI-TOF獲得的蛋白指紋圖譜用作模式匹配，匹配分值用作鑒定結(jié)果的分級(jí)和歸類，軟件對(duì)所得的圖譜進(jìn)行歸一化分析，其精巧的算法保證了鑒定的精確性缺點(diǎn)：MALDI-TOFMS檢測(cè)的次代培養(yǎng)物，從血培養(yǎng)陽(yáng)性到鑒定還需要24-36hr無(wú)法提供AST實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)方法：SYBRGreenI

TaqMan

MolecularBeacon優(yōu)勢(shì)：擴(kuò)增、檢測(cè)在一個(gè)實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)系統(tǒng)中即時(shí)完成，快速、特異、敏感，最有發(fā)展前景檢測(cè)對(duì)象：真菌、結(jié)核分枝桿菌、淋病奈瑟氏菌、HBV、HCV、HIV、解脲支原體、巨細(xì)胞病毒、EB病毒等20GeneXpert檢測(cè)原理：應(yīng)用microfluidiccartridges（微流樣品管）中的超聲裝置破碎原始樣品釋放內(nèi)含的DNA，并在各小室間轉(zhuǎn)移并洗滌、純化和濃縮DNA，在定量PCR反應(yīng)管中進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)GeneXpert技術(shù)整合的微流控技術(shù)儀器平臺(tái)試劑盒運(yùn)行程序和對(duì)照GeneXpert檢測(cè)流程2010年12月世界衛(wèi)生組織宣布認(rèn)可并向全球推薦使用XpertMTB/RIF技術(shù)用于結(jié)核病及利福平耐藥的檢測(cè)在2個(gè)小時(shí)之內(nèi)直接檢出病人痰標(biāo)本中是否有結(jié)核分枝桿菌以及利福平耐藥性GeneXpert技術(shù)GeneXpert可檢測(cè)的其他項(xiàng)目檢測(cè)難辨梭菌毒素用于抗生素相關(guān)性腹瀉診斷耐藥菌株的檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因、碳青霉烯類耐藥基因、萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌基因病毒及載量EV、Flu、H1N1、HIV-1、HCV等GeneXpert優(yōu)點(diǎn)：全自動(dòng)的工作流程整合了裂解、提取、擴(kuò)增和實(shí)時(shí)檢測(cè)的過(guò)程快速獲得結(jié)果整合的超聲裂解裝置以快速獲得核酸特殊的PCR反應(yīng)管設(shè)計(jì)大大縮短PCR循環(huán)時(shí)間自動(dòng)解讀結(jié)果即時(shí)檢測(cè)無(wú)需批次檢測(cè)隨時(shí)進(jìn)行任意檢測(cè)即插即用無(wú)需日常維護(hù)通過(guò)整合LIS系統(tǒng)即時(shí)獲得結(jié)果Filmarray基本原理兩種具有獨(dú)特?cái)U(kuò)增產(chǎn)物序列的不同靶標(biāo)的熔解曲線樣本裂解、提純、擴(kuò)增、檢測(cè)一步到位節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間，縮短TAT48小時(shí)1小時(shí)報(bào)告覆蓋80%常見(jiàn)病原微生物提供萬(wàn)古霉素等抗生素耐藥基因情況Filmarray檢測(cè)統(tǒng)一平臺(tái)下的多種檢測(cè)解決方案測(cè)試面廣廣泛的臨床研究FilmarrayMEPanel與培養(yǎng)或PCR對(duì)比，F(xiàn)A對(duì)于腦脊液標(biāo)本的檢測(cè)9種病原體敏感性達(dá)100%；2種病原體一致性達(dá)85%以上

我院2017年Filmarray與DFA檢查FilmarrayDFA法陽(yáng)性率：58.02%陽(yáng)性率：16.33%多重PCR用于微生物檢測(cè)大多數(shù)呼吸道感染的臨床表現(xiàn)是非特異的，可能由分枝桿菌、病毒、嗜肺軍團(tuán)菌、衣原體和支原體等病原微生物中的一種或幾種感染引起。多重PCR在一個(gè)反應(yīng)管中加入了多對(duì)引物來(lái)擴(kuò)增不同靶基因的核苷酸片斷，從而篩選臨床標(biāo)本中可能存在的多種病原菌。34高通量基因芯片用于微生物檢測(cè)35基因芯片用于多種耐藥基因的檢測(cè)可以檢測(cè)革蘭陽(yáng)性菌常見(jiàn)的90種耐藥基因此平臺(tái)可用于基礎(chǔ)研究、食品安全和耐藥監(jiān)測(cè)高通量測(cè)序（NGS）邊合成邊測(cè)序，通過(guò)捕捉新生成的末端的標(biāo)記來(lái)確定DNA的序列DNA文庫(kù)的制備連接接頭測(cè)序數(shù)據(jù)分析應(yīng)用：基因組/宏基因組測(cè)序新一代高通量測(cè)序技術(shù)使得微生物基因組學(xué)獲得長(zhǎng)足發(fā)展高通量測(cè)序（NGS）NGS在臨床領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展高通量測(cè)序（NGS）NGS檢測(cè)病原體的優(yōu)勢(shì)當(dāng)前應(yīng)用的能快速診斷感